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汉防己甲素联合顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞株增殖与凋亡的影响

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汉防己甲素联合顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞株增殖与凋亡的影...

作者：许容容南京医科大学

学位级别：硕士

背景:肺癌是当今世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一;其中小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)约占肺癌总数的 15%～20%。SCLC 的发生发展与吸烟、大气污染关系密切,主要特征为恶性程度高,易发生早期转移及复发,预后较差,但... 详细信息

背景:肺癌是当今世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一;其中小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)约占肺癌总数的 15%～20%。SCLC 的发生发展与吸烟、大气污染关系密切,主要特征为恶性程度高,易发生早期转移及复发,预后较差,但对放化疗敏感。以铂类为基础的化疗是SCLC患者一线治疗方案,然而大剂量使用化疗药物副作用极大且容易产生耐药,导致疗效降低甚至治疗失败,因此制定低毒高效的化疗方案至关重要。汉防己甲素(tetrandrine,TET)又名粉防己碱,是一种从防己科植物粉防己的块根中分离提取的双苄基异喹啉类生物碱,具有广泛的药理学作用,如抗炎、抗高血压、抗心绞痛、免疫调节等作用。近年来,有研究发现汉防己甲素在抗肿瘤方面有广阔运用前景,可有效诱导多种肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖,并且可以增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,逆转肿瘤细胞耐药。因此,本研究旨在探讨TET联合顺铂(cisplatin,DDP)对人小细胞肺癌NCI-H446细胞株增殖与凋亡的影响,以及TET能否增强顺铂对NCI-H446细胞的敏感性,并且探讨其中相关的分子生物学机制,为小细胞肺癌患者的治疗提供新的策略和依据。方法:人小细胞肺癌NCI-H446细胞常规培养于含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、100 U/ml青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基中;首先测定单药TET及DDP的半抑制浓度(Inhibitory Concentration 50,IC50),然后选取低浓度TET联合原DDP浓度梯度,测定并计算TET联合DDP的IC50,等效线图解法(isobologram analysis)判断两者之间是否存在协同效应;后续实验分为对照组、单药 TET(1 μg/ml)组、单药 DDP(2.5 μg/ml)组、TET(1 μg/ml)联合DDP(2.5 μg/ml)组;各组分别加入或不加入活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)与药物共同孵育48h后,运用CCK-8(cell counting kit-8,CCK-8)法测定各组细胞活力;EdU染色法观察各组细胞增殖情况;Hoechst染色法检测各组细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况以及不同时间点细胞内ROS水平的变化;蛋白印迹法(western blot)检测各组磷酸化 Akt、Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3/pro-caspase-3 等蛋白表达水平变化。结果:(1)TET及DDP均可呈浓度依赖性地抑制NCI-H446细胞的活力,TET联合顺铂后对NCI-H446细胞活力的抑制作用进一步增强;TET与DDP联合后的IC50较单药DDP组的IC50显著降低;EdU染色结果提示,相比单药TET及DDP组,TET与DDP联合组增殖细胞数明显降低;Hoechst染色及流式细胞术结果显示TET与DDP联合组凋亡细胞数进一步增多;同时,流式细胞术结果显示,TET与DDP联合组可呈时间依赖性地诱导肿瘤细胞产生ROS,16 h达峰值,随后降低;运用TET、DDP及TET与DDP联合刺激细胞16h后,相比其他各组,TET与DDP联合组可以显著上调胞内ROS水平;western blot结果提示,TET与DDP联合组可显著下调Akt磷酸化水平,上调促凋亡蛋白Bax水平、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著增加;(2)当加入ROS清除剂NAC与TET组、DDP组及TET与DDP联合组共同孵育后,上述抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的效应被部分消除。结论:TET可增加DDP对NCI-H446细胞的敏感性,进一步增强DDP诱导NCI-H446细胞凋亡、抑制细胞增殖的效应;其作用机制可能是通过上调胞内ROS水平,一方面下调Akt的磷酸化水平,影响PI3K/Akt信号通路,抑制肿瘤细胞增殖;同时上调促凋亡蛋白Bax水平,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2表达,上调caspase-3蛋白水平,激活线粒体凋亡通路,最终诱导肿瘤细胞凋亡。

关键词：汉防己甲素顺铂小细胞肺癌凋亡 ROS

Lnc CASC19靶向miR-216a-5p调控肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

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中国老年学杂志 2021年第16期41卷 3517-3521页

作者：陈意许容容南京医科大学附属常州第二人民医院呼吸与危重症医学科江苏常州213000

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)癌易感性候选基因(CASC)19靶向miR-216a-5p对肺癌细胞生物学特性机制研究。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌细胞内CASC19和miR-216a-5p表达。培养肺癌细胞SPC-A-1,将细胞分为NC组、si... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)癌易感性候选基因(CASC)19靶向miR-216a-5p对肺癌细胞生物学特性机制研究。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌细胞内CASC19和miR-216a-5p表达。培养肺癌细胞SPC-A-1,将细胞分为NC组、si-con组、si-CASC19组、miR-con组、miR-216a-5p组、si-CASC19+anti-miR-con组、si-CASC19+anti-miR-216a-5p组。采用qRT-PCR检测miR-216a-5p和CASC19 mRNA的表达水平;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、CDK4、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-216a-5p和CASC19关系。结果与正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺癌细胞H1299、A549、SPC-A-1、NC-H446中miR-216a-5p的表达水平显著下降,CASC19的表达水平显著上升(均P<0.05);干扰CASC19或过表达miR-216a-5p能抑制肺癌细胞SPC-A-1增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。CASC19靶向负调控miR-216a-5p的表达,下调miR-216a-5p可逆转干扰CASC19对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用(P<0.05)。结论CASC19可有限抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与miR-216a-5p有关。

关键词： CASC19 miR-216a-5p 肺癌增殖迁移侵袭

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43例鹦鹉热衣原体肺炎临床特征

中国感染控制杂志 2023年第6期22卷 688-694页

作者：许容容张蔷韩淑华陆远袁成东南大学附属中大医院呼吸与危重症医学科江苏南京210009

目的探讨鹦鹉热衣原体肺炎的临床特征及治疗方案。方法回顾性分析某院2018年3月—2022年3月经宏基因组二代测序(mNGS)确诊的43例鹦鹉热衣原体肺炎患者的临床资料。结果 43例患者平均年龄为55.80岁,男性23例,女性20例;有明确禽类接触史... 详细信息

目的探讨鹦鹉热衣原体肺炎的临床特征及治疗方案。方法回顾性分析某院2018年3月—2022年3月经宏基因组二代测序(mNGS)确诊的43例鹦鹉热衣原体肺炎患者的临床资料。结果 43例患者平均年龄为55.80岁,男性23例,女性20例;有明确禽类接触史的18例,发病多见于冬春季。临床表现以发热最常见,可伴有咳嗽、肌肉酸痛、畏寒等症状。28例(65.12%)患者血常规白细胞计数(WBC)正常,21例中性粒细胞计数(N)升高,32例淋巴细胞计数(L)降低;43例患者C反应蛋白(CRP)升高;26例丙氨酸转氨酶(ALT)升高,32例天冬氨酸转氨酶(AST)升高,33例乳酸脱氢酶(LDH)升高。15例患者存在呼吸衰竭,9例患者进展为重症肺炎。胸部高分辨率计算机体层成像(HRCT)主要表现为单侧肺下叶实变影,右肺多见,13例患者合并胸腔积液。气管镜下主要表现为肺泡炎,分泌物少。43例患者mNGS检测出鹦鹉热衣原体序列数范围为1~21 269。40例患者接受了含有喹诺酮类抗菌药物的治疗方案,病原体明确后调整为多西环素、米诺环素及替加环素。43例患者住院时间中位数为13.00 d,均好转出院,无死亡病例。结论鹦鹉热衣原体肺炎患者多以高热起病,累及肺部,有禽类接触史,mNGS检查能够快速准确地检出病原体,治疗首选多西环素,喹诺酮类抗菌药物治疗亦有效,部分患者进展为重症病例,但总体预后良好。

关键词：鹦鹉热衣原体社区获得性肺炎宏基因组二代测序多西环素

β_2受体激动剂:用于治疗慢性阻塞性肺病的支气管舒张剂

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药学进展 2016年第5期40卷 363-369页

作者：许容容解卫平南京医科大学第一附属医院呼吸内科江苏南京210029

慢性阻塞性肺病(COPD)是目前世界范围内发病率和病死率持续上升的常见慢性气道疾病。依据最新的2015年版GOLD指南,对于稳定期COPD的治疗目标是缓解症状和降低远期急性加重风险;支气管舒张剂可通过改变气道平滑肌张力,舒张支气管,改善气... 详细信息

慢性阻塞性肺病(COPD)是目前世界范围内发病率和病死率持续上升的常见慢性气道疾病。依据最新的2015年版GOLD指南,对于稳定期COPD的治疗目标是缓解症状和降低远期急性加重风险;支气管舒张剂可通过改变气道平滑肌张力,舒张支气管,改善气流受限,缓解呼吸困难,提高患者生活质量,是治疗稳定期COPD的一线基础药物。而β_2受体激动剂是临床上最常用的支气管舒张剂,简介β_2受体激动剂的作用机制,主要对短效、长效和不同给药途径的β_2受体激动剂用于治疗COPD的临床研究进展作一综述。

关键词： β2受体激动剂慢性阻塞性肺病支气管舒张剂临床研究

水囊结合缩宫素引产对足月妊娠引产孕妇经阴道分娩率与母婴安全性的影响研究

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2023年第10期 159-162页

作者：董婷婷许容容武宣县人民医院广西来宾545900

探讨水囊法联合催产法对足月怀孕妇女进行引产的影响。方法选取本院2020年1月至2022年12月实施孕足月妊娠引产的80名产妇作为研究对象,按治疗方式分为两组:治疗组与对照组。对照组40名产妇,均使用米索前列醇联合催产素进行引产术;对照... 详细信息

探讨水囊法联合催产法对足月怀孕妇女进行引产的影响。方法选取本院2020年1月至2022年12月实施孕足月妊娠引产的80名产妇作为研究对象,按治疗方式分为两组:治疗组与对照组。对照组40名产妇,均使用米索前列醇联合催产素进行引产术;对照组40例,均以水囊-催产素联合引产法为基础。将两组的引产效果进行比较。结果与对照组相比,治疗组孕产妇并发症少,宫缩活动更佳,宫颈成熟度高,引产至分娩时间短,总产程时间少,出血量少。水囊法联合催产素引产,可提高宫颈成熟度,缩短产程,减少出血,是引产足月孕妇的有效方法。结论对于怀孕足月分娩的孕妇,使用水囊结合催产素方案进行引产,可以提高宫颈的成熟度,从而减少引产至临产时间、引产至分娩时间、产程时间、住院总时间。减少母婴不良事件的发生,使阴道分娩率和满意度得到同步提升。

关键词：孕足月分娩水囊缩宫素引产

产妇宫腔球囊压迫止血术对剖宫产术后出血量的影响

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2023年第7期 81-84页

作者：许容容董婷婷武宣县人民医院广西来宾545900

以剖宫产术后出血产妇为例,探究宫腔球囊压迫止血的效果。方法随机选取到院产妇170例,均出现剖宫产术后出血,研究在2020年6月开始,结束在2021年6月,遵循1:1原则随机分组,各85例,记为对照组以B-lynch缝合法止血,记为观察组以宫腔球囊压... 详细信息

以剖宫产术后出血产妇为例,探究宫腔球囊压迫止血的效果。方法随机选取到院产妇170例,均出现剖宫产术后出血,研究在2020年6月开始,结束在2021年6月,遵循1:1原则随机分组,各85例,记为对照组以B-lynch缝合法止血,记为观察组以宫腔球囊压迫止血法,对比不同方法的效果。结果观察组治疗时间(18.73±5.51)min、手术操作时间(14.01±2.97)min、填充物滞留时间(13.88±2.67)min与住院时间(7.16±2.25)d少于对照组的(30.13±3.23)min、(22.44±3.69)min、(23.66±4.09)min、(10.33±3.17)d,且观察组术后24h血红蛋白水平(101.12±9.83)g/L高于对照组(85.33±8.72)g/L(P<0.05);观察组24h止血量、止血时间均少于对照组(P<0.05);观察组并发症更少(4.71%),止血率更高(88.27%),子宫动脉结扎率更低(29.41%),优于对照组(22.35%、64.71%、70.59%)(P<0.05)。结论采用球囊压迫止血法干预有效缩短患者治疗时间,改善24h血红蛋白水平,提升止血率,减少子宫动脉结扎率,值得临床应用与推广。

关键词：宫腔球囊压迫止血剖宫产术后出血 B-lynch缝合法

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全外显子组测序技术及其在肺癌研究中的进展

国际呼吸杂志 2015年第19期35卷 1510-1512页

作者：许容容解卫平南京医科大学第一附属医院呼吸内科 210029

全外显子组是人类全部外显子组区域的总称，全外显子组测序又称为定向外显子组捕获，可选择性地对人类基因组的编码区进行测序，以发现常见疾病相关的异常基因。因为全外显子组测序相比人类全基因组测序成本低、效率高，目前在疾病诊断... 详细信息

全外显子组是人类全部外显子组区域的总称，全外显子组测序又称为定向外显子组捕获，可选择性地对人类基因组的编码区进行测序，以发现常见疾病相关的异常基因。因为全外显子组测序相比人类全基因组测序成本低、效率高，目前在疾病诊断中应用越来越多。本文主要对当前临床上全外显子组测序技术及其在肺癌研究中的应用等问题进行综述。

关键词：全外显子组全外显子组测序肺癌

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肺转移性副神经节瘤1例报告及文献复习

吉林大学学报（医学版） 2022年第2期48卷 505-512页

作者：许容容陆远周建明彭丹丹朱晓莉韩淑华东南大学附属中大医院呼吸与危重症医学科江苏南京210009 东南大学附属中大医院胸心外科江苏南京210009 东南大学附属中大医院影像科江苏南京210009

目的:探讨1例少见的肺转移性副神经节瘤(PGL)的诊治过程,分析PGL的病因、临床表现、影像学表现以及治疗方案等,为临床PGL的诊治提供参考。方法:收集1例肺转移性PGL患者的临床、影像学和病理资料等,分析PGL的临床表现、影像学表现及病理... 详细信息

目的:探讨1例少见的肺转移性副神经节瘤(PGL)的诊治过程,分析PGL的病因、临床表现、影像学表现以及治疗方案等,为临床PGL的诊治提供参考。方法:收集1例肺转移性PGL患者的临床、影像学和病理资料等,分析PGL的临床表现、影像学表现及病理特征,结合近年来PGL相关文献,总结PGL规范的诊治方案。结果:患者,女性,57岁,因“体检发现左肺结节10 d”入院,患者10 d前在外院体检胸部CT提示左肺上叶及下叶类圆形软组织密度影,后至本院进一步诊治,患者2018年曾在外院行颈静脉球体瘤手术治疗,入院后完善PET-CT检查提示左肺下叶结节恶性可能,左肺上叶结节代谢不高,不除外恶性病变,胸心外科会诊后予以全麻下行“胸腔镜下左肺上叶、左肺下叶结节楔形切除术+淋巴结采样术”,术中快速病理提示富于血窦的肿瘤。术后病理免疫组织化学检查,膜糖蛋白56(CD56)(+)、嗜铬素A(CgA)(+)、Ki67(+约2%)、PanCK(-)、孕激素(PR)(-)、酸性钙结合蛋白(S-100)(散在+)、突触素(Syn)(+),甲状腺转录因子1(TTF1)(-)和细胞程序性死亡配体1[PD-L1(22C3)](约40%的肿瘤细胞胞浆弱阳性)。结合临床病史及免疫组织化学检查结果符合PGL。手术标本应用高通量测序法(NGS)检测425个基因的外显子和融合相关内含子等,结果未提示有肿瘤特有突变及胚系突变,仅检测到药物代谢相关酶类多态性基因突变,包括胞苷脱氨酶基因(CDA)、二氢嘧啶脱氨酶基因(DPYD)、核苷酸切除修复交叉互补基因(ERCC2)、谷胱甘肽硫转移酶M1基因(GSTM1)、亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)和X射线修复交叉互补基因1(XRCC1);未检测到高度微卫星不稳定(MSI-H);肿瘤突变负荷(TMB)为0个突变/100万个碱基(Mb)。患者术后恢复尚可,目前考虑至外院进一步化疗。结论:PGL是少见的恶性神经内分泌肿瘤,临床表现不典型,患者常以转移病灶的表现就诊,并发肺部转移者相对少见,临床容易误诊,确诊有赖于病理检查。

关键词：副神经节瘤神经内分泌肿瘤颈静脉球体瘤肺转移瘤

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帕夫林通过抑制NLRP3形成减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化

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南京医科大学学报（自然科学版） 2017年第7期37卷 799-803,841页

作者：许容容孔辉徐健陈雪松朱晓莉解卫平东南大学附属中大医院呼吸内科江苏南京210009 南京医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科江苏南京210029

目的:探讨帕夫林(paeoniflorin,PA)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法:将60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组(sham operation,SH)、对照组+帕夫林组(SH+PA)、模型组(BLM)、模型组+帕夫林(B... 详细信息

目的:探讨帕夫林(paeoniflorin,PA)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化的影响及其作用机制。方法:将60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组(sham operation,SH)、对照组+帕夫林组(SH+PA)、模型组(BLM)、模型组+帕夫林(BLM+PA);气管内滴注博莱霉素(2 mg/kg)建立小鼠肺纤维化模型,对照组气管内滴注生理盐水,从造模当天开始,SH+PA、BLM+PA组小鼠每日给予50 mg/kg帕夫林灌胃,SH、BLM组小鼠每日给予等量生理盐水灌胃;在造模第14天处死小鼠,留取小鼠肺组织。记录各组小鼠体重变化;统计各组小鼠生存率;HE染色法观察小鼠肺组织纤维化程度;肺组织匀浆羟脯氨酸定量评估肺组织胶原蛋白含量;ELISA法测定肺组织匀浆中白介素(interleukin,IL)-18、IL-1β含量;Western blot法检测肺组织匀浆中NLRP3、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达水平。结果:与对照组相比,帕夫林可显著提高小鼠生存率;经帕夫林治疗14 d后,小鼠肺组织纤维化病变较模型组减轻;小鼠肺组织胶原蛋白含量显著降低(P<0.05);小鼠外周血及肺组织中IL-18、IL-1β含量较模型组相比明显减少(P<0.05);与模型组相比,NLRP3蛋白水平以及TGF-β1蛋白表达水平显著下调(P<0.05)。结论:帕夫林可减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度,其作用可能是通过抑制NLRP3炎症小体的形成发挥的。

关键词：帕夫林肺纤维化 NLRP3 博莱霉素