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CASK基因敲除对小鼠糖代谢的影响及机制探讨

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CASK基因敲除对小鼠糖代谢的影响及机制探讨

作者：袁清照东南大学

学位级别：硕士

目的:我们前期研究表明,钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmod ulin-dependent serine protein kinase,CASK)在胰岛β细胞中高表达且参与了胰岛素分泌释放过程,但其具体作用机制及在2型糖尿病中的作用尚不清楚。为在动物水... 详细信息

目的:我们前期研究表明,钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmod ulin-dependent serine protein kinase,CASK)在胰岛β细胞中高表达且参与了胰岛素分泌释放过程,但其具体作用机制及在2型糖尿病中的作用尚不清楚。为在动物水平上验证前期实验结果和深入研究CASK的作用,本研究通过构建条件性胰岛β细胞CASK基因敲除(βCASK KO)小鼠动物模型,对CASK在胰岛β细胞中的功能和对糖代谢的影响进行初步探索。方法:1.使用Cre-loxp基因打靶系统和他莫昔芬诱导构建条件性β细胞CASK基因敲除小鼠;2.对正常饮食βCASK KO小鼠进行代谢表型分析;3.建立高脂饮食诱导的2型糖尿病模型小鼠;4.对高脂饮食βCASK KO小鼠进行代谢表型分析。结果:1.使用Cre-loxp基因打靶系统和他莫昔芬诱导后,qPCR、Western blot、免疫荧光实验结果证实条件性胰岛β细胞CASK基因敲除小鼠构建成功;2.正常饮食喂养至第16周,βCASK KO小鼠与对照组小鼠相比,体重、血糖、糖耐量、胰岛素敏感性、血清胰岛素水平、GSIS功能以及胰岛大小形态没有明显差异;3高脂饮食喂养小鼠至第16周,体重、血糖、血清胰岛素水平、糖耐量、胰岛素敏感性结果提示2型糖尿病模型小鼠造模成功;4.高脂饮食喂养至第16周,βCASK KO小鼠与对照组小鼠相比,血糖降低、糖耐量改善、胰岛素敏感性增强、高胰岛素血症缓解。结论:1.正常饮食情况下,敲除CASK对小鼠体重、血糖、糖耐量、胰岛素敏感性、血清胰岛素水平、GSIS功能、胰岛素合成没有影响;2.正常饮食情况下,敲除CASK对小鼠胰岛中胰岛素和胰高血糖素含量、胰岛形态大小没有影响;3.敲除CASK可缓解高脂饮食诱导的高胰岛素血症、糖耐量损伤、胰岛素抵抗和高血糖,延缓2型糖尿病的发生发展。

关键词： CASK 条件性敲除胰岛素分泌胰岛β细胞

中西医结合治疗慢性心力衰竭阳虚水泛证30例临床观察

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湖南中医杂志 2017年第6期33卷 47-49页

作者：赵启袁清照湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410006

目的:观察真武汤巴布剂外用联合西药治疗慢性心力衰竭阳虚水泛证的临床疗效。方法:将60例慢性心力衰竭阳虚水泛证患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组予以常规西医抗心衰治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用真武汤巴布剂行穴位贴敷... 详细信息

目的:观察真武汤巴布剂外用联合西药治疗慢性心力衰竭阳虚水泛证的临床疗效。方法:将60例慢性心力衰竭阳虚水泛证患者随机分为治疗组和对照组各30例,对照组予以常规西医抗心衰治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用真武汤巴布剂行穴位贴敷治疗。观察2组患者临床疗效、水肿程度、N末端脑纳肽原(NT-proBNP)、6min步行距离(6MWD)、体质量。结果:2组综合疗效和水肿疗效的总有效率治疗组均为93.3%,对照组均为73.3%,2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。NT-proBNP、6MWD、体质量下降,治疗前后组内比较及治疗后组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:真武汤巴布剂能改善慢性心力衰竭水肿阳虚水泛证患者的心功能和临床症状,减轻患者体质量,提高运动耐量。

关键词：慢性心力衰竭阳虚水泛型真武汤巴布剂穴位贴敷

金银花超微粉体不同极性部位的指纹图谱及其与抑菌活性相关性研究

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中草药 2011年第11期42卷 2226-2230页

作者：张水寒袁清照蔡光先冯小燕邵怡湖南省中医药研究院医药粉体技术教育部工程研究中心湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室湖南长沙41001 湖南中医药大学湖南长沙410007

目的建立金银花超微粉体不同极性部位的指纹图谱,并研究其与抑菌活性的相关性。方法采用系统溶剂提取法得到6个不同极性部位,分别采用HPLC法进行测定,同时选择体外抑菌药理指标进行活性测定;用多元线性回归分析揭示化学信息与抑菌指标... 详细信息

目的建立金银花超微粉体不同极性部位的指纹图谱,并研究其与抑菌活性的相关性。方法采用系统溶剂提取法得到6个不同极性部位,分别采用HPLC法进行测定,同时选择体外抑菌药理指标进行活性测定;用多元线性回归分析揭示化学信息与抑菌指标的相关关系,寻找与药理指标密切相关的物质群。结果确定以醋酸乙酯提取部位的HPLC指纹图谱来制定金银花的抑菌活性指纹图谱。结论应用该方法建立的金银花粉体的质量标准科学、合理、实用。

关键词：金银花中药粉体极性部位 HPLC 指纹图谱抑菌活性

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吴茱萸道地药材的高效液相指纹图谱研究

中草药 2010年第9期41卷 1534-1538页

作者：袁清照张水寒李顺祥黄丹蔡萍湖南省中医药研究院中药新药研究与开发重点实验室湖南长沙410013 湖南中医药大学中药现代化实验室湖南长沙410208

目的建立吴茱萸道地药材化学特征指纹图谱。方法采用HPLC梯度洗脱法,对吴茱萸药材进行测定,流动相为0.04%辛烷磺酸钠与0.05%磷酸的水溶液-乙腈,检测波长230 nm,记录80 min的色谱。结果运用梯度洗脱能很好分离吴茱萸的各类成分,经方法学... 详细信息

目的建立吴茱萸道地药材化学特征指纹图谱。方法采用HPLC梯度洗脱法,对吴茱萸药材进行测定,流动相为0.04%辛烷磺酸钠与0.05%磷酸的水溶液-乙腈,检测波长230 nm,记录80 min的色谱。结果运用梯度洗脱能很好分离吴茱萸的各类成分,经方法学考察,HPLC指纹图谱具有良好的重现性;11批样品中21个特征指纹峰有专属性。结论本研究建立的指纹图谱分析方法可用于吴茱萸药材质量的综合评价,也可用于道地性考察。

关键词：吴茱萸 HPLC 道地性指纹图谱

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胃复康胶囊质量标准的研究

湖南中医杂志 2014年第2期30卷 126-128页

作者：卢玲敏袁清照湖南省临湘市中医医院湖南临湘414300 湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410006

目的：建立胃复康胶囊的质量标准。方法：以十八烷基硅炕键合硅胶为填充剂，采用C-18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（三乙胺调PH值至6．0，55：45），检测波长为280nm。结果：胃复康胶囊中浙贝母、甘草... 详细信息

目的：建立胃复康胶囊的质量标准。方法：以十八烷基硅炕键合硅胶为填充剂，采用C-18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-0．1％磷酸溶液（三乙胺调PH值至6．0，55：45），检测波长为280nm。结果：胃复康胶囊中浙贝母、甘草、枳壳薄层色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；延胡索乙素0．128～0．768μg范围内线性关系良好，平均回收率为96．76％，RSD为1．24％，平均每粒胃康胶囊中含延胡索乙素0．384mg／g。结论：经试验，确定本方法准确可行，操作简便，可做本品的质量控制。

关键词： HPLC 胃复康胶囊延胡索乙素含量测定

条件性胰岛β细胞CASK基因敲除小鼠的构建及鉴定

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南京医科大学学报（自然科学版） 2019年第9期39卷 1274-1279,1297页

作者：袁清照谢金阳刘星婧袁栎王尧东南大学附属中大医院内分泌科江苏南京210009 南京医科大学生物化学与分子生物学系江苏南京211166

目的:构建条件性胰岛β细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)基因敲除小鼠,为研究CASK基因在糖尿病发生中的机制提供动物模型。方法:将CASKloxp/-雌鼠与CASKloxp/Y雄鼠杂交,... 详细信息

目的:构建条件性胰岛β细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)基因敲除小鼠,为研究CASK基因在糖尿病发生中的机制提供动物模型。方法:将CASKloxp/-雌鼠与CASKloxp/Y雄鼠杂交,获得基因型为CASKloxp/loxp雌鼠、CASKloxp/Y雄鼠;再让条件性胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶雄鼠与CASKloxp/loxp雌鼠杂交获得CASKloxP/YMIP-Cre雄鼠和CASKloxP/-MIP-Cre雌鼠。CASKloxP/YMIP-Cre基因型小鼠即为本实验所需要构建的模型小鼠。小鼠生后1~2周剪尾,通过PCR鉴定小鼠基因型,4~5周龄时腹腔注射他莫昔芬诱导Cre重组酶表达后,利用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹技术验证CASK基因敲除效果。结果:从引进这两种小鼠开始,繁殖10个月,共获得基因型为CASKloxP/YMIP-Cre的雄鼠28只,PCR结果证实小鼠基因型符合CASKloxP/YMIP-Cre。实时荧光定量PCR、蛋白质印迹结果显示CASKloxP/YMIP-Cre小鼠胰岛CASK表达量明显下降。结论:利用Cre/loxp系统,成功构建了条件性胰岛β细胞CASK基因敲除小鼠,为在动物水平研究CASK基因在糖尿病发病机制中的作用提供了研究平台。

关键词： CASK Cre-loxp系统胰岛β细胞

归脾汤加减治疗慢性心力衰竭合并贫血气虚血瘀证30例临床观察

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湖南中医杂志 2019年第10期35卷 1-3页

作者：袁清照赵启湖南省中医药研究院附属医院

目的:观察归脾汤加减治疗慢性心力衰竭合并贫血气虚血瘀证的临床疗效。方法:将60例慢性心力衰竭合并贫血气虚血瘀证的患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例。对照组予以常规抗心衰治疗,治疗组在对照组治疗的基础上予以归脾汤加减治疗... 详细信息

目的:观察归脾汤加减治疗慢性心力衰竭合并贫血气虚血瘀证的临床疗效。方法:将60例慢性心力衰竭合并贫血气虚血瘀证的患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例。对照组予以常规抗心衰治疗,治疗组在对照组治疗的基础上予以归脾汤加减治疗。观察2组患者临床疗效、N端前脑钠肽(NT-pro BNP)、血红蛋白(Hb)、6min步行距离(6MWD)及超声心动图测量左室射血分数(Lv EF)的改善情况。结果:总有效率治疗组为93.33%,高于对照组的73.33%,差异有统计学意义(P<0.05);2组患者治疗后NT-pro BNP、Hb、6MWD、Lv EF均得到改善,且治疗组改善更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:归脾汤加减能改善慢性心力衰竭合并贫血气虚血瘀证患者的心功能和临床症状,提高患者运动耐量,并在一定程度上纠正贫血,但其作用机制仍待进一步研究。

关键词：慢性心力衰竭贫血气虚血瘀证中医药疗法归脾汤

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复方胆宁片质量标准的研究

湖南中医杂志 2012年第1期28卷 100-101页

作者：张艳田其学袁清照湖南省中医药研究院附属医院湖南长沙410006

复方胆宁片为我院内制剂,由茵陈、瓦楞子（煅）、金钱草、栀子、冬葵子、海金砂、当归等17味中药加工而成,具有消炎利胆止痛、健胃溶石排石的功效。常用于慢性胆囊炎、胆石症、胆囊折叠以及术后肝胆管、胆总管结石等。医院制剂室于九十... 详细信息

复方胆宁片为我院内制剂,由茵陈、瓦楞子（煅）、金钱草、栀子、冬葵子、海金砂、当归等17味中药加工而成,具有消炎利胆止痛、健胃溶石排石的功效。常用于慢性胆囊炎、胆石症、胆囊折叠以及术后肝胆管、胆总管结石等。医院制剂室于九十年代初将其研制成片剂供临床使用,疗效显著。

关键词：复方胆宁片延胡索栀子白芍薄层鉴别质量标准实验研究

超微粉碎技术在枳术丸中的应用及其溶出影响研究

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中国实验方剂学杂志 2009年第9期15卷 10-13页

作者：袁清照张水寒杨瑛吴璐蔡光先湖南中医药大学湖南长沙410007 湖南省中医药研究院中药超微工程技术研究中心湖南长沙410006

目的:对经微粉化制备的枳术丸与枳术丸进行显微、理化鉴别、溶出情况对比研究,探索超微粉碎对丸剂质量的影响。方法:采用TLC法鉴别枳实与白术、采用HPLC法测定枳术丸橙皮苷的体外溶出情况,并采用了Weibull分布模型进行溶出动力学模拟。... 详细信息

目的:对经微粉化制备的枳术丸与枳术丸进行显微、理化鉴别、溶出情况对比研究,探索超微粉碎对丸剂质量的影响。方法:采用TLC法鉴别枳实与白术、采用HPLC法测定枳术丸橙皮苷的体外溶出情况,并采用了Weibull分布模型进行溶出动力学模拟。结果:超微粉碎与普通粉碎后TLC无显著差别,经微粉化制备的枳术丸各时间点的有效成分溶出较普通丸剂快。结论:枳术丸经超微粉碎后橙皮苷溶出量增加,溶出速度明显提高。

关键词：枳术丸超微粉碎橙皮苷溶出度测定