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ЭП866耐热马氏体不锈钢的激光冲击温强化特性

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材料研究学报 2017年第11期31卷 827-832页

作者：张青来何袁圆张冰昕江苏大学材料科学与工程学院镇江212013 上海交通大学密西根学院上海200240

使用钕玻璃脉冲激光器对航空发动机用耐热马氏体不锈钢进行ЭП866激光冲击温强化(WLSP)实验,使用X射线应力测定仪和透射电子显微镜分析了冲击表层的微观结构和性能。结果表明:与激光冲击强化(LSP)相比,WLSP有明显的温强化效应。动态应... 详细信息

使用钕玻璃脉冲激光器对航空发动机用耐热马氏体不锈钢进行ЭП866激光冲击温强化(WLSP)实验,使用X射线应力测定仪和透射电子显微镜分析了冲击表层的微观结构和性能。结果表明:与激光冲击强化(LSP)相比,WLSP有明显的温强化效应。动态应变时效(DSA)和动态析出(DP)结果表明:WLSP使不锈钢表层产生了更高幅值的残余压应力,析出了具有更高密度的位错结构和纳米级的析出相。

关键词：金属材料 ЭП866不锈钢激光冲击温强化残余压应力表面硬度动态应变时效

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交叉文体的文本价值及教学价值探析

中学语文教学 2019年第4期 27-30页

作者：袁圆江苏省扬州市江都区教育局教研室 225200

教材中为数不多的"交叉文体"在实际教学中往往忽略了其应有的价值。这类文体虽占比较小,但它是课程内容的重要体现,是教材的重要组成部分,也是学生语文知识系统中不可或缺的内容。交叉类文本由于文体的非常规性,需要把握文本特征,挖掘... 详细信息

教材中为数不多的"交叉文体"在实际教学中往往忽略了其应有的价值。这类文体虽占比较小,但它是课程内容的重要体现,是教材的重要组成部分,也是学生语文知识系统中不可或缺的内容。交叉类文本由于文体的非常规性,需要把握文本特征,挖掘蕴藏在其中丰富的文本价值,依体定教,以学悟体,彰显应有的教学价值。

关键词：交叉文体文本价值教学价值

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论茶的精神

论茶的精神

作者：袁圆华东师范大学

学位级别：硕士

在中国的精神文化体系中,茶是一个特殊的存在。物(茶)对人的意味不在人的静观中产生,而在于人与物(茶)直接接触、作用时呈现。在人们长期饮茶的实践中,茶实现了从自然之物到文化之物的转变,再到精神之物的升华。不同时期的人们身处不同... 详细信息

在中国的精神文化体系中,茶是一个特殊的存在。物(茶)对人的意味不在人的静观中产生,而在于人与物(茶)直接接触、作用时呈现。在人们长期饮茶的实践中,茶实现了从自然之物到文化之物的转变,再到精神之物的升华。不同时期的人们身处不同的时代背景也相应地面临着不同的现实问题,故他们对茶的需求与索取也不同。茶在对治日新月异的时代问题的过程中不断地被赋予多重精神面向。千百年来,茶以苦寒之性味及其衍生出的清明、俭德、收摄、持守等精神意味参与着不同时代的精神构建。唐前期,茶精神表现为精行俭德,体现于茶酒之辩、茶佛结盟以对抗酒与世间百态之苦中;唐中后期开始,茶经由此前的精神化,开始进入当时的主流思想领域;宋代,茶精神实现了禅学化和理学化;明代的饮茶人开始着眼于饮茶活动的审美化,通过人、茶、境的融合,饮茶人不断获得精神的满足。在历史的演进中,茶逐渐成为中国人精神世界中不可或缺的一部分,饮茶也最终成为中国人过精神生活的重要方式。

关键词：茶苦俭德清明精神生活

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无人机环境下复杂目标跟踪算法研究

无人机环境下复杂目标跟踪算法研究

作者：袁圆安徽大学

学位级别：硕士

无人机目标跟踪技术早已成为各个领域的研究热点,但是无人机在跟踪过程中,目标外观、尺度以及所处环境的变化会严重影响跟踪的性能。因此,如何提高跟踪器性能,并满足实时性跟踪需求具有重要的研究意义,论文主要针对目标易丢失及光照不... 详细信息

无人机目标跟踪技术早已成为各个领域的研究热点,但是无人机在跟踪过程中,目标外观、尺度以及所处环境的变化会严重影响跟踪的性能。因此,如何提高跟踪器性能,并满足实时性跟踪需求具有重要的研究意义,论文主要针对目标易丢失及光照不充足条件下跟踪性能比较差的问题,研究出基于特征残差相关滤波器的无人机目标跟踪算法,从而提高跟踪器性能和满足实时性跟踪需求。本文的创新点和主要研究内容如下:(1)针对无人机目标跟踪算法性能和实时性比较差的问题,尤其在背景杂波、相机快速移动和类似目标属性中非常容易丢失跟踪的目标。本文提出一种基于特征残差自动时空正则化相关滤波器的目标跟踪算法(FRATCF),该算法可以自动自适应地学习与更新时空正则化项,并在训练阶段学习相邻两帧之间的特征残差,从而在滤波学习中表现出更好的收敛性。实验结果表明,FRATCF不仅具有更好的性能,还具有更高的速率。(2)针对FRATCF和现有跟踪器算法在光照不充足条件下跟踪性能比较差的问题,本文在前面已有基础上提出了一种基于特征残差双重回归相关滤波器的目标跟踪算法(FRDRCF)。先通过光照自适应方法来判断图像亮度信息,然后对图像进行预处理,生成目标感知掩模,并在学习训练阶段加入特征残差的方法来加强对滤波器的训练。FRDRCF采用双重回归策略,使用目标和上下文特征来训练双回归滤波器,最后在检测阶段将双响应图进行合并,以增加目标响应值。结果表明,FRDRCF比其他先进的跟踪器具有更好的性能,并在黑暗场景下具有光照自适应和抗黑暗能力,拓宽了目标跟踪的应用范围。

关键词：无人机跟踪相关滤波特征残差自动时空正则化双重回归

不同密度下油菜和小麦抗倒性差异形成机理研究

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不同密度下油菜和小麦抗倒性差异形成机理研究

作者：袁圆华中农业大学

学位级别：硕士

倒伏是制约油菜和小麦高产和优质重要因素。倒伏不利于机械化收获,且阻碍籽粒灌浆,造成产量和品质严重降低。因此,高产和抗倒互相制约。实际生产中,合理密植可协调油菜高产和抗倒的矛盾;小麦密植后,籽粒产量提高,倒伏风险增大,高产和抗... 详细信息

倒伏是制约油菜和小麦高产和优质重要因素。倒伏不利于机械化收获,且阻碍籽粒灌浆,造成产量和品质严重降低。因此,高产和抗倒互相制约。实际生产中,合理密植可协调油菜高产和抗倒的矛盾;小麦密植后,籽粒产量提高,倒伏风险增大,高产和抗倒矛盾突出。故而,不同密度下油菜和小麦抗倒性存在差异。本试验采用裂区试验设计,油菜试验:以播期(9月25日、10月25日)为主区;品种(华油杂62和沣油520)为裂区,密度(15×10株hm(D1)、30×10株hm(D2)、45×10株hm(D3)和60×10株hm(D4)为裂裂区;小麦试验:以播期(9月25日、10月25日)为主区;品种(郑麦9023和襄麦D31)为裂区,播种密度(120×10hm(D1)、240×10hm(D2)、360×10 hm(D3)和480×10 hm(D4)为裂裂区。本试验探究在不同播期和密度下,两种作物在农艺性状、力学特性、理化特性及显微结构表现差异,系统揭示油菜和小麦抗倒性差异形成机理,为油菜和小麦―高密抗倒‖和轻简栽培技术提供理论依据。本研究的主要研究结果如下:(1)9月25日播种,密度增大,油菜单株产量、单株角果数及每角粒数均减小,小区产量在45×10 hm处理达峰值,倒伏指数最小。播期推迟至10月25日,小区产量、单株产量、单株角果数及每角粒数均显著降低;晚播增密至D4条件下,小区产量在D4密度达到最大值,倒伏指数最小。播期推迟,茎秆高度及干重均显著降低;茎秆木质素及纤维素含量显著下降;木质素合成酶过氧化物酶(POD)、肉桂醇脱氢酶(CAD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)及4-香豆酰-Co A连接酶(4CL)酶活性均显著降低;但植株地上部鲜重降幅较大,倒伏指数下降,抗倒性增强。适期播种时,密度增大,茎秆高度及干重均显著降低,茎秆维管束长度/髓腔外组织宽度等指标参数逐渐增加,茎秆木质素和纤维素含量呈先增后降趋势,与木质素合成相关酶POD、CAD、PAL、4CL的活性增强,茎秆易倒伏部位从主茎中上部转移至主茎中下部,倒伏指数呈先降后趋势。逐步回归分析表明木质素协调倒伏指数及小区产量的关键指标,茎秆木质素含量及群体木质素总量高,可同时获得较强的茎秆抗倒性及较高的小区产量。(2)10月25日播种,密度增大,小麦千粒重及每穗粒数均下降,籽粒产量在D2或D3达到峰值,倒伏指数较大;播期提前至9月25日,在任何密度下,籽粒产量、千粒重、每穗粒数及有效穗数均显著降低;早播增密,籽粒产量仍在D2或D3密度达到最大值,倒伏指数较大。播期提前,小麦株高及茎秆干重均显著减小;茎秆木质素和纤维素含量显著下降,与木质素合成相关的酪氨酸解氨酶(TAL)、肉桂醇脱氢酶(CAD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)及4-香豆酰-Co A连接酶(4CL)酶活性均显著降低,但植株地上部鲜重降幅较大,倒伏指数下降,抗倒性增强。适期播种时,密度增大,株高显著增加,茎秆干重显著降低;茎秆机械组织层数等指标参数均逐渐减小,茎秆木质素和纤维素含量呈逐渐降低趋势,与木质素合成相关的TAL、CAD、PAL、4CL酶活性下降;易倒伏部位主要发生在茎秆基部第2节间处,倒伏指数显著增加。逐步回归分析表明木质素为影响倒伏指数及籽粒产量的关键指标,密度增大,茎秆木质素含量低,而群体木质素总量高,可获得较强较高的籽粒产量,但茎秆抗倒性降低。(3)不同播期和密度对油菜和小麦产量及抗倒性影响存在差异。油菜和小麦倒伏部位发生不同,密度增大,油菜茎秆易倒伏部位由茎秆中上部转移至下部,小麦茎秆易倒伏部位主要发生在茎秆基部第2节间;油菜茎秆发育进程先慢后快,小麦反之,导致两作物倒伏部位不同。两作物倒伏指数对密度响应不同,密度增加,油菜倒伏指数呈先降后增,抗倒性提高,产量增加,于45×10 hm或60×10 hm处理产量与抗倒性协调性最佳;而小麦倒伏指数显著增加,倒伏风险增加,240×10 hm或360×10 hm处理下,产量最佳,高产和抗倒矛盾突出。两茎秆细胞结构特征亦存在异同,两作物在密植条件下维管束数目和面积均显著减小,单株产量减小;油菜茎秆茎秆维管束长度/髓腔外组织宽度等指标参数增加,抗倒性增强,小麦茎秆机械组织层数等指标参数降低,抗倒性降低。两作物茎秆理化性质影响抗倒性;合理密植,油菜茎秆木质素和纤维素含量及其相关酶活性增加,小麦反之,这是两作物抗倒性存在差异重要原因。

关键词：油菜小麦播期密度抗倒性产量

挤压-剪切工艺对AZ31镁合金组织与性能的影响研究

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挤压-剪切工艺对AZ31镁合金组织与性能的影响研究

作者：袁圆重庆大学

学位级别：硕士

挤压-剪切工艺(简称ES)是将传统挤压与等径角挤压(ECAE)相结合的大变形加工技术。半固态挤压剪切工艺则是将半固态成形与挤压-剪切工艺结合起来的新开发的变形加工技术,该工艺综合了ES以及半固态成形工艺的优势,使加工难度降低,材料成... 详细信息

挤压-剪切工艺(简称ES)是将传统挤压与等径角挤压(ECAE)相结合的大变形加工技术。半固态挤压剪切工艺则是将半固态成形与挤压-剪切工艺结合起来的新开发的变形加工技术,该工艺综合了ES以及半固态成形工艺的优势,使加工难度降低,材料成形性能提升,组织与性能得到进一步优化。本文首先以课题组成熟的研究结果为基础,优化挤压剪切模具,之后通过DEFORM-3D挤压模拟,和AnyCasting浇注模拟,探究浇注以及挤压过程中的规律。在模拟理论的基础上选择不同剪切内角的挤压剪切模具(无转角、150°、135°)后,进行3组实验,分别是350℃常规挤压、450℃常规挤压、以及半固态挤压实验。本文选用铸态AZ31镁合金作为实验材料。通过AnyCasting进行AZ31镁合金浇注模拟,得到熔体温度-时间曲线,为后续半固态挤压参数提供理论支撑;DEFORM-3D进行挤压模拟,研究挤压过程的成形载荷、等效应变、速度场规律。后续进行常规挤压以及半固态挤压实验,并对挤压得到的棒材进行显微组织观察、显微硬度测试和拉伸性能实验,通过X射线衍射仪和扫描电子显微镜进行宏观织构测定和拉伸断口分析以及微观织构分析。结合模拟结果,探究剪切转角、挤压温度对常规挤压的影响,剪切转角对半固态挤压的影响,半固态挤压组织演变规律,以及对比半固态挤压与常规挤压,探究半固态挤压晶粒细化、织构弱化、改善组织性能不均匀性的作用。最终得到以下结果:AnyCasting浇注模拟表明,在浇注时间t=18±2s时,凝固率为80±5%,铸件中心部分存在少量液态,心部温度约为580±10℃,可以此作为半固态挤压成形的初始态浆料。DEFORM-3D挤压模拟表明,成形载荷随着剪切内角减小而增加,剪切内角越小,最终稳定的成形载荷越大,材料顺利挤出也越困难;等效应变随着转角的添加而增大,并且剪切内角越小,棒材累积的等效应变也越大,外侧等效应变差值越大,变形不均匀性增加;流速受转角的影响规律是,在通过常规挤压区时,有无转角,两侧流速都基本一致,而在等通道转角区,无转角时,材料中部流速最快,随着剪切转角加入,外侧材料流速大于内侧,随着剪切转角减小,流速差先增大再减小,最终两侧流速趋于一致;温度对成形载荷的影响是,降低温度,最大成形载荷增加,材料顺利挤出也越困难。剪切转角对350℃常规挤压的影响为,随着剪切转角加入,动态再结晶更充分,晶粒细化,剪切内角由150°减小至135°,晶粒进一步细化,但组织不均匀性增加;硬度提高,当剪切内角由150°减小至135°,硬度略有增加,同一剪切内角下,从内侧L至外侧R硬度先降低再升高,且内侧L硬度低于外侧R,135°时硬度不均匀性更明显;屈服强度上升155MPa,抗拉强度上升105MPa,延伸率下降1%,150°剪切内角下的综合力学性能最优,屈服强度237.5MPa、抗拉强度299.2MPa、延伸率11.3%。挤压温度对常规挤压剪切的影响为,与350℃相比,挤压温度升高至450℃后,显微组织为长大晶粒与未被吞噬小晶粒并存,晶粒尺寸明显增大,平均硬度小于350℃下的平均硬度,与350℃的基面织构强度相比,450℃基面织构强度显著下降,屈服强度、抗拉强度均下降,延伸率上升,并且同一横截面上组织与硬度分布依然不均匀;在450℃下,转角加入,抗拉强度下降。剪切转角对半固态挤压的影响为,引入剪切转角后,晶粒得到明显细化,剪切内角由150°减小至135°,晶粒略微长大,内外侧与中部M的组织差异不大,内侧L与外侧R组织无明显差异性;各区域硬度值均上升,135°与150°的平均硬度值基本持平,整体来看硬度分布较均匀;(0002)基面织构强度上升3-4;棒材屈服强度上升200MPa,抗拉强度上升100MPa,延伸率下降2%,150°剪切内角下的综合力学性能最优,屈服强度222.2MPa、抗拉强度308.5MPa、延伸率9.6%。对比半固态挤压以及350℃、450℃常规挤压的组织性能后发现,半固态挤压各区域为均匀细小组织,均匀性明显优于常规挤压,并且与450℃常规挤压相比,半固态晶粒细化效果明显,与350℃常规挤压相比,在加入转角后,半固态挤压也有一定程度晶粒细化效果;半固态挤压与350℃常规挤压硬度值较接近,均明显大于450℃常规挤压,半固态挤压下棒材横截面内侧L、中部M、外侧R硬度值无明显差异,硬度分布更加均匀;不同工艺下的横截面(0002)基面织构强度不同,半固态挤压更能有效弱化AZ31镁合金棒材的(0002)基面织构;对比不同工艺下拉伸性能发现,半固态挤压在组织上的细化以及基面织构的弱化有利于提高材料性能。

关键词：镁合金AZ31 ES工艺半固态成形有限元模拟组织力学性能

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中草药提取物对烟草赤星病防治技术研究

中草药提取物对烟草赤星病防治技术研究

作者：袁圆贵州大学

学位级别：硕士

烟草是贵州省重要的经济作物,近年,随着烟草的大面积栽种,烟草赤星病频繁发生,对烟叶的品质造成了很大的危害,严重影响了当地农民的生产活动和经济利益。目前,防治烟草赤星病主要以化学方法为主,对当地生态的破坏以及烟草的农药残留问... 详细信息

烟草是贵州省重要的经济作物,近年,随着烟草的大面积栽种,烟草赤星病频繁发生,对烟叶的品质造成了很大的危害,严重影响了当地农民的生产活动和经济利益。目前,防治烟草赤星病主要以化学方法为主,对当地生态的破坏以及烟草的农药残留问题带来了很大的考验。为了更合理地防治烟草赤星病,本研究于2014-2015年烟草生长期内,在清镇市烟草基地采集典型烟草赤星病病叶,对其进行了显微鉴定、分离、纯化保存。并进行了致病性测定及分子生物学鉴定。选用了3种化学药剂和3种生物药剂,对烟草赤星病菌进行室内毒力测定。采用了微波法、超声波法及水蒸气蒸馏法分别对41种中草药进行粗提取,将其粗提物对烟草赤星病菌进行室内抑制作用研究。并将筛选出有较好抑制作用的化学农药、生物农药及中草药提取物进行田间试验研究。主要实验结果如下:1.结合形态学、分子鉴定及致病性测定,本研究所分离的病原菌为半知菌亚门链格孢属(Alternaria sp.),即烟草赤星病的病原菌。为筛选出有效防治烟草赤星病的药剂,采用菌丝生长速率法测定了木霉WP、1%申嗪霉素AS、80%乙蒜素AS、37%苯醚甲环唑WDG、99%噁霉灵TF、40%菌核净WP六种杀菌剂的室内毒力水平。结果表明:六种药剂均对赤星病菌菌丝生长有抑制作用,1%申嗪霉素抑制率和EC50分别为100%和1.9746μg/mL,相关系数r=0.9975。抑制中浓度EC50最小的是37%苯醚甲环唑,为1.2597μg/mL。2.采用三种不同方法分别对30个科41种中草药进行粗提取,测定其提取物对烟草赤星病菌的室内初步抑制作用。结果表明:超声波法提取物抑制效果最好,益母草等10种粗提物的抑制率为100%,天南星等7种粗提物抑制作用在90%以上。微波法次之,黄连的抑制作用最强,抑制率为91.15%。水蒸气蒸馏法中,抑制作用最好的为大黄、七叶一枝花和肉桂,其抑制率分别为69.93%、68.14%和63.07%。3.采用菌丝生长法对超声波法中17种抑制率在90%以上的中草药提取物进行室内毒力测定。结果表明:抑制中浓度EC50值最小的为黄连,4.0287 mg/mL,其次是细辛,4.4680 mg/mL。相关系数分别为0.9783和0.9781,线性关系良好。采用菌丝生长法对微波法中2种抑制率在70%以上的中草药提取物进行室内毒力测定。结果表明:黄连EC50值最小,为7.0773 mg/mL。4.选用1%申嗪霉素AS、37%苯醚甲环唑WDG、黄连/雄黄/白果微波法提取物、40%菌核净单剂及复配药剂进行田间小区试验。结果表明:7种单剂处理对烟草赤星病均有一定的防治作用。化学杀菌剂37%苯醚甲环唑WDG防治效果优于常规药剂菌核净,防效为74.61%。白果粗提物稀释400倍液对烟草赤星病防效为67.57%,黄连提取物和雄黄提取物相对防效分别为62.83%和54.62%;生物杀菌剂1%申嗪霉素AS1500倍液防治效果为66.18%;37%苯醚甲环唑WDG+黄连/白果粗提物混配施用后效果防效为72.82%和75.36%。

关键词：中草药提取物烟草赤星病防治技术

煤矿调度室操作员情绪对工作记忆表现的影响研究

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煤矿调度室操作员情绪对工作记忆表现的影响研究

作者：袁圆西安科技大学

学位级别：硕士

随着智能化技术的引入,煤矿调度监控作业任务需要在复杂人-机交互系统中完成,煤矿调度室操作员需要从大屏幕和计算机显示终端上获取信息,完成工作任务,这就要求操作员在一定时间内对复杂的信息进行记忆和分析,并快速对各类危险警报或异... 详细信息

随着智能化技术的引入,煤矿调度监控作业任务需要在复杂人-机交互系统中完成,煤矿调度室操作员需要从大屏幕和计算机显示终端上获取信息,完成工作任务,这就要求操作员在一定时间内对复杂的信息进行记忆和分析,并快速对各类危险警报或异常数据做出响应。煤矿调度室操作员所进行的认知与操作任务均涉及到操作员的工作记忆,相关研究表明情绪是影响工作记忆表现的重要因素之一,因此本文研究煤矿调度室操作员情绪对工作记忆表现的影响,为煤矿企业进行操作员情绪管理提供参考意见。本文通过图片情绪诱发法诱发操作员积极或消极情绪,使用N-back实验范式进行2(情绪状态:积极/消极)×2(任务类型:言语/空间)×2(记忆负荷:低/高)的脑电实验,采集煤矿调度室操作员工作记忆任务表现数据。在此基础上,通过对行为任务数据和事件相关电位数据的描述性统计分析、重复测量方差分析、配对样本T检验,结果发现:操作员在积极情绪下任务的正确率和反应时均高于在消极情绪下任务的正确率和反应时;在低负荷言语工作记忆、高负荷言语工作记忆与低负荷空间工作记忆的任务中P300成分在积极情绪下的幅值正于在消极情绪下的幅值,而在高负荷空间工作记忆的任务中,不同情绪下P300成分幅值差异不显著。进而得出以下结论:情绪对操作员认知加工过程及工作记忆表现有重要的影响作用;操作员在积极情绪下会消耗更多的认知资源,增加任务反应时,提高任务正确率;而在消极情绪下由于回避效应的影响,会消耗较少的认知资源,减少任务反应时,降低任务正确率;在言语工作记忆任务和低负荷工作记忆任务中,积极情绪更有助于操作员对任务进行思考,更有利于操作员做出正确的判断和选择。根据研究结论,本文为煤矿企业的调度室操作员提出相应情绪管理方案,包括建立操作员岗前情绪监测档案、助力操作员岗中情绪调节和完善对操作员的情绪调查等,帮助煤矿企业对调度室操作员进行情绪管理,以提高操作员的工作效率,减少人因失误。

关键词：情绪工作记忆表现脑电实验情绪管理煤矿企业

ZIKV对树鼩睾丸支持细胞感染特性及相关机制的研究

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ZIKV对树鼩睾丸支持细胞感染特性及相关机制的研究

作者：袁圆北京协和医学院

学位级别：硕士

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种经由蚊媒传播的致畸性黄病毒,与新生儿的先天脑缺陷和成人的格林-巴利综合征有关,这种病毒也可以通过性传播;近来有研究报道ZIKV可在男性生殖器官中潜伏存在达6月以上,这给ZIKV的防治手段增加了负重,也... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是一种经由蚊媒传播的致畸性黄病毒,与新生儿的先天脑缺陷和成人的格林-巴利综合征有关,这种病毒也可以通过性传播;近来有研究报道ZIKV可在男性生殖器官中潜伏存在达6月以上,这给ZIKV的防治手段增加了负重,也给人类健康带来潜在威胁。目前对支持病毒复制和在人类睾丸中持续存在的相关研究少之又少。已有的研究主要是针对人睾丸支持细胞的体外感染,以及啮齿类、灵长类动物模型的研究,睾丸支持细胞(Sertolicell,SC)对男性生殖功能具有重要的调节和保护作用,在睾丸中是不可替代的一类细胞;且其本身也是ZIKV感染的重要靶细胞,故从睾丸支持细胞入手分析ZIKV感染规律对于后续ZIKV防治有指导性意义。但人原代睾丸支持细胞的获取和使用存在不便性,而啮齿类动物模型的建立需要做干扰素拮抗处理,可能无法如实的反映人的感染病症;灵长类模型对感染症状的模拟和人类相近,但成本偏高,故目前急需一种感染症状近似于人、获取方便、成本低的实验动物作为ZIKV潜伏感染的研究对象,以探究ZIKV对于雄性感染的基本规律及其可能机制。本研究以亲缘关系与人相近的树鼩作为研究对象,通过二步酶消化法以及定时换液法建立一套成熟的原代睾丸支持细胞体外分离培养技术,并通过抗体双染对分离细胞进行纯度检测,得到高质量的细胞后用以体外感染,以qRT-PCR的方式检测感染细胞中病毒载量变化,探究细胞水平上ZIKV感染规律;通过实时荧光定量PCR结合免疫荧光技术从一个与黄病毒感染密切相关的重要受体AXL入手,通过抑制剂的使用探究其在细胞模型上与ZIKV感染的关联性,及其可能发挥的作用。最终通过qRT-PCR检测在ZIKV在体内实验中表现出的感染规律,并通过流式细胞计数以及ELISA检测发现两个有望与ZIKV防治相关的免疫因子CD4及IFN-γ的表达情况,得到如下结果:1)利用树鼩获得了材料获取更为容易、分离步骤更为简化的树鼩睾丸原代支持细胞,并通过Vimentin/GATA-4两种抗体对所获细胞进行鉴定,收集到纯度较高的树鼩睾丸原代支持细胞;2)相比于ZIKV研究中常用的vero细胞、C6/36细胞中,ZIKV在SC体外40h内短时感染中表现为高水平复制,病毒入胞时间可能早于6h;ZIKV在SC上的高水平复制可在体外维持12天,在感染9天时SC胞外培养液中病毒载量明显下降;而ZIKV复制抑制剂BGJ398对SC的抑制作用不如AXL抑制剂R248,R248能显著降低ZIKV在SC中的复制水平,且剂量为30uM时,抑制效果最佳;3)ZIKV感染健康的5月龄雄性树鼩,在感染前三天出现病毒血症并造成少量脏器如脾、肝的组织病理变化,并在第2天睾丸和附睾两个生殖器官中高表达,载量水平达109copies/mg但7天以后在树鼩外周血及各组织脏器中均无法检测到病毒复制。感染树鼩在第3、5天表现CD4+T细胞数量大幅增加,第5天时CD4+T细胞数量水平最高,在淋巴细胞中占94%;感染后第5天IFN-γ表达量大幅增加,达15mg/mL。本研究利用原代细胞分离培养建立体外感染,观察到睾丸支持细胞对寨卡病毒感染高度敏感,这一过程可能与TAM家族受体AXL相关。在体内感染中,ZIKV在雄性树齣上的复制并不出现和人一样的潜伏现象,当中CD4+T和IFN-γ在感染中期的异常高表达可能是潜伏现象未能产生的关键点。这些发现为理解寨卡病毒如何在男性生殖道中存活提供了重要的见解,进而可能有助于开发抗病毒疗法或策略,将这种病原体的传播威胁降到最低。

关键词：树鼩寨卡病毒睾丸支持细胞 AXL