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猪源乙型脑炎病毒HEN0701株全基因组的分子特征

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中国兽医科学 2011年第5期41卷 441-447页

作者：郑浩孙春清袁世山中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室上海200241

将乙型脑炎病毒HEN0701株基因组RNA分4段进行RT-PCR扩增,并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO载体中,测定全长cDNA序列。以MapDraw软件分析了乙型脑炎病毒HEN0701株的基因组结构,并将病毒基因组分成2个非编码区和10个基因,比较了HEN0701株和11株... 详细信息

将乙型脑炎病毒HEN0701株基因组RNA分4段进行RT-PCR扩增,并克隆入pCRⅡ-Blunt-TOPO载体中,测定全长cDNA序列。以MapDraw软件分析了乙型脑炎病毒HEN0701株的基因组结构,并将病毒基因组分成2个非编码区和10个基因,比较了HEN0701株和11株乙型脑炎病毒在全基因组和各基因的核苷酸及推导氨基酸的同源性。以MEGA5软件绘制HEN0701株和11株病毒C、E、NS3、NS5基因的进化树。结果显示,HEN0701株全基因组为10 965 nt,包含一长10 299 nt的开放阅读框。在核苷酸水平,HEN0701株与GⅠ分离株的全基因组和各基因的同源性均高,而与GⅢ分离株则较低;而在氨基酸水平,HEN0701株与GⅠ分离株在多聚蛋白和各病毒蛋白的同源性和HEN0701株与GⅢ分离株的相近。进化分析显示,不同基因进化树的拓扑结构相近,12株病毒的C、E、NS3、NS5基因进化方向相同,GⅠ分离株和GⅢ分离株间C基因进化距离最近。

关键词：乙型脑炎病毒全基因组序列分析

PRRSV全长感染性cDNA克隆的构建：非结构蛋白和结构蛋白之间编码区的分离

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中国科学（C辑） 2008年第1期38卷 66-73页

作者：袁世山韦祖樟中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是近两年来流行于我国大部分省份的"猪高热综合征"的主要病原体.该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变.如何设计有效的疫苗来防治... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是近两年来流行于我国大部分省份的"猪高热综合征"的主要病原体.该病毒在繁殖过程中具有遗传多变性和高频率的抗原突变.如何设计有效的疫苗来防治持续多变的流行变异株是研究者所关注的焦点.本研究中我们构建了Ⅱ型PRRSV弱毒株的感染性cDNA克隆,并对编码结构蛋白的ORF1和编码结构蛋白的ORF2之间插入几个酶切位点.通过RT-PCR和DNA测序以及分子克隆方法,获得了细胞致弱株(APRRS)的全长cDNA克隆.APRRSV基因组RNA为15521个核苷酸(不包括poly(A)尾).与PRRSV Nsp株和疫苗株的相似性均为99.7%.根据测序结果,利用基因组上的酶切位点将全长PRRSV cDNA克隆到pBlueScript载体中,在病毒5′末端引入T7启动子序列.为了区分重组病毒和亲本病毒,在ORF5编码区引人MluⅠ酶切位点.将最初构建的全长cDNA和带有MluⅠ酶切位点的cDNA分别体外转录成RNA后转染MA-104,均能够观察到典型的细胞病变(cytopathic effect,CPE).拯救的重组病毒与亲本病毒有着相同的病毒学特性.通过突变PCR的方法将编码非结构蛋白基因ORF1和编码结构蛋白基因ORF2-7之间的编码区分离,从而构建了克隆pCSA.pCSA体外转录产物具有感染性,而且拯救的病毒与亲本病毒具有相同的病毒学特性.本研究为构建嵌合病毒作为疫苗候选株以此对遗传多变的PRRSV毒株提供有效的交叉保护提供了宝贵的工具,同时也为建立PRRSV为基因表达载体来构建针对其他重要的猪源疾病重组疫苗搭建了一个很好的平台.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 反向遗传系统编码区非结构蛋白

套式病毒目病毒核衣壳蛋白的结构与功能研究进展

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中国兽医科学 2010年第9期40卷 984-988页

作者：谭菲菲韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室上海200241

介绍了套式病毒目病毒的分类及其基因组特点,论述了核衣壳(N)蛋白的结构及其功能特性,包括N蛋白的RNA结合特性、N蛋白的核定位特性、N蛋白在病毒复制中的作用,并就其在冠状病毒和动脉炎病毒中的不同作用进行了着重阐述。

关键词：套式病毒目病毒核衣壳蛋白结构功能

猪繁殖与呼吸综合征病毒传代与免疫原性变化的关联研究

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中国动物传染病学报 2022年第4期30卷 1-12页

作者：刘萍柏亚军蒋晓虹夏水利马俊孙志袁世山姚火春南京农业大学动物医学院南京210095 勃林格殷格翰动物保健(中国)有限公司上海分公司上海201203

本研究以高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗候选株JXM105以及其传代毒株JXM125和JXM135为研究对象,通过3株传代毒株对其母源强毒株JX143攻毒免疫保护效力评价和全基因序列分析,解析病毒体外传代与毒株免疫原性间的关联。结果显示:JXM105、... 详细信息

本研究以高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗候选株JXM105以及其传代毒株JXM125和JXM135为研究对象,通过3株传代毒株对其母源强毒株JX143攻毒免疫保护效力评价和全基因序列分析,解析病毒体外传代与毒株免疫原性间的关联。结果显示:JXM105、JXM125和JXM135免疫后的仔猪在21 d观察期内未出现异常临床表现,剖检猪无显著肺脏损伤。攻毒JX143后,免疫JXM105的动物组无发病和死亡,免疫JXM125或JXM135的动物组虽无死亡,但分别有20%的发病率。全基因组测序结果显示,与亲本病毒JX143相比,JXM105含有47处突变,包括23处氨基酸突变、位于nsp2的88个连续氨基酸缺失和GP2碳端的11个氨基酸截短。与JXM105相比,JXM125和JXM135仅增加了8处核苷酸突变,其中2处导致氨基酸突变。研究表明:3株传代毒株对仔猪均无致病力;JXM105对4周龄仔猪的保护率可以达到100%,JXM125和JXM135不能提供完全保护、已出现过度弱化的现象。23处分散在不同区域的氨基酸突变可能与JX143致弱相关。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒安全性免疫效力致弱

动物基因工程疫苗研究进展及我国应采取的对策

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中国畜禽传染病 1995年第2期17卷 58-62页

作者：袁世山徐宜为哈尔滨兽医研究所

动物基因工程疫苗研究进展及我国应采取的对策袁世山，徐宜为（哈尔滨兽医研究所）动物传染病是制约畜牧业发展的最大障碍之一。如何有效地预防控制乃至消灭动物传染病是兽病工作者的重大课题。目前使用的常规疫苗有两类，即灭活苗和减... 详细信息

动物基因工程疫苗研究进展及我国应采取的对策袁世山，徐宜为（哈尔滨兽医研究所）动物传染病是制约畜牧业发展的最大障碍之一。如何有效地预防控制乃至消灭动物传染病是兽病工作者的重大课题。目前使用的常规疫苗有两类，即灭活苗和减毒或无毒活苗常规疫苗的研制及应用无...

关键词：动物基因工程疫苗传染病

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马动脉炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建

中国兽医学报 2009年第2期29卷 139-142页

作者：韦祖樟袁世山中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室上海200232

根据马动脉炎病毒(Equine arteritis virus,EAV)Bucyrus株全基因组序列设计并合成EAV特异引物,进而应用RT-PCR技术分6段扩增了EAV全基因组cDNA。将扩增的各个cDNA重叠片段PE124、PE631、PE1854、PE5191、PE61107、PE97Q分别克隆到载体PCR BluntⅡ-TOPO中,建立了EAV初级cDNA克隆。在扩增5′末端时,引入NotⅠ酶切位点和T3启动子序列;在基因组3′末段PolyA尾引入XhoⅠ酶切位点,后者供cDNA模板的线性化之用。将扩增片段在PCR BluntⅡ-TOPO中依次连接,最后亚克隆到质粒pBluescriptⅡKS(+)中,获得了EAV全长基因组cDNA克隆pWEAV。核酸序列分析表明:该毒株基因组全长为12 704个核苷酸,与EAVBucyrus分离株的同源性为99.1%;全长基因组中有104个核苷酸发生突变,相应地导致编码区内34个氨基酸的改变。

关键词：马动脉炎病毒全长cDNA克隆感染性克隆

同源重组技术在拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒中的应用

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中国兽医科学 2011年第10期41卷 995-1000页

作者：周艳郑海红孙志黄婷袁世山中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 南京农业大学动物医学院预防兽医学系江苏南京210095

为探寻猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组的规律和机制,在反向遗传学技术平台基础上,设计了几对作为配体和供体的复制子质粒,相应配对后共转染Mar-c145细胞,经原代或传代培养后拯救出病毒,并对拯救病毒的序列进行了比对分析。结果显示... 详细信息

为探寻猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组的规律和机制,在反向遗传学技术平台基础上,设计了几对作为配体和供体的复制子质粒,相应配对后共转染Mar-c145细胞,经原代或传代培养后拯救出病毒,并对拯救病毒的序列进行了比对分析。结果显示,拯救的病毒为重组子,共含有供体和配体亲本部分序列;在配体和供体的同源序列区发生了分子间同源重组;重组区域存在着一定的随机性,分别依次在ORF1的256～318 nt区域、ORF5的13970～13992 nt、ORF6的14428～14494 nt及ORF7的15135～15161 nt区域发生了重组。本研究利用同源重组技术建立的重组体系,不仅揭示病毒重组区域具有随机性,而且也为其他RNA病毒的感染性cDNA克隆的构建提供了一种方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作复制子共转染

中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究

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中国农业科学 2008年第6期41卷 1822-1831页

作者：张建武庄金山袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪传染病防治研究室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PH... 详细信息

【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用(RT-)PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)以及瘟病毒的检测,对PRRSV阳性的进行ORF5的序列测定并分析。【结果】检测到16份PRRSV北美型阳性样品,PCV2阳性样品2份,其它病毒均未检到。PRRSV ORF5序列分析表明笔者分离到的PRRSV株可分为2个群。【结论】(1)PRRSV与2006年肆虐中国养猪业的猪病流行有直接关系;(2)2006年PRRSV流行株主要是以JX0612株为代表,但不同遗传特征的PRRSV也在流行。

关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 分子流行病学调查遗传进化分析

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猪繁殖与呼吸综合症病毒分子生物学研究进展

微生物学通报 2008年第3期35卷 408-413页

作者：韦祖樟孙志袁世山中国农业科学院上海兽医研究所/中国动物卫生与流行病学中心上海分中心动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点研究室上海200232

猪繁殖与呼吸综合症病毒是引起猪繁殖与呼吸综合症的病原体,本文对PRRSV的基因组结构、病毒的非结构蛋白和结构蛋白的及其功能的分子生物学研究进展做了简要综述。

关键词：猪繁殖与呼吸病毒分子生物学动脉炎病毒