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携带mIL-12基因的增殖腺病毒在鼻咽癌细胞中增殖及mIL-12高效表达

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第一军医大学学报 2002年第4期22卷 296-298页

作者：聂飚钱其军车小燕薛惠斌岑信棠第一军医大学珠江医院中心实验室广东广州510282 第二军医大学东方肝胆外科医院研究所上海200438 香港大学玛丽医院临床肿瘤系

目的联合选择性增殖腺病毒溶肿瘤细胞和小鼠白细胞介素12(mouse interleukin-12, mIL12)免疫治疗的作用,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。方法用携带mIL12的选择性增殖腺病毒CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞株CNE3和915,测定其在鼻咽癌细胞株中... 详细信息

目的联合选择性增殖腺病毒溶肿瘤细胞和小鼠白细胞介素12(mouse interleukin-12, mIL12)免疫治疗的作用,提高对肿瘤细胞的杀伤作用。方法用携带mIL12的选择性增殖腺病毒CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞株CNE3和915,测定其在鼻咽癌细胞株中的增殖能力和mIL12的表达水平。结果CNHK200-mIL12转染鼻咽癌细胞后,免疫组化染色显示大部分细胞腺病毒六联体蛋白(hexon)阳性,用流式细胞仪检测,转染24 h 后CNE3和915细胞的阳性率分别比0 h增高39%和4%,转染72 h后,病毒增殖超过1 000倍,增殖能力同dl1520相似,并能高水平表达mIL12,在1×104个CNE3和915细胞中分别达到(84.5±4.6)和(75.6±3.4)ng/105空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。结论携带mIL12 的CNHK200在p53缺陷的鼻咽癌细胞中增殖,并且高效表达mIL12,为进一步研究体内外对肿瘤杀伤作用奠定基础。

关键词：增殖腺病毒白细胞介素12 鼻咽癌基因治疗

增殖型腺病毒载体介导mIL-12基因对胃癌细胞的杀伤作用(英文)

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 75-79页

作者：薛绪潮方国恩张琪薛惠斌毕建威曹贵松钱其军第二军医大学长海医院普通外科上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438

目的 :观察增殖型腺病毒载体介导的 m IL - 1 2基因对胃癌细胞的杀伤作用。方法 :利用携带 m IL - 1 2基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株 SGC- 790 1 ,通过病毒增殖实验、细胞病理效应、酶链免疫反应等分别观察病毒复制能力、病毒对胃... 详细信息

目的 :观察增殖型腺病毒载体介导的 m IL - 1 2基因对胃癌细胞的杀伤作用。方法 :利用携带 m IL - 1 2基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株 SGC- 790 1 ,通过病毒增殖实验、细胞病理效应、酶链免疫反应等分别观察病毒复制能力、病毒对胃癌细胞的杀伤作用及 m IL - 1 2表达水平。结果 :携带 m IL - 1 2基因的增殖型腺病毒转染胃癌细胞株 SGC- 790 1具有肿瘤增殖型腺病毒 ONYX- 0 1 5的相似作用 ,可在肿瘤细胞内复制、增殖并杀死肿瘤细胞 ,而并不能在正常细胞内复制及增殖。该病毒在肿瘤细胞内的增殖能力是传统载体的近千倍。该载体携带的 m IL - 1 2基因的表达量明显高于传统基因治疗的腺病毒载体体系 ,是传统基因治疗表达量的百倍。结论 :CNHK2 0 0 - m IL - 1 2能在胃癌细胞中增殖并杀死胃癌细胞 ,并提高目的基因的表达水平。

关键词：增殖型腺病毒载体 mIL-12 胃癌癌细胞杀伤作用基因疗法白细胞介素12

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激活诱导的T细胞死亡研究进展

国外医学（输血及血液学分册） 1998年第6期21卷 341-345页

作者：薛惠斌第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫和基因治疗中心上海200438

T细胞激活诱导的细胞死亡(AICD)是T细胞被激活后再次受到TCR/CD3刺激而发生的细胞凋亡,这一机制对于调节机体免疫反应具有重要意义。研究表明,T细胞受到TCR/CD3刺激后通过一系列信号传导引发多种细胞因子的转录和合成,T细胞被激活。活化... 详细信息

T细胞激活诱导的细胞死亡(AICD)是T细胞被激活后再次受到TCR/CD3刺激而发生的细胞凋亡,这一机制对于调节机体免疫反应具有重要意义。研究表明,T细胞受到TCR/CD3刺激后通过一系列信号传导引发多种细胞因子的转录和合成,T细胞被激活。活化的T细胞表达Fas/FasL增加,通过自身FasL和可溶性FasL对Fas的作用启动凋亡信号传导,使激活的T细胞发生凋亡。但特殊的是,Th2细胞激活后却仍具抗AICD的能力,目前对这一机制已进行了初步探索。

关键词： T细胞细胞凋亡 Fas/FasL 研究进展

在结肠癌细胞内高效表达内皮抑素的增殖型腺病毒载体的构建与鉴定

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第二军医大学学报 2004年第3期25卷 280-283页

作者：徐建国钱其军薛惠斌崔贞福王元和第二军医大学长征医院普通外科上海200003 东方肝胆外科医院基因及病毒治疗实验室上海200438

目的 :构建携带内皮抑素基因的增殖型腺病毒载体 ,寻找结肠癌的有效治疗方法。方法 :通过 RT- PCR克隆内皮抑素基因 ,2 93细胞内分别重组携带内皮抑素基因的增殖型 (CNHK2 0 0 - h E)和增殖缺陷型 (Ad- h E)腺病毒 ,分别体外感染结肠癌... 详细信息

目的 :构建携带内皮抑素基因的增殖型腺病毒载体 ,寻找结肠癌的有效治疗方法。方法 :通过 RT- PCR克隆内皮抑素基因 ,2 93细胞内分别重组携带内皮抑素基因的增殖型 (CNHK2 0 0 - h E)和增殖缺陷型 (Ad- h E)腺病毒 ,分别体外感染结肠癌细胞 HT- 2 9后比较两者在细胞病理效应、病毒增殖和内皮抑素表达量方面的差异。结果 :CNHK2 0 0 - h E感染结肠癌细胞96 h后可增殖 2 0 0 0多倍 ;感染后 7d肿瘤细胞死亡率达 96 .2 % ,而对正常肝细胞基本无杀伤作用 ;随着感染时间的延长 ,肿瘤细胞培养上清液中内皮抑素表达量不断增加 ,第 5天达 1 0 90 ng/ ml,显著高于 Ad- h E感染组 (P<0 .0 1 )。结论 :携带内皮抑素基因的增殖型腺病毒 CNHK2 0 0 - h

关键词：结肠癌高效表达内皮抑素增殖型腺病毒构建鉴定癌细胞

脾内转染白细胞介素12与白细胞介素2融合基因治疗肝癌的实验研究

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中华医学杂志 2003年第9期83卷 740-743页

作者：杨家和范瑞芳钱其军尤天庚薛惠斌苏长青曹惠芳吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院上海200438

目的　观察脾内直接注射携带白细胞介素 12与白细胞介素 2融合基因的逆转录病毒包装细胞株对肝癌细胞的生长抑制作用。方法　构建携带小鼠白细胞介素 12 (mIL 12 )和人白细胞介素 2 (hIL 2 )融合基因的逆转录病毒载体GCIL12EIL2PN ,转... 详细信息

目的　观察脾内直接注射携带白细胞介素 12与白细胞介素 2融合基因的逆转录病毒包装细胞株对肝癌细胞的生长抑制作用。方法　构建携带小鼠白细胞介素 12 (mIL 12 )和人白细胞介素 2 (hIL 2 )融合基因的逆转录病毒载体GCIL12EIL2PN ,转染包装细胞PA317,于不同时间对接种肝癌大鼠模型进行脾内注射 (1× 10 7细胞 /只 )治疗 ,观察对肝癌细胞的生长抑制作用及其对大鼠的免疫功能变化、毒性反应。结果　IL 12 IL 2融合基因治疗组中 ,肝癌细胞株CBRH3接种大鼠肝脏后第 1、3、5、7天进行治疗的大鼠平均生存时间分别为 5 3 3d± 3 7d、4 9 3d± 4 2d、31 0d± 2 1d及 2 4 3d±1 4d ,IL 2基因治疗组分别为 2 5 0d± 2 5d、2 3 5d± 2 0d、18 3d± 2 4d及 12 0d± 1 8d(P <0 0 0 1) ,IL 12基因治疗组分别为 39 0d± 4 8d、32 0d± 3 9d、2 3 0d± 2 5d及 19 4d± 2 1d(P <0 0 0 1)。第 1天和第 3天治疗组长期存活率 (≥ 6 0d)为 30 % ,治疗后 2个月血清mIL 12及hIL 2仍维持在较高水平。治疗后肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多。结论　脾内直接注射携带mIL 12和hIL 2融合基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长 ,早期治疗优于晚期治疗。

关键词：脾内转染白细胞介素12 白细胞介素2 融合基因治疗肝癌实验研究

基因-病毒载体的研制及其抗肿瘤作用的初步研究

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中华医学杂志 2002年第8期82卷 557-560页

作者：钱其军车小燕岑信棠崔贞福薛惠斌朱斌徐建国 Billy 吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中心上海200438 香港大学临床肿瘤系

目的　研究一种结合肿瘤基因治疗与病毒治疗优势的新型肿瘤治疗载体系统 ,即基因病毒载体系统。方法　利用病毒重组技术将抗癌基因插入肿瘤细胞特异性的增殖病毒的病毒基因组中 ,通过细胞病理作用、荧光显微镜、免疫酶链技术及电镜等... 详细信息

目的　研究一种结合肿瘤基因治疗与病毒治疗优势的新型肿瘤治疗载体系统 ,即基因病毒载体系统。方法　利用病毒重组技术将抗癌基因插入肿瘤细胞特异性的增殖病毒的病毒基因组中 ,通过细胞病理作用、荧光显微镜、免疫酶链技术及电镜等技术分别观察病毒的杀伤效应、报告基因绿色荧光蛋白、抗癌基因小鼠白细胞介素 12表达量及病毒复制情况。结果　构建了一种新型基因病毒载体系统 ,该载体系统腺病毒E1b 5 5 0 0 0蛋白缺失 ,保留了腺病毒E1a蛋白。该载体系统具有肿瘤增殖病毒ONYX 0 15的相似功能 ,即它可在肿瘤细胞内复制及增殖 ,而在正常细胞内不能复制及增殖 ,从而特异性杀灭肿瘤细胞。该载体系统还可携带各种抗癌基因以进一步提高抗肿瘤的疗效。应用该载体系统携带该报告基因绿色荧光蛋白可使绿色荧光蛋白在肿瘤细胞内高效表达 ,其表达量明显高于传统基因治疗的腺病毒载体系 ,而在正常细胞内低表达 ,表达量与传统腺病毒载体系统相似或更低。应用该载体系统携带抗癌基因小鼠白细胞介素 12 ,也产生类似结果。电镜也证实该载体系统携带抗癌基因小鼠白细胞介素 12可在肿瘤细胞株中复制及增殖。结论　基因病毒载体将抗癌基因插入肿瘤增殖病毒基因组 ,可数百倍乃至上万倍提高抗癌基因的表达量。

关键词：基因-病毒载体载体蛋白质类基因疗法抗肿瘤作用抗癌基因

双拷贝和x基因缺失HBV DNA质粒的构建及其细胞转染

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第二军医大学学报 2003年第9期24卷 979-981页

作者：宋玉万谟彬李闻捷陈坚方超平薛惠斌第二军医大学长海医院感染科上海200433 第二军医大学长海医院中心实验室第二军医大学海军医学系军队卫生学教研室第二军医大学东方肝胆外科研究所

目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质... 详细信息

目的 :构建双拷贝和x基因缺失的HBV真核细胞复制表达质粒 ,并研究其在Hep3B肝癌细胞株中对HBV的复制表达效果。方法 :利用含HBVDNA(adrⅠ )的质粒 ,酶切出HBVDNA片段 ,克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3,构建双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;将原始质粒通过插入人工合成DNA片段和基因重组破坏乙肝病毒x基因区 ,再克隆入pcDNA3,构建成 pcDNA3 KN F1F2真核表达质粒 ;用两质粒分别转染Hep3B肝癌细胞株 ,进行G4 1 8筛选的同时用荧光定量PCR法检测细胞培养上清液HBVDNA。结果 :(1 )成功构建了x基因缺失的HBV真核表达质粒 pcDNA3 KN F1F2及含双拷贝HBVDNA的真核表达质粒 pcDNA3 ES HBV2 ;(2 )对两质粒成功进行细胞转染后 ,测得第 3、6、1 4天细胞培养上清液中HBVDNA均高表达 ,两质粒之间差别不明显。结论 :构建的质粒可在Hep3B细胞株中表达并引起HBV的复制及分泌 ;

关键词：双拷贝 x基因缺失 HBVDNA 质粒构建细胞转染肝癌

携带白细胞介素12基因逆转录病毒载体包装细胞株体内直接注射治疗肝癌的实验研究

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中华医学杂志 1999年第10期79卷 761-763页

作者：杨家和钱其军薛惠斌曹惠芳石文芳崔贞福卫立辛吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤免疫及基因治疗中心上海200438

目的研究体内直接注射携带白细胞介素12（mIL-12）逆转录病毒载体包装细胞株对体内肝癌细胞生长抑制作用，探索基因治疗新途径。方法构建携带mIL-12的逆转录病毒载体，将载体转染包装细胞株，用该细胞株分别在大鼠腹腔内与肝癌细胞株混... 详细信息

目的研究体内直接注射携带白细胞介素12（mIL-12）逆转录病毒载体包装细胞株对体内肝癌细胞生长抑制作用，探索基因治疗新途径。方法构建携带mIL-12的逆转录病毒载体，将载体转染包装细胞株，用该细胞株分别在大鼠腹腔内与肝癌细胞株混合接种，在肝癌局部及脾内直接注射，观察对肝癌细胞生长抑制作用及其对大鼠毒性反应、免疫功能变化。结果应用该细胞株与肝癌细胞株在腹腔进行混合接种，1：10以下治疗组可使大鼠长生存，而大于1：10治疗组则只能延长生存期。肝癌局部和脾内治疗组中第1天、第3天治疗能使大鼠长期生存，第5天、第7天治疗组则生存期明显延长，二者疗效无明显差别，但脾内治疗组副作用明显减少。免疫学分析与对照组相比，治疗组肝癌组织中浸润的淋巴细胞明显增多，以NK细胞及细胞毒T细胞为主。病理学结果治疗组肿瘤组织血管壁明显增厚，管腔狭窄。结论体内直接注射携带白细胞介素12的逆转录病毒包装细胞株可抑制肝癌细胞生长，早期治疗优于晚期治疗，脾内直接注射治疗是一条安全且有效的肝癌基因治疗的新途径。

关键词：白细胞介素12 肝肿瘤基因治疗实验研究

携带人内皮抑素基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒对卵巢癌的体内治疗作用

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第二军医大学学报 2006年第7期27卷 750-754页

作者：陈雄沙金燕惠宁古航薛惠斌第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室上海200438

目的:探讨携带人内皮抑素基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CX-hE对卵巢癌裸鼠瘤株OV-90的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠右背部皮下接种OV-90细胞成瘤。(1)18只荷瘤裸鼠随机分为PBS对照组、CX-hE治疗组和Ad-hE治疗组,皮下种植瘤内直接注射。各... 详细信息

目的:探讨携带人内皮抑素基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CX-hE对卵巢癌裸鼠瘤株OV-90的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠右背部皮下接种OV-90细胞成瘤。(1)18只荷瘤裸鼠随机分为PBS对照组、CX-hE治疗组和Ad-hE治疗组,皮下种植瘤内直接注射。各药物隔日注射1次,共注射5次。取肝脏组织行常规病理检查。(2)另15只荷瘤裸鼠随机分3组,分别瘤内单次注射CX-hE、Ad-hE和ONYX-015病毒纯化液。注射后第1、3、7天球后静脉取血ELISA检测人内皮抑素浓度,肿瘤组织行Hexon单克隆抗体免疫组化染色及微血管免疫组化染色。结果:(1)CX-hE组肿瘤生长速度较缓慢,开始治疗后2周肿瘤体积已明显小于Ad-hE组(P<0.05)和PBS组(P<0.01)。常规H-E染色显示CX-hE组肿瘤组织内见散在坏死灶;肝脏无明显病理变化。(2)瘤内单次注射各药物后,裸鼠血清中均可检测到内皮抑素蛋白表达,随时间延长表达量逐渐升高。CX-hE组人内皮抑素浓度始终高于Ad-hE组(P<0.01),增长速度较快。CX-hE单次瘤内注射2周,肿瘤Hexon免疫组化染色可见大量密集分布的阳性肿瘤细胞。CX-hE组肿瘤微血管免疫组化可见残余的癌巢内尚有散在分布的阳性血管内皮细胞。结论:瘤内直接注射的治疗方法可使瘤生长速度减慢,CX-hE治疗效果优于Ad-hE,未观察到各治疗组肿瘤生长停止或完全消退的理想治疗效果。

关键词：内皮抑素类腺病毒科基因疗法卵巢肿瘤