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作者：蔡扩军石河子大学

学位级别：硕士

Mx蛋白是由I型干扰素诱导宿主细胞所产生的一种抗病毒蛋白质，该蛋白属于GTP酶活性的动态蛋白超家族成员之一。Mx蛋白具有广谱的抗病毒活性，目前已相继发现了鼠、人、牛、羊、鱼等不同物种的Mx蛋白，并检测到其对流感病毒(Influenzavir... 详细信息

Mx蛋白是由I型干扰素诱导宿主细胞所产生的一种抗病毒蛋白质，该蛋白属于GTP酶活性的动态蛋白超家族成员之一。Mx蛋白具有广谱的抗病毒活性，目前已相继发现了鼠、人、牛、羊、鱼等不同物种的Mx蛋白，并检测到其对流感病毒(Influenzavirus,IV)、水疱性口炎病毒(Vesicularstomatitisvirus,VSV)、托高土病毒(Thogotovirus)及乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)等多种RNA病毒与少数DNA病毒增殖的抑制作用。口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)是国际兽医局(OIE)规定的A类动物病原微生物之一，能引起偶蹄动物口蹄疫。该病具有高度传染和持续性感染的特性，对偶蹄动物的健康和生产性能危害极大，严重威胁畜牧业的发展。研究发现，I型干扰素对多种病毒的复制具有较强的抑制作用，是脊椎动物抵抗病毒感染的一道重要防线。已经有研究证明，I型干扰素主要依赖其诱导的抗病毒蛋白2’，5’-寡腺苷酸合成酶(OAS-1)和蛋白激酶(PKR)对FMDV的复制产生抑制作用。Mx蛋白是随后发现的由I型干扰素诱导的第三种抗病毒蛋白，该蛋白在机体抗FMDV感染中的作用目前尚不清楚。为了证实牛Mx1蛋白是否具有抗FMDV活性，本研究克隆了牛Mx1基因，将其定向插入原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达，获得了重组牛Mx1融合蛋白，免疫小鼠后制备了抗牛Mx1蛋白特异性抗体;构建了pcDNA3.1/bMx1真核表达载体，将真核表达载体转染BHK-21细胞，经过G418筛选，获得了稳定表达牛Mx1蛋白的重组BHK-21细胞株，并在该细胞株上检测了牛Mx1蛋白抗FMDV活性。研究方法和主要结果如下： 1.牛Mx1基因的克隆、原核表达及其抗体制备：采用RT-PCR方法从中国荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增出牛Mx1基因，扩增产物经KpnI、XhoI双酶切后插入原核表达载体pET-32a(+)中;对构建的重组质粒pET-32a/bMx1进行PCR、酶切和测序鉴定后，将其转化至工程菌BL21(DE3)中，IPTG诱导表达，表达产物用SDS-PAGE和蛋白免疫印迹(Westernblot)分析;用Ni柱纯化融合蛋白，将纯化的蛋白加佐剂后免疫小鼠，制备抗血清，琼扩试验检测抗体效价。结果成功克隆了牛Mx1基因编码区，构建了牛Mx1基因原核表达载体pET-32a/bMx1;转化后的BL21(DE3)在28℃、1.0mmol/LIPTG浓度条件下诱导6h时，SDS-PAGE分析发现在相对分子质量约90kDa的位置出现预期大小一致的蛋白条带，表达量占菌体总蛋白量的28%;Westernblot检测到表达的牛Mx1重组蛋白能与牛Mx1蛋白抗体特异性结合;琼扩试验检测，牛Mx1融合蛋白免疫小鼠后制备的抗血清效价为1∶32。 2.稳定表达牛Mx1蛋白的BHK-21细胞株的构建及鉴定：将牛Mx1基因cDNA克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+);通过脂质体将构建好的真核表达载体pcDNA3.1/bMx1和空载体pcDNA3.1(+)转染至BHK-21细胞，并用G418筛选;筛选出的阳性细胞经PCR、RT-PCR、Westernblot及间接免疫荧光(IFA)从分子、蛋白水平鉴定牛Mx1基因在细胞中的表达;传20代后再次用PCR、RT-PCR检测其遗传稳定性。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/bMx1，筛选出的阳性细胞与正常细胞相比形态与生长速度无差别;PCR、RT-PCR均扩增出约1947bp目的片段;Westernblot约在75kDa处检测到一条特异性蛋白条带，与预期大小相符;IFA结果显示实验组阳性BHK-21细胞出现了的荧光，而阴性对照组细胞没有荧光的表达;PCR、RT-PCR可以从传20代后的阳性BHK-21细胞中扩增出目的片段。结果提示，牛Mx1基因在构建的重组BHK-21细胞株内获得表达，且具有遗传稳定性。 3.牛Mx1蛋白抗FMDV活性分析：用100TCIDO型FMDV感染重组BHK-21细胞，通过实时荧光定量PCR测定攻毒后12h、24h、36h和48hFMDVVP1基因的相对拷贝数;然后测定不同时间点病毒的滴度(TCID);用间接免疫荧光(IFA)检测攻毒后20h时FMDV在细胞内的含量。与阴性对照组细胞相比，表达牛Mx1蛋白的重组BHK-21细胞发生病变的时间延迟，细胞病变(CPE)减轻。在攻毒后12h、24h、36h和48h，FMDVVP1基因的相对表达量分别下降了45%、60%、25%、10%;TCID测定结果显示表达牛Mx1蛋白的重组BHK-21细胞内病毒滴度低于阴性对照组，其中在攻毒后24h时，阴性对照细胞组TCID是表达牛Mx1蛋白重组BHK-21细胞的1

关键词：牛Mx1蛋白抗病毒活性口蹄疫病毒

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畜禽及其产品供应链β溶血性链球菌的分离鉴定与耐药性分析

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动物医学进展 2023年第5期44卷 71-74页

作者：蔡扩军赵红琼新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆乌鲁木齐830063

为了解畜禽及其产品供应链β溶血性链球菌的污染状况及药物敏感性,采集580份畜禽及其供应链产品进行β溶血性链球菌的分离培养、鉴定,最后用K-B纸片琼脂扩散法对β溶血性链球菌进行药敏试验。经全自动微生物鉴定仪生化鉴定,共分离鉴定... 详细信息

为了解畜禽及其产品供应链β溶血性链球菌的污染状况及药物敏感性,采集580份畜禽及其供应链产品进行β溶血性链球菌的分离培养、鉴定,最后用K-B纸片琼脂扩散法对β溶血性链球菌进行药敏试验。经全自动微生物鉴定仪生化鉴定,共分离鉴定出11株β溶血性链球菌,检出率1.89%。药敏试验结果显示,11株β溶血链球菌对青霉素、头孢唑啉、头孢拉丁、卡那霉素耐药率达70%以上,对头孢哌酮钠、氧氟沙星、强力霉素、头孢氨苄敏感率达90%以上,可为畜禽及其产品供应链β溶血性链球菌的防控提供参考。

关键词：畜禽产品 β溶血性链球菌分离鉴定药敏试验

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H9亚型禽流感的危害与防控

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兽医导刊 2016年第9期 22-24页

作者：蔡扩军成进新疆乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆畜牧科学院兽医研究所

禽流感（Avian influenza,AI）是禽流行性感冒的简称,是指由A型流感病毒引起的一种家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的人兽共患传染病。根据禽流感病毒致病性和毒力不同,可将禽流感分为高致病性禽流感和低致病性禽流感。高致病性禽流感不... 详细信息

禽流感（Avian influenza,AI）是禽流行性感冒的简称,是指由A型流感病毒引起的一种家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的人兽共患传染病。根据禽流感病毒致病性和毒力不同,可将禽流感分为高致病性禽流感和低致病性禽流感。高致病性禽流感不仅会给养禽业带来灾难性的破坏,而且对公共健康也构成了严重威胁,已引起世界各国普遍关注。

关键词：禽流感病毒 H9亚型低致病性禽流感高致病性禽流感禽流行性感冒致病性养禽场传染性支气管炎干酪样混合感染

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浅议动物产品人畜共患致病菌污染风险评估

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新疆畜牧业 2019年第6期34卷 39-40页

作者：王承蔡扩军新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所新疆乌鲁木齐830063 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆乌鲁木齐830063

本研究对开展动物产品人畜共患致病菌污染风险评估的必要性、产生的社会效益、工作难度及推广应用的前景等方面进行了探讨。以期为本地区动物产品的人畜共患病污染风险评估提供理论依据。

关键词：动物产品人畜共患致病菌污染风险评估

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动物源金黄色葡萄球菌的风险暴露评估与管控建议

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畜禽业 2020年第7期31卷 70-70,72页

作者：续文渊蔡扩军新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830000 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆乌鲁木齐830000

以食品法典委员会制定的《微生物风险评估的原则和指导方针》为参考和依据,收集整理相关资料和进行实地调查,对动物源金黄色葡萄球菌进行风险暴露评估,并提出风险管控建议。

关键词：金黄色葡萄球菌风险评估管控

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RsbV基因缺失对单核细胞增生李斯特菌毒力的影响

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微生物学报 2013年第1期53卷 59-65页

作者：张再超孟庆玲乔军陈创夫才学鹏杨丽红王为升蔡扩军石河子大学动物科技学院预防兽医学重点实验室石河子832003 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室兰州730046

【目的】探讨RsbV基因缺失对单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力的影响。【方法】运用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增出LM-XS5野毒株的RsbV基因缺失片段,然后用同源重组方法构建RsbV基因缺失株;通过肝脾细菌计数、LD50的测定和毒力基因转... 详细信息

【目的】探讨RsbV基因缺失对单核细胞增生李斯特菌(LM)毒力的影响。【方法】运用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术扩增出LM-XS5野毒株的RsbV基因缺失片段,然后用同源重组方法构建RsbV基因缺失株;通过肝脾细菌计数、LD50的测定和毒力基因转录水平的检测(qRT-PCR),研究LM野毒株和缺失株在毒力上的差异。【结果】RsbV基因缺失株LD50是野毒株的104倍(P<0.01);缺失株在小白鼠肝和脾内的载菌量均明显减少(P<0.05);实时荧光定量PCR检测结果发现,缺失株4个毒力因子的表达水平均显著低于野毒株(P<0.05);缺失株免疫小白鼠后对野毒株的攻毒具有良好的免疫保护作用。【结论】RsbV对LM的4个毒力基因inlA、LLO、PlcA和PrfA的表达具有调控作用;RsbV基因缺失株毒力明显减弱,但仍保留了较强的免疫原性。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 RsbV基因缺失株毒力同源重组

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驼奶质量安全问题的现状及影响因素

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中国畜牧业 2023年第4期 28-29页

作者：韩海燕蔡扩军新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆农业大学动物医学学院

驼奶被誉为“沙漠白金”,含有多种生物活性功能成分,具有较高的生物学价值、营养价值和保健作用。伴随着人们生活水平的提高,驼奶及其制品近年来需求火爆,驼奶相关产业发展十分迅速。尤其在新疆、内蒙古等骆驼养殖大区,骆驼产业已成为... 详细信息

驼奶被誉为“沙漠白金”,含有多种生物活性功能成分,具有较高的生物学价值、营养价值和保健作用。伴随着人们生活水平的提高,驼奶及其制品近年来需求火爆,驼奶相关产业发展十分迅速。尤其在新疆、内蒙古等骆驼养殖大区,骆驼产业已成为当地新兴产业中极具代表性的朝阳产业。食品质量安全一直是世界各国人民备受关注的焦点。近年来乳制品安全事件频发,使得消费者更加关注乳制品安全问题。驼奶由于产业化、规模化、规范化程度低,再加上易发酵、不易保存等因素的影响,使得驼奶在生产、运输、加工、存储及销售环节容易发生质量安全问题。

关键词：质量安全问题新兴产业朝阳产业生物学价值食品质量安全规范化程度驼奶乳制品安全

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兽用抗生素不科学使用的危害及对策

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畜牧兽医科技信息 2023年第9期 46-48页

作者：韩海燕蔡扩军乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆乌鲁木齐830063 新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

兽用抗生素对畜牧养殖业的发展具有不可或缺的积极作用,但同时滥用抗生素导致细菌耐药性增加、动物产品抗生素残留超标、生态环境污染。为增强相关从业人员抗生素减量化意识,本研究对不科学、不合理使用抗生素的危害进行了阐述,并提出... 详细信息

兽用抗生素对畜牧养殖业的发展具有不可或缺的积极作用,但同时滥用抗生素导致细菌耐药性增加、动物产品抗生素残留超标、生态环境污染。为增强相关从业人员抗生素减量化意识,本研究对不科学、不合理使用抗生素的危害进行了阐述,并提出了对策,以期为提高兽用抗生素的科学安全使用水平,保障动物性食品安全,促进畜牧业绿色健康发展提供参考。

关键词：抗生素不科学使用危害对策

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鸡支原体病的诊治

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新疆畜牧业 2018年第2期33卷 60-62页

作者：方新元杨玲蔡扩军乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站新疆乌鲁木齐831400 乌鲁木齐市高新区(新市区)六十户乡产业发展服务中心新疆乌鲁木齐830082 乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心新疆乌鲁木齐830063

鸡支原体病在我国鸡场均有不同程度的发生与流行,发病鸡生长缓慢,产蛋下降,并发或继发其他疾病时可导致死亡率升高,严重阻碍了养鸡业的快速健康发展。笔者近期接诊了一例疑似鸡支原体的病例,针对该鸡场进行流行病学调查,对病死鸡进行了... 详细信息

鸡支原体病在我国鸡场均有不同程度的发生与流行,发病鸡生长缓慢,产蛋下降,并发或继发其他疾病时可导致死亡率升高,严重阻碍了养鸡业的快速健康发展。笔者近期接诊了一例疑似鸡支原体的病例,针对该鸡场进行流行病学调查,对病死鸡进行了剖检观察病理变化,最后采取PCR技术对病变组织进行了病原分子生物学检测,综合诊断为鸡支原体感染,并针对鸡支原体病提出了合理的综合性防治措施,使病情得到有效控制。

关键词：鸡支原体诊治防控

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牛羊细菌病及抗生素使用现状初步调查分析

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中国动物保健 2023年第3期25卷 71-72,82页

作者：贾立敏蔡扩军乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心乌鲁木齐830063 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

为了解新疆牛羊主要细菌病及抗生素使用现状,本研究通过调查问卷、实地查看、电话询问等方式对牛羊细菌病及抗生素使用情况进行了调查,通过调查分析发现,新疆牛羊细菌病呈现点多面广的多发态势,抗生素广泛应用于牛羊细菌病的预防和治疗... 详细信息

为了解新疆牛羊主要细菌病及抗生素使用现状,本研究通过调查问卷、实地查看、电话询问等方式对牛羊细菌病及抗生素使用情况进行了调查,通过调查分析发现,新疆牛羊细菌病呈现点多面广的多发态势,抗生素广泛应用于牛羊细菌病的预防和治疗,绝大部分牛羊养殖场(户)能基本遵守抗生素的使用要求和规定,少数牛羊养殖场(户)存在不科学、不合理使用抗生素的现象,导致发生细菌耐药、药物残留风险。部分养殖场(户)对使用抗生素的相关法律法规、政策文件知晓率较低,缺少抗生素减量化意识。本研究为提高新疆牛羊养殖业抗生素科学使用水平、防控牛羊细菌病提供有益参考。

关键词：牛羊细菌病抗生素现状调查

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