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SU11248对鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响及其机制

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第1期29卷 22-26页

作者：金巧智叶星星陈武兵蔡志毅温州医学院第一临床医学院浙江温州325000 龙岩市第二人民医院耳鼻咽喉科福建龙岩364000 台州市立医院耳鼻咽喉科浙江台州318000

目的研究苹果酸舒尼替尼(SU11248)对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响,并探讨其作用机制。方法用SU11248处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-2,采用MTT法检测SU11248对CNE-2细胞增殖能力的影响;经2.5μg/mL SU11284作用不同时间后采用实时荧光定量... 详细信息

目的研究苹果酸舒尼替尼(SU11248)对鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响,并探讨其作用机制。方法用SU11248处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-2,采用MTT法检测SU11248对CNE-2细胞增殖能力的影响;经2.5μg/mL SU11284作用不同时间后采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测CNE-2细胞中P27KIP1、cyclin G1 mRNA和蛋白的表达情况。结果 SU11248可抑制CNE-2细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.5μg/mL。SU11248作用CNE-2后cyclin G1 mRNA和蛋白呈时间依赖性降低(P<0.05),而P27KIP1mRNA和蛋白呈时间依赖性升高(P<0.05)。结论 SU11248能明显抑制CNE-2细胞增殖,可能通过上调P27KIP1、下调cyclin G1而发挥作用。

关键词：鼻咽癌苹果酸舒尼替尼 P27KIP1基因 cyclin G1基因

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内耳道不同手术入路的显微解剖比较研究进展

中国临床解剖学杂志 2014年第5期32卷 620-622页

作者：陈武兵蔡志毅台州学院医学院附属市立医院耳鼻咽喉科浙江台州318000

20世纪60年代美国House引进显微外科技术,开创了以听神经瘤切除术为代表的耳神经显微外科。此后,各国耳科专家在此基础上又衍生了多种进入内耳道、桥小脑角、岩尖和斜坡等难以到达的颅底深部手术入路。彻底切除内耳道肿瘤,完整保留和恢... 详细信息

20世纪60年代美国House引进显微外科技术,开创了以听神经瘤切除术为代表的耳神经显微外科。此后,各国耳科专家在此基础上又衍生了多种进入内耳道、桥小脑角、岩尖和斜坡等难以到达的颅底深部手术入路。彻底切除内耳道肿瘤,完整保留和恢复面神经甚至耳蜗神经功能是此类手术治疗的理想结果[1]。但目前内耳道手术肿瘤全切率及术中面神经解剖及功能保留率不尽理想,仍是耳神经外科领域所面临的难题,其影响因素包括肿瘤的大小,肿瘤与面神经的关系,

关键词：内耳道底手术入路听神经瘤面神经解剖显微外科技术桥小脑角显微解剖耳蜗神经耳神经外科全切率

全长型脾酪氨酸激酶基因转染对喉癌细胞恶性生物学行为的抑制作用

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2014年第11期49卷 943-949页

作者：李志海蔡志毅陶宝鸿金巧智浙江省台州市立医院耳鼻咽喉科 318000

目的探讨全长型脾酪氨酸激酶[full length spleen tyrosine kinase,Syk（L）]基因转染对喉癌细胞恶性生物学行为的抑制作用.方法构建Syk（L）基因真核表达载体pIRES2-EGFP-Syk（L）,测序验证正确后,用脂质体介导法及G418筛选法,分别... 详细信息

目的探讨全长型脾酪氨酸激酶[full length spleen tyrosine kinase,Syk（L）]基因转染对喉癌细胞恶性生物学行为的抑制作用.方法构建Syk（L）基因真核表达载体pIRES2-EGFP-Syk（L）,测序验证正确后,用脂质体介导法及G418筛选法,分别建立转染pIRES2-EGFP-Syk （L）载体和pIRES2-EGFP空白载体的喉癌细胞系Hep-2-Syk （L）及Hep-2-neo细胞.实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time fluorescence polymerase chain reaction,Q-RT-PCR）及蛋白印迹法（Western Blot）分析转染细胞Hep-2-Syk （L）、Hep-2-neo及未转染细胞Hep-2的Syk （L） mRNA及蛋白表达水平;采用CCK-8实验、Transwell实验、裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞及未转染细胞的体外增殖能力、侵袭能力、体内成瘤能力.采用SPSS 18.0统计软件中的方差分析进行组间样本均数的比较.结果成功构建了Syk（L）基因真核表达载体pIRES2-EGFP-SyK （L）;成功建立分别稳定转染pIRES2-EGFP-Syk（L）载体、pIRES2-EGFP空白载体的Hep-2-Syk（L）、Hep-2-neo细胞系;Q-RT-PCR结果显示Hep-2-Syk（L）细胞Syk （L） mRNA表达水平明显高于Hep-2-neo及Hep-2细胞（相对表达量2-△△CT分别为28.395±0.067、3.891±0.021及1.005 ±0.012）,差异有统计学意义（F=104.02,P＜0.01）;Western Blot结果提示Hep-2-Syk（L）细胞Syk（L）相对蛋白含量为（0.821 ±0.047）,明显高于Hep-2-neo细胞的（0.558 ±0.031）和Hep-2细胞的（0.468±0.031）,差异有统计学意义（F=112.32,P＜0.01）;CCK-8实验72 h Hep-2-Syk（L）细胞的平均吸光度值为1.390±0.067,低于Hep-2-neo细胞的1.830±0.067和Hep-2细胞的1.920±0.040,差异有统计学意义（F=107.64,P＜0.01）;Transwell实验中,Hep-2-Syk（L）组每个视野的平均侵袭细胞数目为（176.04±22.32）个,较Hep-2-neo组的（301.02±21.45）个、Hep-2组的（336.04±26.01）个明显减少,差异有统计学意义（F=123.46,P＜0.01）;裸鼠成瘤实验中,Hep-2-Syk（L）细胞组体内移植瘤生长受到抑制,平均体积为（250.77±34.83） mm3,低于Hep-2-neo组的肿瘤平均体积（750.77±40.83） mm3及Hep-2组的肿瘤平均体积（770.77±30.83） mm3差异有统计学意义（F=165.78,P＜0.01）.结论喉癌细胞中Syk（L）低表达与细胞的恶性生物学行为相关,通过基因转染技术提高Syk（L）表达可以抑制喉癌细胞的恶性生物学行为,Syk（L）可能成为喉鳞癌基因治疗良好的干预靶点.

关键词：喉肿瘤蛋白酪氨酸激酶类转染细胞系,肿瘤

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冰芒散外敷治疗阑尾周围脓肿临床观察

四川中医 2002年第8期20卷 44-45页

作者：戢运宏刘邦芝蔡志毅随州市中心医院湖北随州441300

目的 :探讨阑尾周围脓肿的有效治疗方法 ,降低手术引流率及并发症。方法 :采用中药冰片、芒硝局部外敷及抗生素常规应用的中西医结合对比治疗分析。结果 :1 1 4例 ,治愈 1 1 1例 ,治愈率 97 3 6% ,与对照组相比 ,体温恢复、疼痛缓解、... 详细信息

目的 :探讨阑尾周围脓肿的有效治疗方法 ,降低手术引流率及并发症。方法 :采用中药冰片、芒硝局部外敷及抗生素常规应用的中西医结合对比治疗分析。结果 :1 1 4例 ,治愈 1 1 1例 ,治愈率 97 3 6% ,与对照组相比 ,体温恢复、疼痛缓解、包块消失时间都有明显缩短。结论 :从本组治疗结果看 ,阑尾脓肿在常规内科治疗的基础上加用冰片、芒硝外敷是一种有效的治疗方法 ,它明显降低了脓肿手术引流率 ,减少了手术引流的并发症及住院时间。

关键词：冰芒散阑尾周围脓肿治疗中药外敷

5-杂氮-2′-脱氧胞苷诱导鼻咽癌细胞株Syk基因启动子去甲基化的研究

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中国细胞生物学学报 2012年第9期34卷 865-871页

作者：金巧智鄢冲陶宝鸿李志海蔡志毅温州医学院第一临床医学院温州325000 浙江省台州市立医院耳鼻咽喉-头颈外科台州318000

利用5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2及永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP-69,采用BS-PCR、Q-RT-PCR及Westernblot方法分别检测经5μmol/L的5-aza-CdR处理前后,各细胞株中Syk基因启动子甲基化状况及SykmRNA和蛋白质表达情况。探讨去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对鼻咽癌细胞株中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)启动子甲基化水平及其表达的影响。结果显示,Syk基因启动子甲基化水平与鼻咽癌细胞分化程度呈负相关,两种鼻咽癌细胞株的Syk mRNA和蛋白质表达水平显著低于NP-69细胞(P<0.01);经5-aza-CdR处理后两种鼻咽癌细胞株的Syk基因启动子甲基化水平降低,Syk mRNA及蛋白质表达升高(P<0.05);高分化鼻咽癌细胞株对药物敏感性高于低分化鼻咽癌细胞株(P<0.01)。由此可见,两种鼻咽癌细胞株中存在不同程度的Syk基因启动子甲基化状态,5-aza-CdR能有效逆转鼻咽癌细胞株Syk基因启动子的甲基化状态,升高Syk mRNA及蛋白质表达,同时鼻咽癌细胞分化程度越高恢复Syk基因表达的比率越高。

关键词：鼻咽癌去甲基化 5-杂氮-2′-脱氧胞苷 Syk基因

pIRES2-EGFP-SyK(L)载体构建及稳定转染喉癌Hep-2细胞株的建立

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中国卫生检验杂志 2013年第13期23卷 2718-2721页

作者：李志海蔡志毅陶宝鸿金巧智台州市立医院耳鼻咽喉科浙江台州318000

目的构建Syk(L)全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达Syk(L)的喉癌hep-2细胞系。方法化学合成结合PCR拼接SyK(L)基因,插入pMD18-simpleT载体中,测序验证正确后经XhoI和Hind III双酶切,经T4 DNA连接酶,将其与同样双酶切处理pIRES2-E... 详细信息

目的构建Syk(L)全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达Syk(L)的喉癌hep-2细胞系。方法化学合成结合PCR拼接SyK(L)基因,插入pMD18-simpleT载体中,测序验证正确后经XhoI和Hind III双酶切,经T4 DNA连接酶,将其与同样双酶切处理pIRES2-EGFP载体连接,构成新的重组质粒pIRES2-EGFP-SyK(L),测序验证正确后,以脂质体法转染喉癌Hep-2细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的Hep-2细胞株,用实时荧光定量PCR检测SyK(L)的mRNA表达。结果成功构建了pIRES2-EGFP-SyK(L)真核表达载体;建立了稳定转染pIRES2-EGFPSyK(L)的Hep-2细胞株;实时荧光定量PCR结果表明pIRES2-EGFP-SyK(L)转染Hep-2细胞株中SyK(L)mRNA表达水平明显高于空载体pIRES2-EGFP转染细胞株及空转染细胞株,差别有统计学意义(P<0.01)。结论 pIRES2-EGFP-SyK(L)真核表达载体的构建及稳定高表达SyK(L)喉癌Hep-2细胞株的建立,为进一步研究SyK(L)对喉癌细胞生物功能的影响奠定了良好的实验基础。

关键词：脾酪氨酸激酶真核表达载体 hep-2细胞基因表达

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人工耳蜗植入术后的调试及效果评估分析

中国康复理论与实践 2012年第12期18卷 1160-1162页

作者：江波陶宝鸿蔡志毅郑皓丁巍巍台州学院医学院附属市立医院浙江省台州市立医院浙江台州市318000

目的人工耳蜗植入术后儿童调试方法探讨及效果评估。方法在对6例人工耳蜗植入儿童进行为期2年的调试过程中,应用主观心理物理测试和电诱发复合动作电位(ECAP)、电诱发镫骨肌反射阈值(ESRT)、电诱发听性脑干反应(EABR)等客观检测方法进... 详细信息

目的人工耳蜗植入术后儿童调试方法探讨及效果评估。方法在对6例人工耳蜗植入儿童进行为期2年的调试过程中,应用主观心理物理测试和电诱发复合动作电位(ECAP)、电诱发镫骨肌反射阈值(ESRT)、电诱发听性脑干反应(EABR)等客观检测方法进行调试。结果 6例患者均获得较满意的结果。结论我们可应用ECAP、ESRT、EABR等客观检测方法对儿童人工耳蜗术后进行调试,结合主观心理物理测试,获得较为准确的客观阈值。

关键词：人工耳蜗植入调试电诱发听性脑干反应电诱发复合动作电位电诱发镫骨肌反射阈值

Syk基因启动子去甲基化对鼻咽癌细胞侵袭转移能力的影响

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中国卫生检验杂志 2013年第3期23卷 631-634页

作者：金巧智鄢冲陈武兵蔡志毅温州医学院第一临床医学院浙江温州325000 湖北省宜昌市第一人民医院耳鼻咽喉科湖北宜昌443000 浙江省台州市立医院耳鼻咽喉科浙江台州318000

目的:探讨去甲基化药物5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-aza-CdR)对鼻咽癌5-8F细胞Syk基因启动子去甲基化作用及其侵袭转移的影响。方法:利用5-aza-CdR处理体外培养的5-8F细胞,采用BS-PCR、Q-RT-PCR、Western Blot及Transwell方法分别检测药物干预前后5-8F细胞中Syk甲基化、Syk mRNA、Syk蛋白及穿膜细胞数的情况。结果:经5-aza-CdR处理后5-8F细胞株的甲基化水平降低(P<0.01),Syk mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),其侵袭及转移能力降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:鼻咽癌细胞Syk基因启动子甲基化导致其基因沉默,Syk基因失表达,从而引起鼻咽癌细胞的侵袭转移能力增加,5-aza-CdR可以使鼻咽癌细胞Syk基因启动子去甲基化,使因甲基化沉默的Syk基因重新表达,恢复其抑制肿瘤细胞侵袭转移的能力。

关键词：鼻咽癌 5-杂氮-2-脱氧胞苷 Syk基因侵袭转移

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干线发动机总体参数选择的某些考虑

航空发动机 1994年第3期15卷 1-7页

作者：蔡志毅

民机动力对耗油率的追求导致涡扇发动机领域中高涵遭比涡扇这个分支的迅速发展。在对CFM56.V2500等目前正在使用的机种研究的基础上,提出了在方案设计阶段进行参数选择时应考虑的一些问题,同时也讨论了当前民用涡扇发动机的发展水平。

关键词：涡扇发动机发动机总体涵道比参数选择总压比设计状态增压级涡轮效率级压比民机