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植物硫胺素的生物合成及功能

植物生理学报 2018年第12期54卷 1791-1796页

作者：孙中兴魏德强杨梅蓝兴国东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

硫胺素是噻唑和嘧啶相连的二环化合物。在植物体内,硫胺素主要以游离硫胺素、硫胺素单磷酸和硫胺素焦磷酸三种形式存在。在硫胺素的生物合成过程中,嘧啶和噻唑部分分别合成,最终偶联形成硫胺素焦磷酸形式。嘧啶合成酶(THIC)、噻唑合成酶... 详细信息

硫胺素是噻唑和嘧啶相连的二环化合物。在植物体内,硫胺素主要以游离硫胺素、硫胺素单磷酸和硫胺素焦磷酸三种形式存在。在硫胺素的生物合成过程中,嘧啶和噻唑部分分别合成,最终偶联形成硫胺素焦磷酸形式。嘧啶合成酶(THIC)、噻唑合成酶(THI1)、硫胺素磷酸合成酶(TH1)和硫胺素焦磷酸激酶(TPK)是硫胺素合成途径中的关键酶,调控植物体内硫胺素的合成。硫胺素在植物的生长发育、生物胁迫及非生物胁迫响应等方面具有重要的作用。

关键词：硫胺素生物合成生长发育生物胁迫非生物胁迫

抗人Apo B_(100)单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第7期28卷 726-729页

作者：张晓磊聂玉哲蓝兴国李玉花东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 大庆麦伯康生物技术有限公司黑龙江大庆163316

目的:制备抗人载脂蛋白B100(Apo B100)单克隆抗体(mAb),建立人Apo B100双抗体夹心ELISA检测方法。方法:将人Apo B100抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株。将细胞株用无血清培养基扩大培养并纯化上清获得抗体,测定抗体... 详细信息

目的:制备抗人载脂蛋白B100(Apo B100)单克隆抗体(mAb),建立人Apo B100双抗体夹心ELISA检测方法。方法:将人Apo B100抗原免疫小鼠,通过细胞融合、筛选后得到杂交瘤细胞株。将细胞株用无血清培养基扩大培养并纯化上清获得抗体,测定抗体亲和力、亚型、特异性及表位,最后建立双抗体夹心ELISA方法。结果:获得4株抗人Apo B100的杂交瘤细胞株(4-1-2、4-2-2、4-3-2、4-6-3),其分泌的抗体不与其他相关蛋白交叉反应,亲和力达到1×109L/mol。用4-3-2和4-6-3建立的双抗体夹心法的检测范围为(1.3～80)ng/mL,灵敏度1.24 ng/mL,批内变异系数均小于10%,批间变异系数均小于15%,回收率在90%以上。结论:成功制备了抗人Apo B100mAb,建立了定量检测人Apo B100的双抗体夹心ELISA方法,为Apo B100检测及疾病的诊断奠定基础。

关键词：人载脂蛋白B100 单克隆抗体夹心ELISA

羽衣甘蓝M位点蛋白激酶MLPK基因的克隆及蛋白纯化

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分子植物育种 2022年

作者：李双辉赵朝宁史嘉渊李晓屿吴莹蓝兴国东北林业大学东北盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室

为分离自交不亲和性（self-incompatibility， SI）关键基因M位点蛋白激酶（M-locus protein kinase， MLPK）的两种关键转录本MLPKf1和MLPKf2，并纯化其激酶域蛋白，本研究以羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala）自交不亲和系(... 详细信息

为分离自交不亲和性（self-incompatibility， SI）关键基因M位点蛋白激酶（M-locus protein kinase， MLPK）的两种关键转录本MLPKf1和MLPKf2，并纯化其激酶域蛋白，本研究以羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala）自交不亲和系(S;S;)为实验材料，提取羽衣甘蓝柱头总RNA，通过RT-PCR和RACE获得BoMLPKf1和BoMLPKf2全长基因，然后将其激酶域的编码区克隆到载体pET-14b和pCold-SUMO上并转化到大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。BoMLPKf1和BoMLPKf2开放阅读框全长分别为1 215 bp和1 233 bp，分别编码404和410个氨基酸的蛋白，二者C端386个氨基酸长度的激酶域序列一致。构建MLPK激酶域pET-14b-MLPK-KD融合表达载体，进行原核表达纯化，发现重组蛋白表达时形成包涵体。构建pCold-SUMO-MLPK-KD表达载体，转化到有分子伴侣的表达菌株BL21（DE3）Chaprone中，纯化出可溶的BoMLPK-KD蛋白，该融合蛋白分子量约58 kDa。进一步又对纯化蛋白进行质谱分析，结果显示纯化蛋白即为羽衣甘蓝MLPK的激酶结构域蛋白。该研究为探讨MLPK蛋白的生物学功能奠定基础。

关键词：羽衣甘蓝自交不亲和 M位点蛋白激酶激酶域原核表达

羽衣甘蓝BoMAPK4原核表达、抗体制备及蛋白表达分析

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同方期刊数据库

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植物研究 2022年第4期42卷 584-591页

作者：栗赫铭秦洪涛魏德强李旭蓝兴国东北盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室东北林业大学哈尔滨150040

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea ***)自交不亲和系(S_(13-b)S_(13-b))为材料,提取柱头RNA,利用RT-PCR分离羽衣甘蓝柱头丝裂原活化蛋白激酶4(MAPK4)基因。结果表明:获得的Bo MAPK4 c DNA含有一个1 122 bp开放阅读框,编码373个氨基酸,具有... 详细信息

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea ***)自交不亲和系(S_(13-b)S_(13-b))为材料,提取柱头RNA,利用RT-PCR分离羽衣甘蓝柱头丝裂原活化蛋白激酶4(MAPK4)基因。结果表明:获得的Bo MAPK4 c DNA含有一个1 122 bp开放阅读框,编码373个氨基酸,具有丝氨酸/苏氨酸结构域,无信号肽和跨膜结构。羽衣甘蓝Bo MAPK4与油菜(***)Bn MAPK4、芜菁(***)Br MAPK4、拟南芥(Arabidopsis thaliana)At MAPK4的氨基酸序列一致性分别为99.7%、99.5%、95.4%。将Bo MAPK4编码区的序列构建到原核表达载体p ET-14b上,并转化到BL21(DE3)大肠杆菌(Escherichia coli)中进行原核表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量大小约45 k Da处有Bo MAPK4重组蛋白特异性表达。利用亲和层析的方法获得高纯度的重组Bo MAPK4蛋白。利用获得的重组Bo MAPK4蛋白免疫小鼠,制备Bo MAPK4的多克隆抗体。提取羽衣甘蓝萼片、花瓣、花药、柱头、花柱和子房的总蛋白,利用免疫印迹的方法进行蛋白表达检测,结果发现Bo MAPK4在花瓣、花药和子房中表达的较少,在萼片和花柱中表达的较多,在柱头中的表达量最高。这些研究为探讨Bo MAPK4的生物学功能奠定了基础。

关键词：羽衣甘蓝柱头丝裂原活化蛋白激酶4 多克隆抗体免疫印迹

抗人CA19-9单克隆抗体的制备和鉴定及化学发光检测体系的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第12期30卷 1282-1286页

作者：蓝兴国曹领改魏德强赵洪梅李玉花东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 大庆麦伯康生物技术有限公司黑龙江大庆163316 东北林业大学大庆生物技术研究院黑龙江大庆163316

目的制备抗人糖抗原19-9（CA19-9）单克隆抗体（mAb）,建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包... 详细信息

目的制备抗人糖抗原19-9（CA19-9）单克隆抗体（mAb）,建立双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。方法 CA19-9免疫小鼠后,通过细胞融合技术,获得抗CA19-9的mAb。鉴定其抗体的纯度、效价、特异性和配对,建立双抗体夹心化学发光体系。在包被缓冲液、包被浓度及加样模式上优化化学发光体系,对该体系进行准确度、最低检测限、线性、重复性评估以及血清样本的检测。结果获得4株名称为#1-1、#2-1、#3-1和#4-1的mAb。抗体效价均大于10^-8,与CA125、CA15-3、CA72-4均无交叉反应。其中#3-1 mAb与#2-1-HRP建立的双抗体夹心体系经优化后,其检测范围为0~1 000 U/mL;最低检测限为2.0 U/mL;线性相关系数为0.9999。与罗氏试剂检测结果对比,Kappa系数大于0.75;相关系数大于0.9。结论成功制备了抗人CA19-9 mAb,建立了双抗体夹心检测CA19-9化学发光体系。

关键词： CA19-9 单克隆抗体酶联免疫吸附分析化学发光免疫分析

内源小RNAs的生物合成及其在植物发育中的作用

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生物技术通报 2012年第4期28卷 7-13页

作者：刘震西蓝兴国康瑞霞李玉花东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

在真核生物中,具有20-30个核苷酸的小RNAs能够在DNA或RNA水平上广泛调控复杂生理进程。介绍植物中3种主要内源小RNAs:microRNAs、trans-acting siRNAs和heterochromatic siRNAs的生物合成及其在植物发育中的作用。

关键词： MicroRNAs Trans-actingsiRNAs Heterochromatic siRNAs 植物发育

羽衣甘蓝类蛋白质二硫键异构酶PDIL1-2的基因克隆及蛋白表达分析

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植物研究 2020年第2期40卷 293-300页

作者：李阳施亚坤高士科李晓屿蓝兴国东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea ***)自交不亲和系(S13-bS13-b)为试材,利用RT-PCR和RACE的方法从柱头中分离类蛋白质二硫键异构酶BoPDIL1-2基因。将BoPDIL1-2编码区的序列构建到原核表达载体pET-14b上,并转化到大肠杆菌中进行原核表达与... 详细信息

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea ***)自交不亲和系(S13-bS13-b)为试材,利用RT-PCR和RACE的方法从柱头中分离类蛋白质二硫键异构酶BoPDIL1-2基因。将BoPDIL1-2编码区的序列构建到原核表达载体pET-14b上,并转化到大肠杆菌中进行原核表达与纯化;用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备BoPDIL1-2多克隆抗体;通过免疫印迹法检测BoPDIL1-2在不同组织及不同发育阶段柱头的表达情况。氨基酸序列比对分析结果显示,羽衣甘蓝BoPDIL1-2与油菜BnPDIL1-2、拟南芥AtPDIL1-2的一致性分别是97.3%和85.5%。SDS-PAGE结果显示,在分子量58 kD处有BoPDIL1-2蛋白特异性地诱导表达。免疫印迹结果显示BoPDIL1-2在羽衣甘蓝柱头中特异表达,而且在柱头发育早期表达量较低,在开花期柱头表达量较高。

关键词：羽衣甘蓝类蛋白质二硫键异构酶原核表达多克隆抗体表达分析

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植物天冬氨酸蛋白酶的结构与功能

生物技术通讯 2018年第6期29卷 866-870页

作者：高杉蓝兴国东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040

天冬氨酸蛋白酶是主要的蛋白水解酶之一,广泛存在于细菌、真菌、动物和植物中。近年来,对植物天冬氨酸蛋白酶的结构及功能研究有了一些进展。本文简要总结了植物天冬氨酸蛋白酶的结构,典型的植物天冬氨酸蛋白酶的加工产生成熟过程,植物... 详细信息

天冬氨酸蛋白酶是主要的蛋白水解酶之一,广泛存在于细菌、真菌、动物和植物中。近年来,对植物天冬氨酸蛋白酶的结构及功能研究有了一些进展。本文简要总结了植物天冬氨酸蛋白酶的结构,典型的植物天冬氨酸蛋白酶的加工产生成熟过程,植物天冬氨酸蛋白酶在植物生物胁迫、非生物胁迫、种子萌发、有性生殖过程及植物衰老等方面的功能。

关键词：天冬氨酸蛋白酶结构与分类加工机制胁迫反应有性生殖与衰老

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植物葡萄糖磷酸变位酶的研究进展

植物生理学报 2015年第5期51卷 617-622页

作者：李晓屿李玉花李晗李治龙蓝兴国东北林业大学生命科学学院发育生物学研究室哈尔滨150040

葡萄糖磷酸变位酶(PGM)是生物新陈代谢的关键酶,可催化葡萄糖-1-磷酸和葡萄糖-6-磷酸相互转化。在植物中,PGM分为胞质型PGM和质体型PGM。胞质型PGM参与蔗糖的代谢;质体型PGM参与淀粉的合成。近期发现,PGM在植物生长发育中起到重要作用... 详细信息

葡萄糖磷酸变位酶(PGM)是生物新陈代谢的关键酶,可催化葡萄糖-1-磷酸和葡萄糖-6-磷酸相互转化。在植物中,PGM分为胞质型PGM和质体型PGM。胞质型PGM参与蔗糖的代谢;质体型PGM参与淀粉的合成。近期发现,PGM在植物生长发育中起到重要作用。本文主要对植物中葡萄糖磷酸变位酶的分类、分子性质及功能等方面进行综述。

关键词：葡萄糖磷酸变位酶蔗糖代谢淀粉合成植物发育