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烟草NtPYL6表达模式及其调控芸香苷的合成功能分析

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烟草科技 2024年

作者：陈钰栋李冰雨许力邢佳鑫蒋佳芮米其利杨军李雪梅王中高茜云南中烟工业有限责任公司技术中心中国烟草总公司郑州烟草研究院

为探究ABA受体蛋白PYL在ABA促进芸香苷合成过程中的作用，从栽培烟草基因组中克隆鉴定了NtPYL6基因，并进行了序列分析、表达模式检测、突变体创制及芸香苷含量检测。结果表明 NtPYL6参与了调控烟草中ABA诱导的芸香苷合成。栽培烟草基... 详细信息

为探究ABA受体蛋白PYL在ABA促进芸香苷合成过程中的作用，从栽培烟草基因组中克隆鉴定了NtPYL6基因，并进行了序列分析、表达模式检测、突变体创制及芸香苷含量检测。结果表明 NtPYL6参与了调控烟草中ABA诱导的芸香苷合成。栽培烟草基因组中有两个同源性较高的NtPYL6基因，分别命名为NtPYL6a和NtPYL6b，其编码蛋白具有典型的PYR＿PYL＿RCAR＿like结构域。基因表达水平分析显示，NtPYL6a和NtPYL6b在烟草茎和叶片表现出较高的转录活性，且表达量受ABA、BL、MeJA和ACC的显著诱导。序列分析发现，NtPYL6a基因上游1 393 bp启动子片段中含有多种激素相关的转录调控元件，能够启动上述激素诱导的该基因表达。利用Crispr/cas9创制了ntpyl6突变体，发现与野生型相比，ntpyl6突变体对ABA处理的敏感性降低，且ABA诱导的芸香苷合成在突变体中被显著地抑制。同时，还发现ntpyl6突变体中ABA对芸香苷合成相关基因的诱导作用被显著抑制，而在NtPYL6a过表达材料中基因表达水平被显著上调。可见，NtPYL6在ABA促进烟草芸香苷合成过程中发挥着作用，可为烟草品质改良育种提供新的靶标基因。

关键词：烟草脱落酸 PYL 芸香苷基因表达

烟草苯丙氨酸解氨酶基因NtPAL的克隆及功能分析

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中国烟草学报 2024年

作者：许力许永向海英黄海涛米其利陈钰栋蒋佳芮李雪梅高茜云南中烟工业有限责任公司技术中心

【背景和目的】烟草苯丙氨酸解氨酶参与苯丙氨酸代谢途径，不仅跟烟叶香气品质相关，而且对烟草抗病、抗逆等防御功能也有影响。为鉴定苯丙氨酸解氨酶参与烟草抗花叶病途径的基因功能。【方法】采用同源克隆的方法，在栽培烟草红花大金... 详细信息

【背景和目的】烟草苯丙氨酸解氨酶参与苯丙氨酸代谢途径，不仅跟烟叶香气品质相关，而且对烟草抗病、抗逆等防御功能也有影响。为鉴定苯丙氨酸解氨酶参与烟草抗花叶病途径的基因功能。【方法】采用同源克隆的方法，在栽培烟草红花大金元中克隆了苯丙氨酸解氨酶基因NtPAL，利用生物信息学方法分析NtPAL蛋白结构和进化关系。采用CRISPR/cas9基因编辑技术获得NtPAL基因编辑植株PAL-KO，在植株成熟期测定多酚含量和苯丙氨酸解氨酶活性。利用本氏烟草瞬时表达系统，进行NtPAL亚细胞定位分析。【结果】烟草NtPAL基因的全长CDS序列为2016bp，编码一个由671个氨基酸组成的PAL蛋白。NtPAL含有典型的苯丙氨酸解氨酶结构域PLN02457，是一个新的烟草NtPAL基因。亚细胞定位实验表明NtPAL定位在细胞核区域。与对照植株相比，编辑植株PAL-KO对烟草花叶病毒（TMV）的抗性降低，成熟期叶片中新绿原酸、莨菪亭、隐绿原酸、绿原酸及芸香苷等5种多酚含量均显著升高，苯丙氨酸解氨酶活性降低。【结论】烟草NtPAL通过调控多酚含量与苯丙氨酸解氨酶活性响应烟草花叶病抗性。该研究结果为深入阐明NtPAL在烟草抗病性增强和遗传改良方面的潜力奠定了理论基础。

关键词：烟草 NtPAL 亚细胞定位基因功能抗病性

烟草香气相关基因CRISPR/Cas9编辑突变体库的构建

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广西植物 2024年第7期44卷 1278-1288页

作者：曾婉俐梁岗高茜李元川许力蒋佳芮许永向海英云南中烟工业有限责任公司技术中心云南省烟草化学重点实验室昆明650231 中国科学院西双版纳热带植物园热带植物资源可持续利用重点实验室昆明650223 云南农业大学昆明650201

为探究CRISPR/Cas9基因编辑技术构建烟草突变体库的可行性,该研究以烤烟品种‘红花大金元’为实验材料筛选了100个可能参与烟草香气代谢的基因,设计相应的100个sgRNA并构建了由100个CRISPR/Cas9编辑载体组成的质粒库,获得转基因材料后... 详细信息

为探究CRISPR/Cas9基因编辑技术构建烟草突变体库的可行性,该研究以烤烟品种‘红花大金元’为实验材料筛选了100个可能参与烟草香气代谢的基因,设计相应的100个sgRNA并构建了由100个CRISPR/Cas9编辑载体组成的质粒库,获得转基因材料后分析了载体的共转化率、靶向编辑率和脱靶编辑情况。结果表明:(1)通过农杆菌介导100个sgRNA的共转化后,在172个阳性转化株中检测到了其中的77个sgRNA,共转化率为77%。(2)在77个携带sgRNA的转基因后代中,69个sgRNA对目标基因进行了靶向编辑,编辑率为89.6%。(3)脱靶位点测序检测发现,只有1个sgRNA在非目标靶位点产生了脱靶编辑,表明CRISPR/Cas9基因编辑技术在烟草中的脱靶概率非常低。综上所述,利用CRISPR/Cas9载体库共转化对烟草基因进行高通量靶向编辑以构建突变体库的方法切实可行,并且该方法有共转化率高、编辑率高和脱靶编辑概率低等特点。

关键词：烟草 CRISPR/Cas9 烟草香气靶向编辑脱靶编辑

基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的小麦条锈菌检测方法建立

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基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的小麦条锈菌检测方法建立

中国植物病理学会2024年学术年会

作者：吕璇蒋佳芮蓝思淑马玥蒙思静马占鸿中国农业大学植物病理学系农业农村部作物有害生物监测与绿色防控重点实验室

小麦作为全球主要粮食作物之一,在世界范围内广泛种植。小麦条锈病作为一种由条形柄锈菌小麦专化型[Puccinia striiformis ***(Pst)]引起的真菌性病害,严重威胁着世界小麦产区生产以及粮食安全。目前研究人员已设计出多种针对小麦条锈... 详细信息

小麦作为全球主要粮食作物之一,在世界范围内广泛种植。小麦条锈病作为一种由条形柄锈菌小麦专化型[Puccinia striiformis ***(Pst)]引起的真菌性病害,严重威胁着世界小麦产区生产以及粮食安全。目前研究人员已设计出多种针对小麦条锈菌检测的方法,如PCR和实时荧光定量PCR等。虽然这些方法可以有效检测病原菌,但由于设备和操作的复杂性,在大规模田间样品的检验中存在局限性。最近,重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)作为一种新兴的恒温扩增方法,具有快速、灵敏、简便的优点,并已应用于多种病原物检测。本研究选取一段条锈菌特异性DNA片段作为靶标序列,设计用于重组酶聚合酶扩增技术的特异性引物并结合侧向试纸条(lateral flow strips,LFD)检测设计探针。经过反应体系优化及特异性验证,实现了39℃、30 min目标核酸快速扩增和结果的可视化检测。该方法可有效区分Pst和小麦叶锈病、秆锈病、白粉病、赤霉病4种小麦常见病害病原物。灵敏度检测结果表明,本研究中建立的检测体系能够检测DNA的最低限为104 fg。本研究提供了小麦条锈病快速、可视化检测方法,其在生产上有较好的应用前景,同时对其他病原物LFD-RPA检测方法的探索有一定的借鉴意义。

关键词：小麦小麦条锈病快速检测重组酶聚合酶扩增

来源： cnki会议评论

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长大之前，恋爱以后

医改背景下公立医院医务人员激励机制研究 ——以X公立医院为例

2016年

作者：蒋佳芮

这是一本写给期待恋爱的，正在恋爱的，曾经爱过的男孩女孩的青春修恋手册，满满的高能预警。在听过了很多道理，自以为了解人生的年纪，我们要怎样才能遇到好的爱情；我们想了解爱情会把我们变成什么样子，我们需要这样一部无关两性，... 详细信息

ISBN: (数字)9787510843457

ISBN: (纸本)9787510843457

这是一本写给期待恋爱的，正在恋爱的，曾经爱过的男孩女孩的青春修恋手册，满满的高能预警。在听过了很多道理，自以为了解人生的年纪，我们要怎样才能遇到好的爱情；我们想了解爱情会把我们变成什么样子，我们需要这样一部无关两性，无关婚姻的纯爱宝典，单纯地写下我们的爱。

关键词：恋爱通俗读物

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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医改背景下公立医院医务人员激励机制研究 ...

作者：蒋佳芮重庆理工大学

学位级别：硕士

随着医改方案在全国各地陆续推行,我国各大公立医院需要主动适应新医改的发展趋势,不断满足医务人员的各种激励诉求,努力发现医务人员在激励方面的具体问题,采取有针对性的激励措施,提升医务人员的工作满意度,从而进一步提升公立医院的... 详细信息

随着医改方案在全国各地陆续推行,我国各大公立医院需要主动适应新医改的发展趋势,不断满足医务人员的各种激励诉求,努力发现医务人员在激励方面的具体问题,采取有针对性的激励措施,提升医务人员的工作满意度,从而进一步提升公立医院的整体工作效率,提高公立医院的核心竞争力。本文以X公立医院为例,在公立医院医疗改革的背景下,首先阐述了新医改方案对公立医院医务人员激励机制的影响,新医改方案对医务人员激励机制的要求。其次分析了X公立医院当前激励机制的现状,包括医院的基本情况,医院绩效改革前后差别,医院激励机制效应分析。然后发现了X公立医院在激励机制中的问题,包括激励方式选择以内、外激励为主,激励因素确定缺乏科学性,薪酬激励中绩效工资内部比例分配不均衡,考核评价标准以业务收入为导向。最后对X医院激励机制进行了优化设计,提出了医务人员激励机制优化的总体思路,医务人员激励机制优化的方案以及医务人员激励机制优化方案的实施保障。

关键词：医改公立医院医务人员激励机制

上司示意型知识隐藏的双刃剑效应及其边界条件研究

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管理学报 2021年第5期18卷 684-694页

作者：赵红丹蒋佳芮上海大学管理学院上海市200444

基于压力认知评价理论,构建了有调节的中介模型以探讨上司示意型知识隐藏影响下属知识隐藏的二元效应及其边界条件。基于两个时间点的团队成员配对数据,采用路径分析对假设模型进行检验。研究结果表明:上司示意型知识隐藏一方面会诱发... 详细信息

基于压力认知评价理论,构建了有调节的中介模型以探讨上司示意型知识隐藏影响下属知识隐藏的二元效应及其边界条件。基于两个时间点的团队成员配对数据,采用路径分析对假设模型进行检验。研究结果表明:上司示意型知识隐藏一方面会诱发道德推脱,从而促进下属知识隐藏;一方面也会唤醒关系经营,从而抑制下属知识隐藏;且两种效应与道德认同和权力距离导向的联合调节作用相关。

关键词：上司示意型知识隐藏道德推脱关系经营道德认同权力距离导向

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产香细菌的筛选及产香特性分析

基因组学与应用生物学 2020年第2期39卷 636-643页

作者：曾婉俐许力蒋佳芮张建铎张涛李雪梅向海英云南中烟工业有限责任公司技术中心 650231

醇化烟叶作为巨大的微生物库,具有极其可观的研究和应用价值。本研究应用模拟烟叶生长环境的烟叶浸提物培养基筛选产香细菌,并分析所筛选菌株发酵烟叶的产香特性,用于研究其在烟叶醇化中提升烟叶香味的可行性,同时探究该微生物用于生产... 详细信息

醇化烟叶作为巨大的微生物库,具有极其可观的研究和应用价值。本研究应用模拟烟叶生长环境的烟叶浸提物培养基筛选产香细菌,并分析所筛选菌株发酵烟叶的产香特性,用于研究其在烟叶醇化中提升烟叶香味的可行性,同时探究该微生物用于生产天然香料的可能性。实验结果表明:通过烟叶浸提物培养基筛选出一株细菌HD-40,该菌可发酵烟叶可产生明显奶香味;经生理生化和分子生物学鉴定,初步表明该菌属于甲基营养型芽孢杆菌;进一步,利用该菌株发酵处理烟叶,并将发酵液萃取后GC-MS检测,与未经菌株处理的发酵液对比,其所含的酯类、醛类、酸类等对香气有贡献的成分明显增加,特别是其中3-羟基-2-丁酮的比例可高达60%以上。HD-40可发酵烟叶产生明显的奶香味,其不仅在烟叶醇化方面,用于提高烟叶香气、改善烟叶吸味等,还可在制备天然香料香精方面均有着很好的应用前景。

关键词：产香细菌发酵产香特性气相质谱联用烟叶醇化香精香料

烤烟K326与黄酒酒曲共发酵过程中烟叶表面细菌多样性动态分析

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基因组学与应用生物学 2022年第11期41卷 2130-2143页

作者：董高峰李诚昊杨文武朱杰李振杰蒋佳芮米其利李晓敏云南省烟草化学重点实验室云南中烟工业有限责任公司技术中心昆明650231 江南大学粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心无锡214122

为揭示3种黄酒酒曲(生麦曲、熟麦曲、药白曲)与烤烟K326烟叶共发酵过程中细菌的多样性及其对关键酶活的影响,采用高通量测序分析共发酵过程中细菌群落结构组成和动态变化,并进一步探讨烟叶细菌多样性变化与关键酶活的相关性。结果显示,... 详细信息

为揭示3种黄酒酒曲(生麦曲、熟麦曲、药白曲)与烤烟K326烟叶共发酵过程中细菌的多样性及其对关键酶活的影响,采用高通量测序分析共发酵过程中细菌群落结构组成和动态变化,并进一步探讨烟叶细菌多样性变化与关键酶活的相关性。结果显示,3种黄酒酒曲共发酵的10 g烟叶样品OTU(Operational taxonomic units)数在103~344,且样品间OTU数都有显著差异(P<0.001);在发酵过程中,生麦曲处理烟叶样品具有较多特有OTU,糖多孢菌属(Saccharopolyspora)、葡萄球菌属(Staphylococcus)和假单胞菌属(Pseudomonas)为主要优势菌;药白曲处理烟叶样品中细菌群落丰富度及多样性高于生麦曲和熟麦曲共发酵烟叶的,其中魏斯氏菌属、葡萄球菌属和假单胞菌属等为优势细菌;聚类分析结果显示,相对于其他酒曲而言,不同发酵时期的药白曲共发酵烟叶样品相关性不高,这说明了其细菌结构的多变性。通过冗余分析进一步探究关键酶的酶活与烟叶中细菌多样性的关系,其中淀粉酶对优势细菌组成的影响最大。本研究结果为微生物调控烟叶醇化过程、提升烟叶品质的应用研究提供一定的参考。

关键词：烤烟K326 黄酒酒曲共发酵烟叶表面细菌多样性