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镁黄长石生物活性陶瓷对人诱导性多潜能干细胞行为影响研究

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镁黄长石生物活性陶瓷对人诱导性多潜能干细胞行为影响研究

作者：董溪溪中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的：诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells (iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。先前的研究结果已经证实iPSCs可以诱导分化为成骨细胞。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生... 详细信息

目的：诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells (iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。先前的研究结果已经证实iPSCs可以诱导分化为成骨细胞。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长过程中支架材料微环境对种子细胞的增殖、分化的影响同样重要。因此在此实验中,我们利用镁黄长石,一种硅酸盐生物活性陶瓷材料,研究其体外诱导刺激iPSCs分化的拟胚体细胞成骨分化,为动物体内实验奠定基础。方法： (1)人iPSCs多能性鉴定,包括碱性磷酸酶染色、细胞核型检测、多能性基因(Oct3/4, Sox2, Nanog, SSEA-4, TRA-1-60, and RA-1-81)免疫荧光染色、畸胎瘤实验、三胚层组织细胞苏木精&曙红染色。 (2)体外生长培养基对比不同浓度镁黄长石浸提液(1/32、1/64、1/128、1/256)作用于人iPSCs细胞免疫荧光染色检测细胞多能性基因,另外生长培养基组、成骨诱导因子组、镁黄长石浸提液各浓度组作用于人iPSCs细胞分化来源拟胚体细胞,在第7天细胞碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶活性检测,第14、21天检测成骨相关基因,第21天同时进行茜素红染色。结果： (1)我们看到人iPSCs有ALP表达,核型正常,同时多能性基因的表达阳性,最后畸胎瘤形成以及三个胚层组织细胞苏木精&曙红染色,鉴定结果符合诱导性多潜能干细胞要求。 (2)在有成骨诱导因子(维生素C、地塞米松、b-甘油磷酸钠)的条件下,镁黄长石浸提液的成骨诱导作用优于单纯成骨诱导液作用。在一定浓度范围的镁黄长石浸提液刺激下,细胞碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨相关基因检测结果显示骨钙(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、RUNT相关因子2 (RUNX2)、骨形态发生蛋白(BMP2)的表达明显高于对照组。而当镁黄长石浸提液中不含成骨诱导因子时,相比于生长培养基组成骨分化在早期没有变化,在分化后期第21天成骨分化增强。结论：在不含成骨诱导因子的条件下镁黄长石生物活性陶瓷对人iPSCs分化来源拟胚体细胞成骨分化有促进作用,其作为支架材料联合人iPSCs在骨组织工程中具有广阔的应用前景。

关键词：硅酸盐生物陶瓷镁黄长石诱导多潜能干细胞成骨分化

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镁黄长石浸提液诱导多潜能干细胞的成骨分化

中国组织工程研究 2015年第14期19卷 2236-2242页

作者：杜庆华曹均凯董溪溪鄂玲玲魏丽君解放军总医院口腔科北京市100853

背景:镁黄长石属于硅酸盐生物活性陶瓷,在生物体内具有降解作用,降解溶出的离子产物能够诱导细胞成骨分化,是组织工程骨支架材料的良好选择。目的:通过研究不同浓度的镁黄长石浸提液对诱导性多潜能干细胞增殖和成骨分化的影响,确定镁黄... 详细信息

背景:镁黄长石属于硅酸盐生物活性陶瓷,在生物体内具有降解作用,降解溶出的离子产物能够诱导细胞成骨分化,是组织工程骨支架材料的良好选择。目的:通过研究不同浓度的镁黄长石浸提液对诱导性多潜能干细胞增殖和成骨分化的影响,确定镁黄长石浸提液促进诱导性多潜能干细胞成骨分化的最佳浓度。方法:将诱导性多潜能干细胞培养于不同浓度的镁黄长石浸提液中,用MTT法检测细胞的增殖情况;在第7,14,21天时,分别收集培养上清液,检测其中碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白含量。结果与结论:镁黄长石浸提液促进诱导性多潜能干细胞增殖的作用具有时间依赖性,第3天时,诱导性多潜能干细胞增殖明显,第5天与第3天相比差异无显著性意义,至第7天时则明显减弱。同时,1/4浓度浸提液组促进诱导性多潜能干细胞增殖作用最强。作为细胞成骨分化标志的碱性磷酸酶和骨钙素含量随时间增加而增加,1/4浸提液浓度组含量最高。作为细胞成骨分化早中期标志的Ⅰ型胶原蛋白在第7天时各组均未检出,第14,21天时,同样是1/4浓度浸提液组含量最高,这些说明镁黄长石浸提液中的Ca、Mg、Si离子参与了诱导性多潜能干细胞的成骨分化,其中1/4浓度浸提液(Ca离子2.37 mmol/L、Mg离子1.12 mmol/L、Si离子1.05 mmol/L)促进诱导性多潜能干细胞体外成骨分化的效果最好。

关键词：干细胞分化镁黄长石诱导性多潜能干细胞成骨分化浸提液碱性磷酸酶骨钙素 Ⅰ型胶原蛋白国家自然科学基金

MicroRNA-20a通过调节CKIP-1促进小鼠C3H/10T1/2成骨分化

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中国实验血液学杂志 2017年第1期25卷 214-220页

作者：陈俊凤杨燕美董溪溪董晓惠王玉涵黄小会江小霞曹均凯中国人民解放军总医院口腔科北京100853 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所前沿交叉学科研究室北京100850

目的:研究microRNA-20a(miR-20a)对小鼠C3H/10T1/2细胞成骨分化作用的影响及其调控机制。方法:对贴壁培养的小鼠C3H/10T1/2细胞成骨诱导不同时间,ALP染色及应用qRT-PCR验证其诱导结果,同时观察MiR-20a在诱导过程中表达变化;细胞转染MiR-... 详细信息

目的:研究microRNA-20a(miR-20a)对小鼠C3H/10T1/2细胞成骨分化作用的影响及其调控机制。方法:对贴壁培养的小鼠C3H/10T1/2细胞成骨诱导不同时间,ALP染色及应用qRT-PCR验证其诱导结果,同时观察MiR-20a在诱导过程中表达变化;细胞转染MiR-20a mimics,CKIP-1 siRNA,在荧光显微镜下观察转染效果,应用qRT-PCR测定过表达及干扰效率;qRT-PCR检测过表达MiR-20a及干扰CKIP-1对细胞成骨分化的影响及过表达MiR-20a对CKIP-1基因表达的影响。结果:成骨标记基因ALP、OSX、OCN、BSP随小鼠C3H/10T1/2细胞诱导过程逐渐升高,且成骨诱导分化过程中MiR-20a表达上调。过表达MiR-20a促进C3H/10T1/2细胞成骨分化,成骨标记基因碱性磷酸酶(ALP)、RUNX2、OSX、0CN、BSP显著高于对照组,并且抑制CKIP-1的表达;干扰CKIP-1能促进细胞成骨标记基因表达。结论:MiR-20a可能通过下调骨形成负调节因子CKIP-1的表达促进C3H/10T1/2细胞成骨分化。

关键词： MiR-20a CKIP-1 C3H/10T1/2 成骨分化

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关于诱导性多潜能干细胞成骨分化的研究进展

中华老年口腔医学杂志 2013年第4期11卷 239-243页

作者：董溪溪张彤曹均凯解放军总医院口腔医学研究所硕士生北京100853 解放军总医院口腔正畸科副主任医师北京100853 解放军总医院老年口腔病科副主任医师副教授北京100853

诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)是通过基因重编程的诱导方法,诱导分化成熟的体细胞转化为具有多向分化潜能的细胞。由于IPS细胞的多向分化特性,且具有不受伦理方面制约的优势,因而,成为现阶段干细胞研究... 详细信息

诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)是通过基因重编程的诱导方法,诱导分化成熟的体细胞转化为具有多向分化潜能的细胞。由于IPS细胞的多向分化特性,且具有不受伦理方面制约的优势,因而,成为现阶段干细胞研究的热点。目前国内外相关研究大多是关于胚胎干细胞和间充质干细胞成骨分化方面的研究,而关于诱导性多潜能干细胞成骨分化的研究鲜有报道,因此本文是对国内外关于诱导性多潜能干细胞成骨分化方法及其进展的综述。

关键词：诱导性多潜能干细胞 IPS细胞分化成骨细胞

镁黄长石复合支架对人诱导性多潜能干细胞体外及体内成骨分化的影响研究

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镁黄长石复合支架对人诱导性多潜能干细胞体外及体内成骨分化的影...

第十一次全国口腔修复学学术会议

作者：董溪溪鄂玲玲郭斌曹均凯李海燕解放军总医院口腔科

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells(iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长过程中支架材料微环境对种子细胞的增殖、分化的影响同样...

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells(iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长过程中支架材料微环境对种子细胞的增殖、分化的影响同样重要。因此在此实验中,我们利用镁黄长石粉体复合PLGA制作支架材料,研究其体外三维条件下刺激iPSCs成骨分化及体内成骨修复骨缺损,为骨组织工程应用奠定基础。方法:(1)利用PLGA复合不同质量镁黄长石粉体制备镁黄长石复合支架。体外镁黄长石复合支架接种

关键词：

镁黄长石复合支架对人诱导性多潜能干细胞体外及体内成骨分化的影响研究

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镁黄长石复合支架对人诱导性多潜能干细胞体外及体内成骨分化的影...

中华口腔医学会第十五次全国颞下颌关节病学及牙合学学术研讨会

作者：董溪溪董昕鄂玲玲郭斌李海燕曹均凯解放军总医院

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells (iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长过程中支架材料微环境对种子细胞的增殖、分化的影响同...

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells (iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长过程中支架材料微环境对种子细胞的增殖、分化的影响同样重要。因此在此实验中,我们利用镁黄长石粉体复合PLGA制作支架材料,研究其体外三维条件下刺激iPSCs成骨分化及体内成骨修复骨缺损,为骨组织工程应用奠定基础。

关键词：

镁黄长石复合支架对人诱导性多潜能干细胞体外及体内成骨分化的影响研究

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镁黄长石复合支架对人诱导性多潜能干细胞体外及体内成骨分化的影...

第十二次全国口腔修复学学术会议

作者：董溪溪董昕鄂玲玲郭斌李海燕曹均凯解放军总医院

关键词：

镁黄长石生物活性陶瓷对人诱导性多潜能干细胞行为影响研究

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镁黄长石生物活性陶瓷对人诱导性多潜能干细胞行为影响研究

中华口腔医学会口腔修复学专业委员会第十次全国口腔修复学术大会

作者：董溪溪李海燕周艳玲欧龙曹均凯常江解放军总医院解放军医学院

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells(iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。先前的研究结果已经证实iPSCs可以诱导分化为成骨细胞。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长... 详细信息

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells(iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。先前的研究结果已经证实iPSCs可以诱导分化为成骨细胞。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长过程中支架材料微环境对种子细胞的增殖、分化的影响同样重要。因此在此实验中,我们利用镁黄长石,一种硅酸盐生物活性陶瓷材料,研究其体外诱导刺激iPSCs分化的拟胚体细胞成骨分化,为动物体内实验奠定基础。方法:(1)人iPSCs多能性鉴定,包括碱性磷酸酶染色、细胞核型检测、多能性基因(Oct3/4,Sox2,Nanog,SSEA-4,TRA-1-60,and RA-1-81)免疫荧光染色、畸胎瘤实验、三胚层组织细胞苏木精&曙红染色。(2)体外生长培养基对比不同浓度镁黄长石浸提液(1/32、1/64、1/128、1/256)作用于人iPSCs细胞免疫荧光染色检测细胞多能性基因,另外生长培养基组、成骨诱导因子组、镁黄长石浸提液各浓度组作用于人iPSCs细胞分化来源拟胚体细胞,在第7天细胞碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶活性检测,第14、21天检测成骨相关基因,第21天同时进行茜素红染色。结果:(1)我们看到人iPSCs有ALP表达,核型正常,同时多能性基因的表达阳性,最后畸胎瘤形成以及三个胚层组织细胞苏木精&曙红染色,鉴定结果符合诱导性多潜能干细胞要求。(2)在有成骨诱导因子(维生素C、地塞米松、b-甘油磷酸钠)的条件下,镁黄长石浸提液的成骨诱导作用优于单纯成骨诱导液作用。在一定浓度范围的镁黄长石浸提液刺激下,细胞碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨相关基因检测结果显示骨钙(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、RUNT相关因子2(RUNX2)、骨形态发生蛋白(BMP2)的表达明显高于对照组。而当镁黄长石浸提液中不含成骨诱导因子时,相比于生长培养基组成骨分化在早期没有变化,在分化后期第21天成骨分化增强。结论:在不含成骨诱导因子的条件下镁黄长石生物活性陶瓷对人iPSCs分化来源拟胚体细胞成骨分化有促进作用,其作为支架材料联合人iPSCs在骨组织工程中具有广阔的应用前景。

关键词：硅酸盐生物陶瓷镁黄长石诱导多潜能干细胞成骨分化

镁黄长石生物活性陶瓷对人诱导性多潜能干细胞行为影响研究

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第十一次全国口腔修复学学术会议

作者：董溪溪李海燕周艳玲欧龙曹均凯常江解放军总医院口腔科

目的:诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells(iPSCs))作为种子细胞在组织工程应用中具有非常大的潜能。先前的研究结果已经证实iPSCs可以诱导分化为成骨细胞。在组织工程应用过程中,种子细胞是重要因素,而在新生组织生长...

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