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鱼体内金属硫蛋白与水环境关系的研究

北京大学学报（自然科学版） 2001年第6期37卷 779-784页

作者：林芃任宏伟茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室大连大学医学院

金属硫蛋白 (Metallothionein ,简称MT)能有效地表征水体中重金属对生物的影响 ,故以鱼类MT含量来评价武汉东湖的水环境。对不同组织中MT含量测定可研究不同组织对重金属的积累能力 ;不同鱼种体内MT含量测定以了解鱼种对金属耐受力的影... 详细信息

金属硫蛋白 (Metallothionein ,简称MT)能有效地表征水体中重金属对生物的影响 ,故以鱼类MT含量来评价武汉东湖的水环境。对不同组织中MT含量测定可研究不同组织对重金属的积累能力 ;不同鱼种体内MT含量测定以了解鱼种对金属耐受力的影响 ;而对不同水体中鱼类MT含量的分析 ,则对确定污染源及污染程度有重要意义。

关键词：金属硫蛋白水质污染体内重金属积累生物标志物耐受力鱼类水质监测

山蛭素(haemadin)在毕赤甲醇酵母中的表达及其性质鉴定

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北京大学学报（自然科学版） 2005年第4期41卷 506-513页

作者：赵菁菁茹炳根北京大学生命科学学院

人工合成山蛭素基因后,利用基因重组的方法将山蛭素的基因克隆到pPicZαA载体,经过线性化,电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500μgmL的zeocin筛选得到高拷贝插入的GS115H菌株,经过优化摇瓶表达条件表达量达到100mgL。摇瓶培养... 详细信息

人工合成山蛭素基因后,利用基因重组的方法将山蛭素的基因克隆到pPicZαA载体,经过线性化,电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500μgmL的zeocin筛选得到高拷贝插入的GS115H菌株,经过优化摇瓶表达条件表达量达到100mgL。摇瓶培养物经离心取上清,分别使用3kD和10kD的超滤膜超滤,阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后,得到纯度高于95%的目的蛋白,产出量为40mgL,回收率为40%。通过以chromozymTH为底物的凝血酶酰胺水解实验证实了其体外生物学活性:其抑制凝血酶常数为(2.46±0.13)×10-13molL。

关键词：山蛭素凝血酶抑制剂毕赤酵母表达抗凝剂

富锌培养对转金属硫蛋白侧耳菌丝生长和锌有机化程度的影响

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光谱学与光谱分析 2009年第3期29卷 812-814页

作者：生吉萍申琳茹炳根中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 北京大学生命科学学院北京100857

金属硫蛋白（MT）是一种低分子量、高巯基含量、能结合金属离子的功能性蛋白，将MT基因转入蘑菇，可以获得具有重要生理功能的蘑菇以便为保健食品生产提供原料，但对MT蘑菇的富锌能力缺乏系统研究。文章报道了用电感耦合等离子体一原子... 详细信息

金属硫蛋白（MT）是一种低分子量、高巯基含量、能结合金属离子的功能性蛋白，将MT基因转入蘑菇，可以获得具有重要生理功能的蘑菇以便为保健食品生产提供原料，但对MT蘑菇的富锌能力缺乏系统研究。文章报道了用电感耦合等离子体一原子发射光谱（ICP-AES）法对富锌培养中的MT侧耳（Pleurotus ostreatus）菌丝和未转化的侧耳菌丝（对照）锌含量进行了测定，分析了MT侧耳菌丝的耐锌能力、富锌特性和锌有机化程度。结果发现转MT侧耳在锌浓度0～1．2mmol·L^-1范围内菌丝生长速度最高，超过1．6mmol·L^-1。时菌丝生长开始受到抑制；转MT侧耳有较强的富锌能力，当培养液中锌质量浓度为0．6～1.2mmol·L^-1时，菌丝体中锌含量在2．56-27．49mg·kg^-1之间，与锌添加量呈正相关，且此浓度范围内菌丝体的生长情况良好；在锌浓度为0．6mmol·L^-1的液体培养基中，第7d转MT侧耳菌丝锌有机化程度为88．7％，比对照（82．1％）显著提高（a=0．05），说明转入侧耳的MT有利于无机锌向有机锌转化；对在不同浓度下培养7d的两种菌丝测定发现，其有机化程度差异不显著，说明锌与菌体内的物质已经紧密结合形成有机锌复合物，锌浓度对锌的吸收量有影响但对锌的有机化程度影响不大。

关键词：金属硫蛋白锌蘑菇转基因食品保健食品电感耦合等离子体-原子发射光谱

G-蛋白Rab3a对神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元细胞生长作用的影响

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生物化学与生物物理进展 2005年第11期32卷 1069-1074页

作者：庞立岩茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室

为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GIF)的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用MTT还原法定量研究了Rab3a对GIF神经生长活性的影响,发现Rab3a可以替代脑提取物而使GIF发挥神经生长抑制活性.接着又利用多克隆抗体方法研究... 详细信息

为了深入研究Rab3a和神经生长抑制因子(GIF)的相互作用,在大鼠海马神经元细胞原代培养体系中,用MTT还原法定量研究了Rab3a对GIF神经生长活性的影响,发现Rab3a可以替代脑提取物而使GIF发挥神经生长抑制活性.接着又利用多克隆抗体方法研究了GIF与Rab3a的相互作用,结果说明Rab3a是GIF发挥神经生长抑制活性所必需的蛋白质,并且它们的相互作用受空间位置的因素影响较大.在随后对它们相互作用的机理和可能的生物学意义进行了讨论.

关键词： Rab3a GIF 相互作用大鼠海马神经元细胞培养 MTT还原测定法

人金属硫蛋白-3的α结构域的表达及其性质研究

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北京大学学报（自然科学版） 2001年第4期37卷 470-476页

作者：王寒松俞梅敏茹炳根北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系蛋白质工程国家重点实验室北京100871

参考E .coli偏爱密码子 ,设计并合成人MT 3α结构域 (α MT 3)的DNA片段 ,克隆到表达载体pGEX 4T 1中。经IPTG诱导 ,在E .coli中高效表达出谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) α融合蛋白。凝血酶酶切融合蛋白 (用CdCl2 或ZnSO4辅助 )后 ,得到... 详细信息

参考E .coli偏爱密码子 ,设计并合成人MT 3α结构域 (α MT 3)的DNA片段 ,克隆到表达载体pGEX 4T 1中。经IPTG诱导 ,在E .coli中高效表达出谷胱甘肽 S 转移酶 (GST) α融合蛋白。凝血酶酶切融合蛋白 (用CdCl2 或ZnSO4辅助 )后 ,得到纯化的结合镉或锌的α MT 3蛋白。质谱分子量检测及氨基酸组成分析证明得到了目的蛋白。紫外吸收光谱及圆二色性光谱研究重组α MT 3的结构。MT 3的与其余MT的α结构域不同 ,α MT 3的圆二色性光谱在 2 2 0nm左右为负峰 ,说明α MT 3可能包含一个α 螺旋的二级结构。

关键词：人金属硫蛋白-3 α-MT-3 α结构域基因克隆基因表达 α-螺旋性质

人活化血小板单抗导向血栓免疫偶联物的制备及性质研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期19卷 259-260页

作者：孙艳茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程国家重点实验室

目前血栓部位的检测技术大都存在着检测速度慢，灵敏度低，易造成误诊等不足。如果采用高亲和特异性的血栓单抗与核素标记相结合的导向显像方法进行检测，会使检测迅速、灵敏，使血栓的临床检测方法获得突破。单克隆抗体ＳＺ５１对血栓... 详细信息

目前血栓部位的检测技术大都存在着检测速度慢，灵敏度低，易造成误诊等不足。如果采用高亲和特异性的血栓单抗与核素标记相结合的导向显像方法进行检测，会使检测迅速、灵敏，使血栓的临床检测方法获得突破。单克隆抗体ＳＺ５１对血栓部位活化的血小板α颗粒膜糖蛋白ＧＭ...

关键词：血栓单克隆抗体血小板制备

转金属硫蛋白突变体αα的烟草具有较高的重金属抗性

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Acta Botanica Sinica 2000年第4期42卷 416-420页

作者：张晓钰周慰茹炳根北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京100871

金属硫蛋白 (MT)有α、β两个结构域 ,其中α结构域优先结合Cd2 + 、Hg2 + ,以α结构域代替 β结构域而得到的αα突变体在大肠杆菌构建及表达后 ,体外实验证明其具有同天然MT相似的稳定性 ,但结合重金属的能力稍强于天然MT。将αα突... 详细信息

金属硫蛋白 (MT)有α、β两个结构域 ,其中α结构域优先结合Cd2 + 、Hg2 + ,以α结构域代替 β结构域而得到的αα突变体在大肠杆菌构建及表达后 ,体外实验证明其具有同天然MT相似的稳定性 ,但结合重金属的能力稍强于天然MT。将αα突变体转入植物表达载体 ,以CaMV 35S为启动子 ,利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens(SmithetTownsend)Conn)介导的叶盘法转化烟草 (NicotianatabacumL .***89)。Southern、Western证明了外源基因在烟草内的整合与表达。重金属抗性结果证明 :转αα突变体烟草在含 30 0 μmol/LCdCl2 的培养基中可正常生长 ,转天然MT的烟草在含 2 0 0 μmol/LCdCl2 的培养基中生长 ,而野生型烟草只能在含 75 μmol/LCdCl2 的培养基中生长。Cd2 + 含量及分布实验证明 :转基因烟草同天然烟草相比 ,根部吸收了大部分的Cd2 + ,从而降低了叶部Cd2 + 含量。

关键词：抗性转基因烟草重金属 MT 土壤污染

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大鼠金属硫蛋白晶体堆积形式的理论研究

高等学校化学学报 2002年第2期23卷 271-274页

作者：侯廷军安钰茹炳根徐筱杰北京大学化学与分子工程学院北京大学生命科学学院北京100871

考虑到蛋白质在结晶过程中溶液和晶体之间的动态平衡 ,蛋白质在溶液中的聚合状态决定了晶体堆积的最小单元 .通过动态光散射实验以及计算机模拟 ,对大鼠金属硫蛋白亚型和兔肝金属硫蛋白亚型和的聚合物形式进行了比较 ,可以确定大... 详细信息

考虑到蛋白质在结晶过程中溶液和晶体之间的动态平衡 ,蛋白质在溶液中的聚合状态决定了晶体堆积的最小单元 .通过动态光散射实验以及计算机模拟 ,对大鼠金属硫蛋白亚型和兔肝金属硫蛋白亚型和的聚合物形式进行了比较 ,可以确定大鼠金属硫蛋白亚型在结晶条件下的缓冲液中应该以四聚体而不是二聚体形式存在 .通过考察晶体的模型也可以发现 ,晶体的确可以通过四聚体的形式堆积得到。

关键词：金属硫蛋白晶体二聚体三聚体四聚体 X射线晶体学大鼠堆积形式结构测定

兔肝金属硫蛋白亚型异构体的高效液相色谱分离与ESI-MS,MALDI-TOF-MS鉴定

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高等学校化学学报 2002年第6期23卷 1086-1090页

作者：赵锐纪建国袁洪生管华诗茹炳根蛋白质组学研究室青岛海洋大学海洋药物与食品研究所青岛266003

由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的... 详细信息

由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的亚型异构体 ,并利用 MALDI-TOF MS和 LC-ESI-MS对比确定了它们的分子量 .结果表明 ,兔肝 MT在不同的 p H条件下分离得到不同分子量的亚型异构体 .在酸性条件下 ,MT-1可分为 2个主要亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0和 62 44.5 ,而 MT-2主要分为 3个亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0 ,62 44.0和 61 2 7.0 . MT-1和 MT-2有 2个亚型异构体分子量相同的异构体存在 .在酸性条件下 ,MT-1的 2个异构体及 MT-2分子量为 61 2 7的亚型异构体可稳定存在 .

关键词：高效液相色谱分离鉴定金属硫蛋白亚型异构体电喷雾离子化质谱基质辅助激光解析飞行时间质谱