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基于“生熟异治”质量标志物的生、炒酸枣仁质量控制研究

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基于“生熟异治”质量标志物的生、炒酸枣仁质量控制研究

作者：范兰兰安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的中药“生熟异治”主要指同一种中药材经炮制加工后,生用与熟用时的功效不同。酸枣仁作为常用“生熟异治”类中药,临床应用以生品和炒制品居多,生枣仁性平,入清剂。经炒制后,易于粉碎和煎出,可增强其治疗虚烦不眠、养心敛汗之功,即... 详细信息

目的中药“生熟异治”主要指同一种中药材经炮制加工后,生用与熟用时的功效不同。酸枣仁作为常用“生熟异治”类中药,临床应用以生品和炒制品居多,生枣仁性平,入清剂。经炒制后,易于粉碎和煎出,可增强其治疗虚烦不眠、养心敛汗之功,即达到“生效熟增”的目的。酸枣仁由生变熟的过程中其功效作用和内在质量都发生了不同程度的变化,因此其质量控制标准也产生了一定的变化。最新版《中国药典》中以斯皮诺素和酸枣仁皂苷A为酸枣仁的含量测定的指标,没有从生、炒酸枣仁质量标志物的角度反映酸枣仁“生熟异治”的整体性和专属性质量差异。刘昌孝院士团队,在遵循传统中药理论、组方配伍原则、制剂和临床应用等特性的基础上,提出了产生于中药（包括中药材、饮片、汤剂、提取物、成药制剂等）本身的或加工、制备过程与药性、药效紧密相关的“中药质量标志物”的概念,为生、熟饮片的质量标志物的专属性和整体性质量控制研究开拓了新的研究思路。因此本课题首先采用中心组合设计-响应面法优选酸枣仁炒制工艺,结合指标成分含量测定、指纹图谱、UPLC-Q-TOF/MS、多元统计等方法分析从“量变”和“质变”角度分析比较了酸枣仁炒制前后化学成分变化,最后通过模拟生、炒枣仁与地西泮对GABA受体的的体外饱和竞争实验,并结合分子对接验证筛选酸枣仁炒制前后发挥镇静催眠作用的质量标志物,为建立体现酸枣仁“生熟异治”质量标志物的专属性和整体性的质量标准提供参考。方法1中心组合设计（CCD）-响应面法优选酸枣仁炒制工艺本课题根据中心组合设计响应面法原则,设置影响因素为炒制温度和炒制时间,设定腺苷、木兰花碱、斯皮诺素、6’’’-斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸6种成分的含量和出膏率的综合评分为评价指标,优选酸枣仁最佳炒制工艺。根据优选工艺,分析并比较了市售3个产地15批酸枣仁炮制前后6种指标成分的含量,为后续筛选酸枣仁“生熟异治”质量标志物提供稳定、可行的工艺条件。2酸枣仁炮制前后化学成分研究根据优选出的工艺参数,采用UPLC法建立了市售3个产地15个批次的生、炒酸枣仁指纹图谱,借助化学模式识别中的聚类分析、主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析等方法初步阐明酸枣仁炮制前后化学成分变化。进一步结合超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用分析手段（UPLC-Q-TOF-MS）研究酸枣仁炒制前后化学成分变化,使用Unifil软件和Mass Lynx V4.1软件对酸枣仁炮制前后化学成分进行了多元统计分析,旨在筛选酸枣仁炒制前后具有显著性差异的成分。3体外饱和竞争实验与分子对接筛选酸枣仁炒制前后镇静催眠活性成分根据受体与配体结合原理,构建生、炒酸枣仁提取液与地西泮对大鼠脑组织中GABA（γ-氨基丁酸）受体体外饱和竞争实验模型,比较不同浓度生、炒酸枣仁提取液与高浓度的地西泮对脑中GABA受体的竞争结合率,采用HPLC和HPLC-MS筛选生、炒酸枣仁中能与地西泮竞争置换GABA受体发挥镇静催眠作用的活性成分,结合各活性成分的离子强度,计算其与GABA受体的结合率,利用分子对接对其结合率大小进行验证,从而筛选出酸枣仁炮制前后发挥镇静催眠作用的标志性成分。结果1中心组合设计（CCD）-响应面法优选酸枣仁炒制工艺通过响应面法设计原则对浸膏率,腺苷、木兰花碱、斯皮诺素、6’’’-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸6个成分的含量进行考察,采用综合加权评分法,得出酸枣仁最佳炒制工艺为炒制温度125℃,炒制时间6.5min。3次验证试验的平均综合评分为92.3075,与预测值91.8706的相对误差为0.48%。2酸枣仁前后指纹图谱及差异性成分研究相似度软件评价结果得出生、炒酸枣仁共有指纹峰分别为15个,各批次样品的相似度相近,保留时间稳定,差异较小,但各色谱峰的峰面积存在一定的差异,聚类分析和PCA与OPLS-DA分析结果显示,酸枣仁生品与炒制品明显分为两类,即生酸枣仁聚为一类,炒酸枣仁聚为一类,表明酸枣仁炮制前后具有一定的差异。UPLC-Q-TOF/MS和多元数据统计分析结果显示生、炒酸枣仁在正、负离子检测模式下共鉴定出33个为共有成分,主要包括黄酮类、皂苷类、生物碱类。Progenesis QI软件分析结果显示,酸枣仁炮制前后的差异性成分有16个,其中腺苷、斯皮诺素、6’’’-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸6个成分的含量上升,木兰花碱等10个成分含量降低。这些成分变化可能是酸枣仁炮制后发生“生效熟增”作用的物质基础。3体外饱和竞争实验与分子对接筛选酸枣仁炒制前后镇静催眠活性成分生、炒酸枣仁提取液均能与地西泮竞争结合大鼠脑中的GABA受体,且炒酸枣仁的竞争结合作用较生枣仁强,并且具有一定的量效相关性;HPLC检测结果显示,生、炒酸枣仁组与地西泮组+脑组织组、生、炒枣仁+脑组织组、生、炒枣仁+脑组织组+地西泮组分别在6.26±0.

关键词：生、炒酸枣仁生熟异治质量标志物 UPLC-Q-TOF/MS LC-MS

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会计师事务所签约风险管理研究

会计师事务所签约风险管理研究

作者：范兰兰东北财经大学

学位级别：硕士

自2001年以来，国内外众多财务舞弊案件的发生，使会计师事务所成为易遭诉讼的对象。如何采取有效的手段防范和控制审计风险，最大限度地降低风险给自身带来的损失已成为会计服务机构的当务之急。签约风险作为会计师事务所面临的首要风... 详细信息

自2001年以来，国内外众多财务舞弊案件的发生，使会计师事务所成为易遭诉讼的对象。如何采取有效的手段防范和控制审计风险，最大限度地降低风险给自身带来的损失已成为会计服务机构的当务之急。签约风险作为会计师事务所面临的首要风险，其控制的好坏直接决定着以后各阶段的风险控制质量。因此，会计师事务所要进行风险管理，首先要进行签约风险管理。风险管理理论自引入我国之后得到了较快的发展，但目前理论界对风险管理的研究尚有未涉及到的地方和需要进一步探讨的必要，签约风险管理更是如此。作为风险控制的源头，签约风险管理无时无刻不在昭示着其在理论上的重要性和实践中的必要性，本文就是以此为契机展开论述的。全文共分五个部分：第一部分由科龙德勤案例引出签约风险管理在审计实践中和理论研究上的重要性;第二部分对签约风险的基本理论进行探析，包括签约风险的内涵界定、形成机理、构成要素等内容，该部分首先从风险的概念入手对签约风险的内涵进行界定，并阐述了签约风险与审计风险的关系，之后借助于经济学和合同法理论，对签约风险的形成机理进行剖析，最后论述了签约风险的构成要素;后三部分按照风险管理的实施程序阐述签约风险的识别、评估和应对问题。在风险识别部分，着重陈述了签约风险的识别内容、识别方法及其运用，并对具体案例存在的签约风险进行识别;在风险评估部分，主要讲述了评估方法的种类，及在评估签约风险的主要风险因素时的运用，同时选取适当的方法对科龙自身的风险、注册会计师的风险和法律风险进行定量或定性的分析评价;在风险应对部分，提出了签约风险应对的四种方法，即规避、减轻、转移或共担、自留，并结合案例指出德勤在签约风险控制环节存在的问题及相应的解决办法。本文认为：签约风险产生于审计业务的承接过程，而且签约行为一旦发生还会带来后续的风险，包括业务执行过程中评估出的重大错报风险及业务结束后潜在的诉讼风险。信息不对称理论和不完全契约理论是揭示签约风险形成机理的基本理论，被审计单位的行业特征及自身状况、会计师事务所本身的条件限制和外部审计市场的激烈竞争是签约风险的主要来源。客户风险、注册会计师风险及法律风险构成了签约风险的主要风险因素，通过对每个风险因素的分解和测算，可以初步判断出风险因素风险值的大小或高低。针对重要性不同的风险因素，会计师事务所应该采取不同的风险应对措施。

关键词：签约风险要素风险客户风险注册会计师风险法律风险

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武汉城市圈的地方政府竞争问题研究

武汉城市圈的地方政府竞争问题研究

作者：范兰兰武汉科技大学

学位级别：硕士

在改革开放和经济全球化的宏观大背景下，我国经济取得了快速长效发展。这客观上推动了我国现代化、城市化进程，其中城市群的建设和规划已经成为衡量我国城市化最重要的标志之一。在城市群的大力建设中，地方政府发挥着十分重要的作用... 详细信息

在改革开放和经济全球化的宏观大背景下，我国经济取得了快速长效发展。这客观上推动了我国现代化、城市化进程，其中城市群的建设和规划已经成为衡量我国城市化最重要的标志之一。在城市群的大力建设中，地方政府发挥着十分重要的作用。竞争是无处不在的，也同样渗透到了政府的公共管理活动之中。地方政府成为了各地利益的代言人，竞相促进当地经济的发展。 2007年12月,国务院正式批准成立武汉“1+8”城市圈，并赋予武汉城市圈先行先试的政策创新权。要推动中部经济的高速增长，该区域产业竞争力的发展水平和长期竞争优势是其关键。做到有效避免圈内地方政府的不良竞争，加强地方政府的交流与合作，共同提高城市圈内的竞争力，才能快速推动武汉城市圈的发展。但是，从目前的情形来看，地方政府在发展过程中还面临着一些挑战和困境。这就急切需要根据各地的具体实际情况，来构建一套有效合理的竞争合作机制。因此，本文围绕的主题就是研究城市圈内的地方政府竞争问题。整篇文章主要可以分为六个部分。第一章绪论，分析了进行地方政府竞争的研究背景及意义，国内外理论界对城市圈内地方政府竞争研究的争论点和研究现状。第二章主要介绍有关地方政府竞争的基本理论，同时阐述了当代中国地方政府竞争存在的三种表现形态及特点。第三章着重介绍地方政府竞争产生的积极和消极的影响。第四章则是文章的重点，首先介绍了一些武汉城市圈地方政府竞争的现状，阐明了现阶段取得的初步成效和存在的问题，接着进一步研究是什么原因导致了这样的恶性演进。通过这一分析，说明规范城市圈地方政府有效竞争的必要性。第五章则通过对城市圈中地方政府行为的实证案例分析，来探讨在这一特定的背景下地方政府之间不良竞争问题。第六章在当前存在困境的基础上，对武汉城市圈发展的中长期趋势作了展望，提出了一些具体的解决对策建议。

关键词：武汉城市圈地方政府地方政府竞争对策

PEDV分子流行病学调查及非结构蛋白对病毒复制的影响

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PEDV分子流行病学调查及非结构蛋白对病毒复制的影响

作者：范兰兰华南农业大学

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猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染引起的一种严重的急性、接触性肠道传染性疾病,该疾病主要以感染猪群出现腹泻、呕吐、脱水等严重的肠炎为特征,具有... 详细信息

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）感染引起的一种严重的急性、接触性肠道传染性疾病,该疾病主要以感染猪群出现腹泻、呕吐、脱水等严重的肠炎为特征,具有较高的传染性和死亡率。自1971年PEDV在英国被首次报道以来,PEDV多次爆发,已蔓延至世界许多国家和地区,给世界养猪行业造成了巨大的经济损失。对于PEDV在机体内外的感染机制,国内外的许多学者已经做了大量研究。据相关文献报道,病毒的某些蛋白可以有效地抑制或促进PEDV在体内外的复制和增殖,并且有些病毒非结构蛋白对PEDV复制机制影响与NF-κB信号通路的激活有关。NF-κB是细胞内重要的核转录因子,参与机体的炎症反应、免疫应答等过程。为了了解广东省PEDV遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对2018-2019年采集到的来自广东省74份样品进行PEDV抗原检测,并将部分阳性样品的S1、M和ORF3基因序列进行测序,将测序结果与参考毒株进行进化树构建、同源性分析以及氨基酸序列比对。经RT-PCR法检测共有38份样品为PEDV阳性,阳性率为51.35%,阳性率较高。在PEDV S1遗传进化分析中,检测毒株均位于G2分支,与VN-VAP1113核苷酸同源性较高,为96.0%～97.6%,主要有3个氨基酸缺失和5个氨基酸插入,以及多个氨基酸突变。在PEDV M遗传进化分析中,GDxh株位于G1分支,与DR13核苷酸同源性较高,为98.3%,GDhz毒株位于G2-1分支,与VN-VAP1113的核苷酸同源性较高,为98.3%,其他12个检测毒株位于G2-2分支,与OH851核苷酸同源性较高,为97.4%～99.1%,主要有5个氨基酸突变。在PEDV ORF3遗传进化分析中,GDxh株与DR13核苷酸同源性为91.6%,主要有4个氨基酸突变和一段氨基酸缺失,其他检测毒株均位于G2分支,与OH851、VN-VAP1113核苷酸同源性较高,分别为82.7%～92.0%、83.1%～87.6%,其中8株主要有5个氨基酸突变,另外5株主要有11个氨基酸突变。本研究通过qPCR、TCID50检测以及Western blot的方法对PEDV非结构蛋白nsp6、nsp7、nsp8、nsp9和nsp10进行了初步研究,研究发现Vero E6细胞感染PEDV后12 h、24 h和36 h,这几个PEDV非结构蛋白能够促进PEDV在细胞内复制和增殖。双荧光素酶报告基因检测试验发现PEDV nsp9在293T细胞中明显抑制NF-κB信号通路。进一步研究发现PEDV nsp9可以明显抑制细胞内CCL2、IFNα、IFNβ以及TNFα的表达,并且逐渐降低细胞因子IL8的表达量,PEDV nsp9可以抑制P65和IKBα的磷酸化。本研究发现广东省PEDV流行毒株主要是G1和G2型毒株,S1和ORF3基因片段存在多个氨基酸突变位点,比较不稳定,M基因较为保守。研究发现PEDV非结构蛋白nsp6、nsp7、nsp8、nsp9和nsp10具有促进PEDV复制的功能。PEDV nsp9可能通过抑制P65、IKBα磷酸化及IKBα降解来抑制NF-κB信号通路的激活,抑制细胞因子IL8、CCL2、IFNα、IFNβ以及TNFα的表达,从而促进PEDV在细胞内的复制过程。这些结果为广东省PEDV疫情防控以及进一步阐明PEDV在细胞内复制的机制提供了理论基础。

关键词： PEDV 遗传进化分析非结构蛋白 NF-κB信号通路细胞因子

锂硫电池正极用多孔碳纤维制备及电化学性能的研究

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锂硫电池正极用多孔碳纤维制备及电化学性能的研究

作者：范兰兰天津工业大学

学位级别：硕士

社会经济的快速发展驱动了更多便携式的电子设备的发展,这些设备对于电池高能量的需求日益增加。以单质硫作为正极材料的锂硫电池体系具有较高的理论比容量(1675mAh/g)及比能量(2567Wh/kg),且具有成本低、环境友好等优点,被公认为时下... 详细信息

社会经济的快速发展驱动了更多便携式的电子设备的发展,这些设备对于电池高能量的需求日益增加。以单质硫作为正极材料的锂硫电池体系具有较高的理论比容量(1675mAh/g)及比能量(2567Wh/kg),且具有成本低、环境友好等优点,被公认为时下一代最具发展潜力的高比能量二次电池体系。然而,硫以及最终产物的绝缘性,中间产物多硫化物的穿梭效应,以及硫在氧化还原反应中的体积变化(80%)等成为锂硫电池发展道路上的障碍,多孔碳纤维由于其丰富的孔结构以及能形成导电性良好的网络状结构,可作为硫单质的载体用作锂硫电池的正极材料。本文以DMF(N,N-二甲基甲酰胺)为溶剂,PAN(聚丙烯腈)作为PCFs(多孔碳纤维)的前驱体,PS(聚苯乙烯)添加剂作为致孔剂,通过静电溶吹技术成功制备出PAN/PS复合纳米纤维,在经后续预氧化、碳化处理过程中PS分解造孔得到多级孔结构的多孔碳纳米纤维,并作为硫的载体制备得碳硫复合正极材料应用于锂硫电池中。通过SEM(扫描电镜)、TEM(透射电镜)、FTIR(红外技术)、BET(比表面积测试仪)、TGA(热重分析)等分析纺丝液不同PAN:PS比例对纤维形貌结构的影响,再利用循环充放电测试及交流阻抗测试分析孔结构以及电导率对不同PAN:PS比例下的电池电化学性能的影响。研究结果表明:以PS为添加剂,与PAN混合于DMF溶剂中,分别制备出不同的纺丝液,由于微相分离的原因,溶液中PS和PAN独立存在的,通过静电溶吹技术得到PAN/PS纳米纤维,经高温处理过程中PS成分分解,进而得到多孔碳纤维;随着PAN/PS的比例从5:0增加到5:5,纤维的平均直径逐渐增加,即从0.605 μm增加到1.716 μm。当继续增加PAN/PS的比例至3:5时,纤维的直径又逐渐减小,即从1.716μm减小到1.045 μm。碳化后的多孔碳纤维的比表面积呈现先减小后增大的趋势,即当PAN/PS的比例为5:1时,多孔碳纤维的比表面积最大为56.686 m2/g。另外,多孔碳纤维具有优异的导电性,电导率均在1.56×105S/m以上。电化学测试的结果表明,以多孔碳纤维/硫复合材料为锂硫电池的正极材料时,具有较高的放电比容量和优异的循环稳定性,当PAN/PS的比例为5:1时所制得的正极片具有最高初始比容量为1135.8 mAh g-1(纯PAN碳纤维/硫正极材料的初始比容量仅为483.5 mAh g-1),循环300圈后,正极材料的每圈的循环损失率仅有0.03%,因此该材料将在锂硫电池领域具有潜在的应用前景。

关键词：锂硫电池静电溶吹 PAN PS 多孔碳纤维

大气颗粒物对A549和HUVECs细胞的毒性作用

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环境科学研究 2012年第10期25卷 1166-1172页

作者：范兰兰尚羽张玲上海大学环境与化学工程学院环境污染与健康研究所上海200444

比较了A549和HUVECs 2种细胞对颗粒物的敏感度,以探讨大气颗粒物粒径对生物活性的影响.采集北京市区PM10～2.5、PM2.5～0.1和PM0.1,将A549和HUVECs细胞暴露于不同浓度的颗粒物悬浮液24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,并用LDH试剂... 详细信息

比较了A549和HUVECs 2种细胞对颗粒物的敏感度,以探讨大气颗粒物粒径对生物活性的影响.采集北京市区PM10～2.5、PM2.5～0.1和PM0.1,将A549和HUVECs细胞暴露于不同浓度的颗粒物悬浮液24 h后,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,并用LDH试剂盒测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)的含量.结果表明:随着染毒剂量的增大,细胞存活率逐渐降低,并且呈剂量-反应关系;培养液中LDH浓度呈剂量依赖型增加;当染毒剂量>200μg/mL时,PM0.1的细胞致死率大于PM10～2.5和PM2.5～0.1(P<0.01);同一粒径的颗粒物对HUVECs的毒性比A549略大,但无统计意义.因此,相对于粗颗粒物,细、超细颗粒物具有较大的细胞毒性,A549和HUVECs细胞对颗粒物的敏感度差异不显著.

关键词：大气颗粒物人脐静脉内皮细胞(HUVECs) 人肺上皮细胞(A549) 细胞毒性

莲子草假隔链格孢毒素对空心莲子草根尖组织防御酶活性的影响

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华南农业大学学报 2010年第3期31卷 28-31页

作者：范兰兰姜子德向梅梅华南农业大学资源与环境学院广东广州510642 仲恺农业工程学院农业与园林学院广东广州510225

研究了莲子草假隔链格孢Nimbya alternantherae毒素2-乙酰基-3,4-二羟基-5-甲氧苯基-乙酸(Vulculic acid)对空心莲子草Alternanthera philoxeroides根尖组织防御酶活性的影响.结果表明:Vulculic acid能够引起空心莲子草根尖组织防御酶... 详细信息

研究了莲子草假隔链格孢Nimbya alternantherae毒素2-乙酰基-3,4-二羟基-5-甲氧苯基-乙酸(Vulculic acid)对空心莲子草Alternanthera philoxeroides根尖组织防御酶活性的影响.结果表明:Vulculic acid能够引起空心莲子草根尖组织防御酶活性发生变化,在处理初期,细胞内过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)的活性均低于对照,而苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性高于对照.

关键词：空心莲子草莲子草假隔链格孢致病毒素防御酶

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从城市房屋拆迁问题研究地方政府的政策行为

科技创业月刊 2013年第2期26卷 82-85页

作者：范兰兰武汉科技大学湖北武汉430068

随着城市化进程的加快,房屋拆迁已经成为了普遍关注的热点问题。大量的房屋拆迁改善了居民的居住条件和环境,保证了城市建设的顺利进行。但与此同时,城市房屋拆迁工作中也存在着一些问题亟待解决。本文简要地介绍了城市房屋拆迁中存在... 详细信息

随着城市化进程的加快,房屋拆迁已经成为了普遍关注的热点问题。大量的房屋拆迁改善了居民的居住条件和环境,保证了城市建设的顺利进行。但与此同时,城市房屋拆迁工作中也存在着一些问题亟待解决。本文简要地介绍了城市房屋拆迁中存在的问题,阐述了这些问题产生的原因,最后尝试性地给出了具体的对策建议。

关键词：城市房屋拆迁问题政府角色政府公共政策

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静脉输液并发症预防及处理

中国民康医学 2013年第5期25卷 122-123页

作者：范兰兰河北省保定市蠡县医院河北保定071400

静脉输液是临床治疗中最基本的给药方法，也是护理工作重要的内容之一。近年来，静脉输液以给药迅速、刺激小、疗效快等优势，在患者的治疗中发挥着越来越积极的作用，据统计，90％～95％的住院患者需要静脉输液治疗。然而，静脉输液过... 详细信息

静脉输液是临床治疗中最基本的给药方法，也是护理工作重要的内容之一。近年来，静脉输液以给药迅速、刺激小、疗效快等优势，在患者的治疗中发挥着越来越积极的作用，据统计，90％～95％的住院患者需要静脉输液治疗。然而，静脉输液过程中各种常见的并发症往往并不为广大患者所熟知，一旦出现静脉输液并发症，一方面增加了患者的痛苦，另一方面，也往往会引发护患之间的纠纷。因此，了解和熟悉静脉输液过程中可能会出现的并发症，在静脉输液的各环节中采取积极的预防措施，并学会正确处置各类并发症，对于提高静脉输液治疗的护理质量、创造和谐的护患关系具有十分重要的现实意义。

关键词：静脉输液并发症预防处理