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基因差异表达的研究技术及其在寄生虫学研究中的应用

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中国人兽共患病杂志 2003年第4期19卷 98-101,105页

作者：苑纯秀蔡幼民冯新港中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232

高等生物约有10万个不同的基因，其中只有约15％达。基因表达的选择性左右种种生命过程-发育和分化、对刺激的反应、细胞循环的调节、衰老以及细胞程序性死亡。正常的发育以及由疾病引起的病理改变都是基因表达变化的结果，基因表达的... 详细信息

高等生物约有10万个不同的基因，其中只有约15％达。基因表达的选择性左右种种生命过程-发育和分化、对刺激的反应、细胞循环的调节、衰老以及细胞程序性死亡。正常的发育以及由疾病引起的病理改变都是基因表达变化的结果，基因表达的变化可谓是细胞生命活动调控机制的核心。因此，比较细胞在不同生理、病理或不同生长发育阶段的基因表达差异，可以发现与细胞生长分化或致病性相关的基因，为解析生命活动过程，探索疾病发生的分子机理，寻找合适的药物靶标分子，开发有效的疫苗提供极其重要的信息。基因的差异表达有两种方式：a表达基因的种类改变（新出现或消失）；b同一类基因表达量的改变（上调或下调）。传统的基因分析方法主要是单个基因的克隆表达。但生命现象并不是单基因功能的简单堆积，而是高度有组织的多基因的网络效应。因此，研究细胞全基因组在生理和各种病理条件下基因网络的动态变化十分必要。近十几年来，国内外学者摸索出几种在基因组水平上分析基因差异表达的新方法，其中主要有mRNA差异显示PCR法图（differential display of mRNA by meas of the polymerase chaDD-PCR），cDNA代表性差异分析技术（representatiodifference analysis of cDNA-RDA），抑制性消减杂交技术（suppression subtration hybtidization,的系列分析（serialysis of gene expresNA微阵列技术（cDNA microarray).这些已广泛应用于生命科学的许多领域，本文现就以上几种技术的基本原理，过程,主要优缺点及其在寄生虫学研究中的应用做一简要综述.

关键词：基因表达研究技术寄生虫学研究细胞循环细胞程序性死亡

血吸虫新抗原基因SjMF4的克隆、表达及功能分析

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第12期35卷 1099-1104页

作者：张亮程国锋付志强金亚美冯新港苑纯秀蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所、农业部动物寄生虫学重点实验室上海200232 上海200232 林矫矫

根据东方田鼠天然抗日本血吸虫病的现象 ,首次利用东方田鼠健康血清结合羊抗小鼠IgG3抗体免疫筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA表达型文库 ,获得两个阳性克隆 ,采用RACE技术对其中一cDNA片段进行扩增 ,获一含ORF的基因片段。序列... 详细信息

根据东方田鼠天然抗日本血吸虫病的现象 ,首次利用东方田鼠健康血清结合羊抗小鼠IgG3抗体免疫筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫cDNA表达型文库 ,获得两个阳性克隆 ,采用RACE技术对其中一cDNA片段进行扩增 ,获一含ORF的基因片段。序列分析表明该基因为一日本血吸虫新基因 ,命名为SjMF4 (SchistosomajaponicumMicrotusfortis 4 ,SjMF4 )。利用ExPASy的ScanProsite软件对此基因编码的蛋白质结构和功能域进行了分析。把该基因克隆到原核表达载体pET 2 8a(+) ,Western印迹显示表达产物具有良好的抗原性。又构建了真核表达质粒pcD NA3 SjMF4重组DNA疫苗 ,小鼠实验表明可诱导一定的保护作用。

关键词：东方田鼠日本血吸虫 SjMF4 保护作用

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分枝杆菌与人类的克隆氏病

中国人兽共患病杂志 1997年第1期13卷 48-49,80页

作者：刘思国苑纯秀何昭阳兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 东北农业大学吉林农业大学动物微生物学教研室

新城疫病毒F48E9株F基因主要功能区的核苷酸序列分析

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中国预防兽医学报 1999年第1期21卷 31-34页

作者：苑纯秀曹殿军郭鑫闵平卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室

本试验首先以ＮＤＶＦ４８Ｅ９株的基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ第一链，再通过ＰＣＲ技术扩增Ｆ基因的ｃＤＮＡ，然后将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等方法证明，我们已经获得了ＮＤＶ... 详细信息

本试验首先以ＮＤＶＦ４８Ｅ９株的基因组ＲＮＡ为模板，逆转录合成Ｆ基因ｃＤＮＡ第一链，再通过ＰＣＲ技术扩增Ｆ基因的ｃＤＮＡ，然后将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等方法证明，我们已经获得了ＮＤＶＦ４８Ｅ９株Ｆ基因的阳性克隆。经初步序列分析，ＦＡ段核苷酸序列与参考株（Ｄ２６／７６）序列同源性为８９％，ＦＢ段同源性为９１％。二者的氨基酸序列表明，Ｆ４８Ｅ９株Ｆ蛋白裂解位点与其它强毒株裂解位点氨基酸组成相同，即１１２ＲＲＱＲＲ１１６Ｆ１１７。这两段序列中包含的三个Ｃｙｓ残基和三个潜在的糖基化位点都相当保守。

关键词：新城疫病毒 F基因克隆序列分析

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血吸虫受发育调节的相关蛋白及其功能的研究

国外医学（寄生虫病分册） 2003年第3期30卷 102-108页

作者：苑纯秀蔡幼民林矫矫中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海动物生物技术研究中心

血吸虫生活史各阶段可作为血吸虫疫苗和药物介入的靶阶段。对血吸虫不同发育阶段蛋白分子和基因表达的动态变化的了解 ,有助于探索其生长发育的机制 ,为研制有效的阻断传播的疫苗和新的药物提供科学指导。

关键词：血吸虫发育调节阶段性表膜蛋白热休克蛋白70 钙结合蛋白 14-3-3蛋白肌肉结构蛋白弹性蛋白酶抗氧化酶半胱氨酸蛋白酶

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新城疫病毒F48E9株HN基因核苷酸序列

中国预防兽医学报 1999年第5期21卷 341-345页

作者：曹殿军李波 郭鑫苑纯秀 闵平卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

本研究采用Ｓａｎｇｅｒ＇ｓ双脱氧末端终止法测定了新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９血凝素神经氨酸酶基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列，推导出其氨基酸序列。Ｆ４８Ｅ９ＨＮ基因编码区全长为１７１３ｂｐ，单一的开... 详细信息

本研究采用Ｓａｎｇｅｒ＇ｓ双脱氧末端终止法测定了新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９血凝素神经氨酸酶基因ｃＤＮＡ的核苷酸序列，推导出其氨基酸序列。Ｆ４８Ｅ９ＨＮ基因编码区全长为１７１３ｂｐ，单一的开放阅读框编码５７１个氨基酸的糖蛋白。含有６个潜在的与天门冬酰胺（Ｎ）连接的复合寡聚糖和高甘露糖寡聚糖结合位点，其中有５个簇集在蛋白分子的Ｃ末端一半内，有１３个半胱氨酸残基。发现６个Ｆ４８Ｅ９特有的氨基酸残基，３７位Ｆ（Ｌ）、３８位Ｓ（Ａ）、６０位Ｌ（Ｐ）、１０５位Ｓ（Ｎ）、４４３位Ａ（Ｔ）、５７１位Ｉ（Ｖ），这些位点除了６０位的Ｐ有两株为Ｓ以外，其它的在１３株已知序列中均为高度保守序列。

关键词：新城疫病毒 HN基因核苷酸序列

新城疫病毒F48E9株融合蛋白基因核苷酸序列分析

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中国预防兽医学报 1999年第2期21卷 103-106页

作者：曹殿军苑纯秀郭鑫闵平孔宪刚卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室上海寄生虫研究所

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列... 详细信息

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出新城疫病毒国内标准强毒株Ｆ４８Ｅ９的融合蛋白基因的ｃＤ－ＮＡ。经双粘端定向克隆到ｐＵＣ１９的多克隆位点中，采用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧末端终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。Ｆ基因全长为１６６２个ｂｐ，单一的开放阅读框编码５５３个氨基酸的多肽。Ｆ蛋白的疏水构型有三个强疏水区；其裂解位点的氨基酸序列为１１２Ｒ－Ｒ－Ｑ－Ｒ－１１６Ｒ－１１７Ｆ；Ｆ蛋白上共有１２个Ｃｙｓ残基位点和五个潜在糖基化位点。

关键词：新城疫病毒融合蛋白基因核苷酸序列

鸡新城疫病毒东北地区分离株融合蛋白基因的克隆与鉴定

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中国预防兽医学报 1999年第4期21卷 287-288页

作者：苑纯秀曹殿军郭鑫闵平孔宪刚卢景良中国农科院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001

以ＮＤＶ东北地区分离株ＤＢ３、ＤＢ５的基因组ＲＮＡ为模板，通过ＲＴ ＰＣＲ技术扩增其Ｆ基因的ｃＤＮＡ，并将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，转化感受态大肠杆菌ＤＨ５α，经分子量比较、酶切分析、... 详细信息

以ＮＤＶ东北地区分离株ＤＢ３、ＤＢ５的基因组ＲＮＡ为模板，通过ＲＴ ＰＣＲ技术扩增其Ｆ基因的ｃＤＮＡ，并将其克隆到质粒ｐＵＣ１９中，转化感受态大肠杆菌ＤＨ５α，经分子量比较、酶切分析、ＰＣＲ等鉴定方法证明，我们分别获得了含有ＮＤＶＤＢ３、ＤＢ５株Ｆ基因的阳性重组质粒。

关键词：新城疫病毒 F基因克隆鉴定

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日本血吸虫成虫蛋白质的性别差异性研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第2期19卷 107-109页

作者：朱建国林矫矫万海保苑纯秀李铭赵辅昆周元聪吴祥甫蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 中国科学院上海生物化学研究所上海200031

目的　研究日本血吸虫成虫蛋白质表达的性别差异性。方法　利用双向电泳技术对日本血吸虫中国大陆株雌雄虫体蛋白质进行电泳分析。结果　在 43kDa ,pI 5 .6 0～ 5 90处 ,雄虫有一条长度和宽度均超过雌虫并由多个斑点连在一起组成的条... 详细信息

目的　研究日本血吸虫成虫蛋白质表达的性别差异性。方法　利用双向电泳技术对日本血吸虫中国大陆株雌雄虫体蛋白质进行电泳分析。结果　在 43kDa ,pI 5 .6 0～ 5 90处 ,雄虫有一条长度和宽度均超过雌虫并由多个斑点连在一起组成的条带 ,并有 3个较雌虫大的斑点 ;雌虫有 7个特异性斑点 ,且有一处较雄虫深的着色区。结论　血吸虫成虫蛋白质表达有性别差异性。

关键词：日本血吸虫双向电泳蛋白质组学性别差异性