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海湾扇贝和栉孔扇贝EST分析及C型凝集素基因的克隆与分析

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海湾扇贝和栉孔扇贝EST分析及C型凝集素基因的克隆与分析

作者：胥炜中国科学院研究生院（海洋研究所）

学位级别：硕士

扇贝养殖业是我国海水养殖的支柱性产业，海湾扇贝和栉孔扇贝是扇贝养殖业中的两个重要的养殖品种。近年来，养殖扇贝病害不断爆发流行，造成大规模死亡，经济损失十分惨重。引起扇贝大规模死亡的原因是多方面的，其根本原因则是养 ... 详细信息

扇贝养殖业是我国海水养殖的支柱性产业，海湾扇贝和栉孔扇贝是扇贝养殖业中的两个重要的养殖品种。近年来，养殖扇贝病害不断爆发流行，造成大规模死亡，经济损失十分惨重。引起扇贝大规模死亡的原因是多方面的，其根本原因则是养殖环境的恶化和扇贝种质的衰退，抗病力下降。所以，在积极调整产业结构、加强环境治理、开展栉孔扇贝病原及流行病学研究的同时，改良种质增强扇贝的抗病抗逆能力则是解决困扰扇贝养殖业健康可持续发展的根本保证。扇贝中抗病基因的克隆和表达无疑是研究养殖动物免疫防御机制，提高机体抗病力，实现遗传改良的基础和关键。表达序列标签（Expressed Sequence Tag，EST）技术是近年兴起的一种高通量基因筛选和鉴别的有效方法。本研究利用 EST 技术对栉孔扇贝和海湾扇贝表达序列进行大规模测序分析，旨在从 EST 数据中寻找与免疫防御相关的基因，同时也为今后扇贝生物功能基因的筛选与克隆奠定良好基础。从正常海湾扇贝和感染鳗弧菌的栉孔扇贝中分离提取 mRNA，经反转录得到 cDNA，然后克隆到相应载体中，构建λ噬菌体 cDNA 文库，克隆片段平均长度约为 1.2kb。从海湾扇贝和栉孔扇贝两个文库中分别挑选出 7680 个阳性克隆从 5’ 末端进行测序，分别得到有效数据 4991 和 5123 个。海湾扇贝和栉孔扇贝 cDNA 文库测序反应平均读长分别为 462.01bp 和 392.52bp，有效平均读长分别为 347.62bp 和 360.06bp。所有测得的数据经 Phrap 聚类拼接后在海湾扇贝数据库中得到 637个 contigs和 2138 个 singletons，在栉孔扇贝数据库中得到 contigs 584 条，singlets 2762 条。将拼接后的结果进行 BLAST 比对，结果显示海湾扇贝中 259 条 contig 数据和 585 条 singleton 数据与 GeneBank 中已知序列具有较高同源性（E-value 胥炜海湾扇贝和栉孔扇贝EST分析及C型凝集素基因的克隆与分析硕士学位论文所有 EST 序列中，未发现同源序列的 EST 数量最多，均占到了各自总 EST 数目的 56%。与细胞分裂相关基因同源的序列各占 1%，与细胞信号与传导相关基因同源的序列分别为 2%和 3%，与细胞结构与运动相关基因同源的 EST 分别占 9%和 8%，与细胞与基因和蛋白表达相关基因同源的数据分别占 12%和 5%，与新陈代谢相关基因同源的序列占到各自总数的 7%和 8%，与未知功能的已知序列同源的 EST 的比例分别为 7%和 6%。6%的海湾扇贝 EST 与 13%的栉孔扇贝 EST 序列与免疫防御相关的基因具有同源性，这些基因中包括防御素（defensin），溶菌酶（lysozyme）, 凝集素（lectins），热休克蛋白（heat shock protein），过氧化物酶（peroxidase），丝氨酸蛋白酶（serine proteinase），金属蛋白酶（metalloprotease）等。该结果为进一步从扇贝中筛选和克隆参与抗病防御的功能基因提供了可能。使用 RepeatMasker 软件在海湾扇贝的 ESTs 中发现了 76 个微卫星序列，占海湾扇贝全部 EST 数目的 1.43%。选取其中的 21 条序列，根据微卫星位点的旁侧序列设计引物，并对设计出的引物进行多态性检测，发现 21 对引物均能产生扩增产物，其中有 14 对引物可望在以后的群体分析及连锁图谱的构建中加以应用。该结果初步证实了在海湾扇贝的 ESTs 序列中存在微卫星位点，从而为扇贝中微卫星标记的筛选开辟了新的途径。在对栉孔扇贝 EST 分析的基础上，利用 RACE 和锚定 PCR 技术克隆得到了 1 个栉孔扇贝C型凝集素基因的全长cDNA序列。该序列全长1038bp，编码区684bp，可以编码 228 个氨基酸。在该编码的氨基酸序列中发现了 C 型凝集素家族的特征模体和一个 C 型凝集素的结构域（C-type lectin domain, CTLD）。通过 Clustalw 和 SMART 分析在该序列中发现了形成二硫键的 4 个保守的半胱氨酸,与其他物种 C 型凝集素的二硫键结构非常相似。用半定量 RT-PCR 技术对此基

关键词：海湾扇贝栉孔扇贝 EST 微卫星 C 型凝集素 RT-RCR

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抗战时期《新华日报》办报思想的确立与实践

传媒 2022年第8期 81-83页

作者：胥炜重庆工商大学马克思主义学院

抗战时期《新华日报》作为党中央重要的宣传舆论阵地,是抗日战争时期中国无产阶级新闻事业的主要组成部分,回顾其创刊经历及办报思想是党媒史研究至关重要的环节。本文通过史料回顾,发现抗战时期《新华日报》的办报实践始终坚持党的领... 详细信息

抗战时期《新华日报》作为党中央重要的宣传舆论阵地,是抗日战争时期中国无产阶级新闻事业的主要组成部分,回顾其创刊经历及办报思想是党媒史研究至关重要的环节。本文通过史料回顾,发现抗战时期《新华日报》的办报实践始终坚持党的领导、始终坚持为人民为服务、坚持实事求是的优良传统,这些办报思路为今天党报的发展提供了借鉴。

关键词：抗战时期《新华日报》党报思想实事求是

海湾扇贝g型溶菌酶基因cDNA的克隆与分析

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高技术通讯 2005年第7期15卷 101-106页

作者：邹慧斌宋林生胥炜杨官品中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室青岛26607中国海洋大学海洋生命学院青岛266003 中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室青岛266071 中国海洋大学海洋生命学院青岛266003

通过EST和锚定PCR技术,从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到一种溶菌酶基因的全长cDNA(全长659bp,编码200个氨基酸).BLASTx分析的结果显示,它和脊椎动物g型溶菌酶相似性较高,却不同于无脊椎动物中已发现的c型和i型溶菌酶.在其... 详细信息

通过EST和锚定PCR技术,从海湾扇贝(Argopecten irradians)中克隆得到一种溶菌酶基因的全长cDNA(全长659bp,编码200个氨基酸).BLASTx分析的结果显示,它和脊椎动物g型溶菌酶相似性较高,却不同于无脊椎动物中已发现的c型和i型溶菌酶.在其编码的氨基酸序列中发现了g型溶菌酶的活性中心(Glu 82, Asp 97, Asp 108),同时6个保守的半胱氨酸也与鸟类和鱼类的g型溶菌酶相一致.结合BLASTX分析的结果,可以确认所获得的cDNA序列是一种在无脊椎动物中首次发现的g型溶菌酶的编码序列.采用Clustalw 软件,对多种脊椎动物c型、g型溶菌酶和无脊椎动物c型、i型溶菌酶以及本研究发现的无脊椎动物g型溶菌酶进行了分析,结果发现,无脊椎动物c型、i型溶菌酶和脊椎动物c型溶菌酶同源性较高,而海湾扇贝g型溶菌酶和脊椎动物g型溶菌酶同源性较高.由此说明c型、g型溶菌酶从无脊椎到脊椎动物的进化是平行发生的,这对进一步研究溶菌酶及其分子进化具有重要意义.

关键词：海湾扇贝基因cDNA g型克隆无脊椎动物全长cDNA cDNA序列 PCR技术溶菌酶基因氨基酸序列活性中心半胱氨酸编码序列首次发现分子进化同源性 c型 EST 相似性 i型鱼类鸟类

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我国探究教学研究的现状与走向

中国教育学刊 2014年第12期 55-58,62页

作者：胥炜徐学福西南大学教育学部博士研究生重庆400715 西南大学教育学部基础教育研究中心

在中国知网上检索2000年到2013年探究教学相关的核心文献并对其进行梳理发现:新课程改革实施以来,探究教学的研究已经取得了一定的成绩。在研究主题方面主要围绕什么是探究教学、为什么要开展探究教学、怎样开展探究教学展开,研究主体... 详细信息

在中国知网上检索2000年到2013年探究教学相关的核心文献并对其进行梳理发现:新课程改革实施以来,探究教学的研究已经取得了一定的成绩。在研究主题方面主要围绕什么是探究教学、为什么要开展探究教学、怎样开展探究教学展开,研究主体以高校的教授和研究生为主,研究方法上以思辨研究为主。未来探究教学的研究要进一步探寻从其他视角审视探究教学,在彰显学科特色的同时,构建探究共同体对探究教学开展针对性的研究,探索量化研究和质化研究交叉融合的切合点。

关键词：新课程改革探究教学探究共同体

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栉孔扇贝EST中微卫星标记的筛选

高技术通讯 2003年第12期13卷 72-75页

作者：李红蕾宋林生王玲玲胥炜相建海中国科学院海洋研究所青岛266071

使用RepeatMasker软件在栉孔扇贝的 6 935条ESTs中发现了 4 2条微卫星序列。选取其中的 7个序列 ,根据微卫星位点的旁侧序列设计引物 ,并对设计出的引物在中国、日本、韩国野生群体中进行多态性检测 ,发现有 6对引物能产生扩增产物 ,其... 详细信息

使用RepeatMasker软件在栉孔扇贝的 6 935条ESTs中发现了 4 2条微卫星序列。选取其中的 7个序列 ,根据微卫星位点的旁侧序列设计引物 ,并对设计出的引物在中国、日本、韩国野生群体中进行多态性检测 ,发现有 6对引物能产生扩增产物 ,其中有 3对引物可望在以后的群体分析及连锁图谱的构建中加以应用。该结果初步证实了在栉孔扇贝的ESTs序列中存在微卫星位点 ,从而为扇贝生物中微卫星标记的筛选开辟了新的途径。

关键词：栉孔扇贝微卫星标记生物多样性环境保护遗传多样性

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基于数字教材的探究教学之可能与路径

教学与管理（理论版） 2016年第9期 83-85页

作者：胥炜徐学福西南大学教育学部重庆400715

数字教材是教育信息化发展的必然产物,数字教材的研发利于探究教学的开展,探究教学可以弥合数字教材的固有缺陷,如此使得数字教材与探究教学整合成为可能。基于此,扫描基于数字教材的探究教学,其具有自主性、协同性和创新性三大特征。... 详细信息

数字教材是教育信息化发展的必然产物,数字教材的研发利于探究教学的开展,探究教学可以弥合数字教材的固有缺陷,如此使得数字教材与探究教学整合成为可能。基于此,扫描基于数字教材的探究教学,其具有自主性、协同性和创新性三大特征。运用数字教材的探究教学之道在于情境性的问题生成、分组式的学习开展、问题解决式的资料收集、层次化的交流探讨和基于反思的评价五环相扣,整体推进。

关键词：数字教材探究教学整合可能路径

美国版科学教材对我国小学科学教师的挑战及对策

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辽宁教育研究 2008年第8期 48-50页

作者：胥炜徐学福西南大学重庆400715

美国版科学教材是美国国家科学资源中心为一至六年级儿童开发的全新的参与性教材,它在我国的试用给科学教育带来了生气,同时也给小学科学教师带来挑战。为应对挑战,小学科学教师应当认真解读美国版教材,开展创造性教学;加强研究与反思,... 详细信息

美国版科学教材是美国国家科学资源中心为一至六年级儿童开发的全新的参与性教材,它在我国的试用给科学教育带来了生气,同时也给小学科学教师带来挑战。为应对挑战,小学科学教师应当认真解读美国版教材,开展创造性教学;加强研究与反思,弥补培训不足;开发课程资源,丰富教学生活。

关键词：美国科学教材挑战对策

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全纳教育理念下的探究教学

中国特殊教育 2018年第1期 15-19页

作者：吴佳莉胥炜但菲沈阳师范大学沈阳110034 重庆市教育评估院重庆400020

全纳教育思想适用于特殊教育领域,也适用于普通教育领域。全纳教育的平等观、民主观等先进理念对探究教学有着诸多启示作用,能够为探究教学的开展提供独特的视角。全纳教育理念的实施可以有效弥补探究教学本身所存在的一些弊端,如:探究... 详细信息

全纳教育思想适用于特殊教育领域,也适用于普通教育领域。全纳教育的平等观、民主观等先进理念对探究教学有着诸多启示作用,能够为探究教学的开展提供独特的视角。全纳教育理念的实施可以有效弥补探究教学本身所存在的一些弊端,如:探究问题选择偏狭化、探究方式窄化、探究组织方式不能兼顾全体成员等。同时,探究教学又为全纳教育理念的落实提供了较好的土壤。在全纳教育理念下开展探究教学,能够营造民主和谐的课堂氛围,利于儿童天赋素质的发展;促进有效参与和合作,利于学生动手动脑;关注每一名儿童的成长,利于潜能开发;实施多元化的教学评价方式,利于儿童的全面发展。

关键词：全纳教育探究教学民主平等

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教育叙事研究与教师的专业发展

内蒙古师范大学学报（教育科学版） 2008年第1期21卷 152-153页

作者：胥炜西南大学教育学院重庆400715

教育叙事研究是一种质的研究。本文探讨教育叙事研究对教师专业发展的重要性,以及为什么教师专业发展要推行教育叙事研究,并针对教师专业发展的困难,探讨如何在教师专业发展中推行教育叙事研究。

关键词：叙事研究教师专业发展行动研究