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含hTERT基因片段重组逆转录病毒的构建

中国热带医学 2005年第7期5卷 1405-1407页

作者：胡贵方孙莉莎欧程山蒋毅萍庞建新南方医科大学公共卫生与热带医学学院流行病教研室广东广州510515 南方医科大学药学院药理学教研室广东广州510515 南方医科大学公共卫生与热带医学学院毒理学教研室广东广州510515

目的构建含hTERT基因片段的重组逆转录病毒. 方法采用RT-PCR法从人白血病细胞株K-562中扩增hTERT基因片段(1590～2540bp),亚克隆至逆转录病毒表达载体pLXSN,构建重组质粒pLXSN-hTERT;用脂质体转染的方法将从重组质粒转入PT67细胞,G-418... 详细信息

目的构建含hTERT基因片段的重组逆转录病毒. 方法采用RT-PCR法从人白血病细胞株K-562中扩增hTERT基因片段(1590～2540bp),亚克隆至逆转录病毒表达载体pLXSN,构建重组质粒pLXSN-hTERT;用脂质体转染的方法将从重组质粒转入PT67细胞,G-418压力筛选获得含hTERT基因片段的重组逆转录病毒细胞克隆;0.22μm微孔过滤抗性克隆上清获得含表达hTERT基因的重组逆转录病毒;Western Blot检测G-418抗性克隆的hTERT产物的表达.结果PCR扩增的hTERT基因片段与GenBank公布的序列相比仅有2个核苷酸差异,氨基酸序列完全一致;重组病毒的滴度为2.85×105PFU/ml;Western Blot检测到含hTERT基因片段的重组病毒能够表达出一分子量为37kD的多肽. 结论成功构建了表达hTERT基因片段的重组逆转录病毒,为进一步探讨内源性表达hTERT基因产物的树突状细胞能否激发特异性CTL的产生奠定了坚实的基础.

关键词： hTERT 基因表达逆转录病毒

妊娠早期维生素D缺乏对妊娠期糖尿病发生及妊娠结局的影响

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浙江临床医学 2022年第2期24卷 195-197页

作者：罗彩红李志菊魏方鲁云涯江润昌胡贵方南方医科大学附属佛山妇幼保健院 528000 南方医科大学公共卫生学院 510515

目的探讨妊娠早期维生素D缺乏对妊娘期糖尿病(GDM)发生及妊娠结局的影响。方法收集2018年1月至2019年12月在佛山市妇幼保健院进行产检的孕妇1,516例,均在妊娠11〜14周检测血液总25(OH)D含量和血清Ca^(2+)、Mg^(2+)、碱性磷酸酶、孕妇骨... 详细信息

目的探讨妊娠早期维生素D缺乏对妊娘期糖尿病(GDM)发生及妊娠结局的影响。方法收集2018年1月至2019年12月在佛山市妇幼保健院进行产检的孕妇1,516例,均在妊娠11〜14周检测血液总25(OH)D含量和血清Ca^(2+)、Mg^(2+)、碱性磷酸酶、孕妇骨密度值等其它实验室指标,在妊娠24〜28周进行75 g葡萄糖耐量试验,共有264例孕妇诊断为GDM。根据年龄±3岁并按1:2的比例匹配了528例非GDM孕妇进行研究。应用配对二分类logistic回归分析孕早期维生素D缺乏与GDM发生的关系。应用非条件二分类logistic回归分析孕早期维生素D缺乏及GDM发生与妊娠结局的关系。结果单因素及多因素logistic回归分析结果显示,维生素D缺乏[25(OH)D0.05)。在调整了潜在混杂因素后,妊娠早期维生素D缺乏的早产发生风险较高,OR值为2.124(95%CI:1.111〜4.060,P=0.023)。未发现妊娠早期维生素D缺乏与其他妊娠结局如胎儿窘迫、胎膜早破和低出生体重儿等有关。结论妊娠早期维生素D缺乏可能增加早产发生的风险,定期检测维生素水平,指导维生素D缺乏孕妇积极补充维生素D,可以改善妊娠结局。

关键词：维生素D缺乏妊娠早期妊娠期糖尿病早产

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三种副溶血性弧菌分子检测试剂盒的评价

热带医学杂志 2011年第3期11卷 288-290,298页

作者：黄弦江晓玲贺小峰胡贵方南方医科大学公共卫生与热带医学学院流行病学系广东广州510515

目的综合评价国内三种副溶血性弧菌商品试剂盒的检测效果。方法选用TIANDA公司的副溶血性弧菌PCR检测试剂盒、TAITAIGEN公司的副溶血性弧菌Real-timePCR检测试剂盒和HF公司的副溶血性弧菌LAMP检测试剂盒,以10倍稀释梯度的标准菌液确定... 详细信息

目的综合评价国内三种副溶血性弧菌商品试剂盒的检测效果。方法选用TIANDA公司的副溶血性弧菌PCR检测试剂盒、TAITAIGEN公司的副溶血性弧菌Real-timePCR检测试剂盒和HF公司的副溶血性弧菌LAMP检测试剂盒,以10倍稀释梯度的标准菌液确定各种试剂盒检出限;以国标法为标准,评价每种试剂盒的灵敏度、特异度和符合率;最后比较三种试剂盒的耗时、成本和操作性。结果 PCR、Real-timePCR和LAMP检测试剂盒的检出限分别为1.18×103cfu/ml、11.8cfu/ml和11.8cfu/ml;在74份海产品检测中,三种试剂盒的灵敏度分别为100%、100%和100%;特异度分别为56%、48%和50%;符合率分别为70%、65%和66%;三种试剂盒检测结果之间差异无统计学意义(P=0.074);耗时分别为120、80和80min;成本分别为:10、40和45元/次;操作性从难到易排列依次为PCR、Real-timePCR和LAMP检测试剂盒。结论三种分子检测试剂盒的灵敏度高,特异度较低,操作简便,可推荐作为副溶血性弧菌检测的初筛方法。

关键词：副溶血性弧菌试剂盒评价

分枝PEI修饰的PLGA纳米粒转染DNA的研究

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现代生物医学进展 2012年第26期12卷 5009-5014页

作者：季明辉胡贵方顾大勇谢伟东谈书勤徐华欧青叶南方医科大学公共卫生与热带医学学院广东广州515000 深圳出入境检验检疫局疾病预防控制研究室广东深圳518045 清华大学深圳研究生院广东深圳518045 南通大学公共卫生学院江苏南通226019

目的:建立基于聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLGA)载DNA的基因转染体系,比较用空白聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLG-A-E)吸附质粒DNA和用分枝PEI修饰后的PLGA纳米粒(PLGA-BPEI)吸附质粒DNA优缺点。方法:用乳化蒸发法制备纳米粒,对纳米粒进行表... 详细信息

目的:建立基于聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLGA)载DNA的基因转染体系,比较用空白聚(乳酸-羟基乙酸)纳米粒(PLG-A-E)吸附质粒DNA和用分枝PEI修饰后的PLGA纳米粒(PLGA-BPEI)吸附质粒DNA优缺点。方法:用乳化蒸发法制备纳米粒,对纳米粒进行表征研究,包括包封率、Zeta电位、粒径大小、稳定性,用荧光显微镜观察它们对NIH3T3和HEK293细胞的转染效率,用MTT检测对它们细胞的毒性。结果:制备了两种基于PLGA的纳米粒,PLGA-E和PLGA-BPEI粒径大小为200-270nm,zeta电位为0-30mV,在血清和不同的pH值时两者均较稳定,转染效率PLGA-BPEI较PLGA-E高,且释放时间早,但前者较后者对细胞毒性大。结论:这两种基于PLGA纳米粒均能有效转染质粒DNA,它们存在不同的优缺点,应根据不同需要进行选择。

关键词：聚(乳酸-羟基乙酸) 纳米粒基因转染

含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒的构建和免疫原性

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热带医学杂志 2007年第3期7卷 222-225页

作者：孙海峰俞守义欧程山胡贵方南方医科大学流行病系广州510515 南方医科大学放射医学系广州510515

目的构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性。方法采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将... 详细信息

目的构建含结核分枝杆菌Ag85A基因的2型重组腺相关病毒并初步研究其免疫原性。方法采用PCR法从结核杆菌H37Rv株扩增Ag85A基因,将PCR扩增产物克隆于2型腺相关病毒(AAV-2)表达质粒pSNAV中,构建重组质粒pSNAV-Ag85A;用脂质体转染的方法将重组质粒转入BHK-21细胞中,G418筛选得到能表达目的基因混合细胞系BHK-Ag85A;用具有rAAV-2包装功能的辅助病毒感染BHK-Ag85A,纯化后得到rAAV-2-Ag85A;Western blotting检测重组病毒Ag85A基因在BHK-21细胞中的表达;rAAV-2-Ag85A免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测血清中抗-Ag85A抗体,^(51)Cr释放分析检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果PCR扩增的Ag85A基因序列与GenBank公布的序列一致,纯化后得到的rAAV-2-Ag85A滴度为1×10^(12)virus particles/ml;Western blotting检测到rAAV-2-Ag85A在BHK-21细胞中能够表达出一相对分子质量为32000的多肽;rAAV-2-Ag85A免疫的Balb/c小鼠,抗-Ag85A抗体的滴度可达1∶1024,同时还可激发Ag85A特异性的CTL产生。结论rAAV-2-Ag85A构建成功,rAAV-2-Ag85A免疫小鼠可以同时诱导体液和细胞免疫反应的出现。rAAV-2-Ag85A对于防止结核分枝杆菌感染,尤其是作为结核病的治疗性疫苗可能具有潜在的应用价值,值得进一步深入研究。

关键词：结核分枝杆菌 Ag85A 重组腺相关病毒,2型基因表达细胞毒性T淋巴细胞活性

APOBEC3F基因多态性与HBV感染易感性关系的探讨

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中国热带医学 2013年第4期13卷 471-472,483页

作者：王雄虎游志毅周军华谈书勤胡贵方南方医科大学公共卫生与热带医学学院广东广州510515

目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3F(APOBEC3F)基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法提取179例HBV感染者及224例健康者外周血基因组DNA,采用PCR技术,扩增包含APOBEC3F第4外显子的片段,应用DNA测序技术对各组多态位点进行分... 详细信息

目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3F(APOBEC3F)基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法提取179例HBV感染者及224例健康者外周血基因组DNA,采用PCR技术,扩增包含APOBEC3F第4外显子的片段,应用DNA测序技术对各组多态位点进行分型,计算各组等位基因频率。结果测序结果显示,APOBEC3F第四外显子-498位点、-532位点、-552位点在检测人群中不存在多态性,第-536位点基因发生T-C突变,两组差异有统计学意义(χ2=45.906,OR=0.260,95%C(I 0.173,0.391),P=0.000)。结论 APOBEC3F基因第4外显子-536位点T-C突变可能与HBV感染易感性有关。

关键词：载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽3F HBV 基因多态性

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GII.3型诺如病毒GZ31597株变异情况及与受体组织血型抗原结合模式分析

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病毒学报 2019年第1期35卷 37-44页

作者：王婧张会芳靳淼谢华萍孔翔羽冯微宏李宇宁胡贵方何雅青段招军南方医科大学公共卫生学院流行病学系广州510515 兰州大学第一临床医学院兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室北京102206 广州市疾病预防控制中心广州510440 无锡市疾病预防控制中心无锡214023 深圳市疾病预防控制中心微生物检验科深圳518055

诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起非菌型胃肠炎暴发流行的主要病原体之一。为了解我国GII.3型NoVs毒株的变异以及受体结合模式,本研究对来自2015年一起中国广州NoVs胃肠炎暴发的GII.3型毒株GZ31597株进行聚合酶区和完整VP1区基因扩增... 详细信息

诺如病毒(Noroviruses,NoVs)是引起非菌型胃肠炎暴发流行的主要病原体之一。为了解我国GII.3型NoVs毒株的变异以及受体结合模式,本研究对来自2015年一起中国广州NoVs胃肠炎暴发的GII.3型毒株GZ31597株进行聚合酶区和完整VP1区基因扩增、序列测定和序列分析,并表达VP1突出区蛋白(P蛋白),通过P蛋白与不同血型唾液样本的酶免疫分析法(EIA)测定实验确定其组织血型抗原(Histo-blood group antigens,HBGAs)结合模式。GZ31597株聚合酶和VP1基因系统进化分析表明,GZ31597株为GII.P12/GII.3-SubD基因型(聚合酶/衣壳区),该毒株较先前的GII.3毒株相比,在既是抗原表位又是HBGAs受体结合位点的氨基酸385残基发生了氨基酸转换。根据Western Blotting结果,证实P蛋白成功表达。唾液结合分析结果显示,该毒株P蛋白与A、B、AB、O型分泌型以及O型非分泌型唾液均可以结合,但结合值相对低。本研究表明该GII.P12/GII.3-SubD亚型的GII.3毒株在长期的流行过程中,通过氨基酸的转换,改变抗原性和受体结合活性,使GII.3型毒株在人群中继续流行。通过探索GII.3型NoVs在人群中长期广泛流行的原因,为GII.3型诺如病毒性胃肠炎的预防和控制提供重要依据。

关键词：诺如病毒(NoVs) GII.3基因型进化组织血型抗原(HBGAs) P蛋白

模拟高原梭曼中毒磷脂酶 A2 的变化及其在肺损伤中的作用

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中国药理学与毒理学杂志 1997年第2期11卷 43-43页

作者：赵吉青魏相德吕宏宇胡贵方第三军医大学毒理学教研室

模拟高原梭曼中毒磷脂酶Ａ２的变化及其在肺损伤中的作用赵吉青魏相德吕宏宇胡贵方（第三军医大学毒理学教研室，重庆６３００３８）采用滴定法测定了在模拟高原４０００ｍ梭曼中毒后大鼠肺组织及肺灌洗液的磷脂酶Ａ２活性和伊文思蓝含... 详细信息

模拟高原梭曼中毒磷脂酶Ａ２的变化及其在肺损伤中的作用赵吉青魏相德吕宏宇胡贵方（第三军医大学毒理学教研室，重庆６３００３８）采用滴定法测定了在模拟高原４０００ｍ梭曼中毒后大鼠肺组织及肺灌洗液的磷脂酶Ａ２活性和伊文思蓝含量的变化．结果显示无论是单纯梭曼作...

关键词：模拟高原梭曼磷脂酶A2

某医科大学研究生睡眠质量与应对行为的相关研究

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中华全科医学 2011年第4期9卷 602-604页

作者：章莹胡贵方陈清周军华林锦彦张正刚江晓玲南方医科大学流行病学教研室广东省广州市510515 南方医科大学生理学教研室广东省广州市510515

目的调查当前研究生的应对行为及睡眠质量,并且分析两者之间的相关性。方法随机抽取177名某医科大学研究生,采用自制调查表及匹兹堡睡眠质量调查表进行调查。结果 10.7%的研究生有睡眠质量问题,不同性别研究生的睡眠质量差异没有统计学... 详细信息

目的调查当前研究生的应对行为及睡眠质量,并且分析两者之间的相关性。方法随机抽取177名某医科大学研究生,采用自制调查表及匹兹堡睡眠质量调查表进行调查。结果 10.7%的研究生有睡眠质量问题,不同性别研究生的睡眠质量差异没有统计学意义;随着年级的增高睡眠质量下降,但这种趋势没有统计学意义。当遇到挫折时,研究生多数选择通过上网来缓解压力,同学关系、恋人关系较多受到影响。有"通过过度上网缓解压力"、"恋人关系恶化"、"暴力行为"的研究生睡眠质量较差,且差异具有统计学意义。Logit回归分析结果显示"自杀倾向"是影响睡眠质量的危险因素。结论通过调查学生的睡眠质量,有针对性地改善研究生的应对行为及身心健康。

关键词：应对行为睡眠质量医学研究生