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日本血吸虫组织蛋白酶B表达载体的构建及其核酸疫苗对小鼠保护性免疫的研究

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日本血吸虫组织蛋白酶B表达载体的构建及其核酸疫苗对小鼠保护性...

作者：胡永轩南华大学

学位级别：硕士

目的:构建日本血吸虫组织蛋白酶B(Sjcb2)原核表达载体pWR450-1/sjcb2并表达;构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/sjcb2,转染HeLa细胞,并将pcDNA3.1(+)/sjcb2直接肌注BALB/c小鼠,观察其所诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,初步研究该核酸疫苗... 详细信息

目的:构建日本血吸虫组织蛋白酶B(Sjcb2)原核表达载体pWR450-1/sjcb2并表达;构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/sjcb2,转染HeLa细胞,并将pcDNA3.1(+)/sjcb2直接肌注BALB/c小鼠,观察其所诱导的体液免疫和细胞免疫应答水平,初步研究该核酸疫苗对BALB/c小鼠诱导的免疫保护性作用,为研制新型抗日本血吸虫感染核酸疫苗提供实验依据。方法:用PRIMER5.0引物设计软件自行设计引物,PCR法扩增sjcb2基因片段,将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白斑筛选、双酶切分析和PCR鉴定后,亚克隆入pWR450-1原核表达载体及pcDNA3.1(+)真核表达载体中,经抗生素(氨苄青霉素)筛选、双酶切鉴定、PCR鉴定及测序鉴定后,将构建的pWR450-1/Sjcb2重组原核表达载体转化大肠杆菌后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达情况。构建的pcDNA3.1(+)/sjcb2重组质粒电穿孔转染HeLa细胞,免疫细胞化学法观察其在真核细胞中的表达情况;将核酸疫苗pcDNA3.1(+)/Sjcb2注射到BALB/c小鼠后腿股四头肌肌肉组织中,每2周免疫一次,共免疫3次。末次免疫后2周,用日本血吸虫尾蚴攻击感染BALR/c小鼠。PCR及免疫组化法分析Sjcb2基因在小鼠体内的稳定性及表达情况;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖反应;ELISA双抗体夹心法测定攻击感染前后小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ和IL-4的水平;琼脂双向扩散试验测定小鼠血清中Sjcb2抗体水平;攻击感染42天后剖杀小鼠,计算小鼠所荷成虫对数及肝脏所荷虫卵数。结果:成功构建pWR450-1/Sjcb2重组原核表达载体,并在*** DH5α中表达出一分子量约为86KDa的重组融合蛋白。成功构建pcDNA3.1(+)/sjcb2真核表达重组体,电穿孔转染HeLa细胞,免疫细胞化学法表明Sjcb2能在HeLa细胞胞浆中表达。将核酸疫苗pcDNA3.1(+)/Sjcb2

关键词：日本血吸虫组织蛋白酶B 核酸疫苗免疫

不同生育期高温胁迫下水稻OsRboh家族基因的表达模式

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华北农学报 2023年第5期38卷 1-9页

作者：刘晓龙廖婧芃钟歆段惜淼胡永轩刘嘉诚刘泽凯杨洪涛宜春学院生命科学与资源环境学院江西宜春336000

为了探究高温胁迫诱导水稻活性氧(ROS)产生的基因表达调控机制,在幼苗期、抽穗期和灌浆期设置高温胁迫,分析水稻ROS积累的动态变化,并采用实时荧光定量PCR技术分析不同生育期高温胁迫下水稻中9个NADPH氧化酶(Rboh)编码基因成员(OsRboh1~... 详细信息

为了探究高温胁迫诱导水稻活性氧(ROS)产生的基因表达调控机制,在幼苗期、抽穗期和灌浆期设置高温胁迫,分析水稻ROS积累的动态变化,并采用实时荧光定量PCR技术分析不同生育期高温胁迫下水稻中9个NADPH氧化酶(Rboh)编码基因成员(OsRboh1~OsRboh9)的基因表达模式。结果表明:随着高温胁迫时间的延长,水稻叶片和籽粒内ROS积累呈显著增加趋势。幼苗期高温胁迫7 d后水稻叶片ROS含量增加缓慢;抽穗期间和灌浆初期(1~10 d)高温胁迫导致水稻籽粒ROS含量持续增加。幼苗期和抽穗期高温胁迫下,9个Rboh家族基因的表达量随高温胁迫的持续逐渐升高,基因表达量较高的是OsRboh7和OsRboh5。灌浆期高温胁迫下,OsRboh1、OsRboh5和OsRboh9的基因表达量持续增加,其他基因呈先增加后下降的变化趋势。水稻OsRboh基因家族成员中以OsRboh7和OsRboh5在幼苗期、抽穗期和灌浆初期高温胁迫下的表达量较高。此外,OsRboh7和OsRboh5在水稻幼苗叶片、剑叶、小花、外稃、内稃、雄蕊、雌蕊和籽粒等组织器官中具有较高的表达量。高温胁迫对幼苗叶片、小花、雄蕊、雌蕊和籽粒中OsRboh7和OsRboh5的基因表达量诱导幅度较大。综上所述,水稻OsRboh基因家族成员以OsRboh7和OsRboh5对不同生育期高温胁迫的响应最为明显,在高温胁迫诱导水稻ROS生成的代谢通路中发挥关键作用。

关键词：水稻活性氧 Rboh 表达模式实时荧光定量PCR

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马拉色菌感染的光学治疗研究进展

中国真菌学杂志 2018年第5期13卷 318-320页

作者：戚欣雨胡永轩南方医科大学第三附属医院皮肤科广州510630

马拉色菌是寄生在人体和动物皮肤上的一种真菌,当机体抵抗力低下或某种诱因存在时,马拉色菌可大量繁殖导致机体皮肤和或其附属器官感染致病。马拉色菌感染机体皮肤可出现红斑、丘疹等皮损,皮损症状可影响患者的正常生活,并造成一定的心... 详细信息

马拉色菌是寄生在人体和动物皮肤上的一种真菌,当机体抵抗力低下或某种诱因存在时,马拉色菌可大量繁殖导致机体皮肤和或其附属器官感染致病。马拉色菌感染机体皮肤可出现红斑、丘疹等皮损,皮损症状可影响患者的正常生活,并造成一定的心理负担。治疗以口服抗真菌药为主,但其具有肝损伤、消化系统症状等药物不良反应,长期用药可致继发感染及耐药产生。近年安全、有效的光学疗法治疗真菌性皮肤病被广泛推荐,该文对马拉色菌感染的光学治疗研究进展进行综述,以期为该病的预防治疗提供一定参考。

关键词：马拉色菌马拉色菌感染光学治疗研究进展

凤仙花、散沫花及海娜花对小鼠雄激素性脱发的治疗作用及其机制

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南方医科大学学报 2019年第11期39卷 1376-1380页

作者：郑雨诗胡永轩刘康兴卢艳胡燕卿周冼苡南方医科大学第三附属医院皮肤科

目的通过皮下多点注射丙酸睾酮溶液制备C57BL/6小鼠雄激素性脱发模型,探讨不同药物对小鼠雄激素性脱发的治疗效果及作用机制。方法将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为药物组(T)、模型组(M)和空白组(K),药物组中又分为凤仙花组(T1)、散沫花组... 详细信息

目的通过皮下多点注射丙酸睾酮溶液制备C57BL/6小鼠雄激素性脱发模型,探讨不同药物对小鼠雄激素性脱发的治疗效果及作用机制。方法将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为药物组(T)、模型组(M)和空白组(K),药物组中又分为凤仙花组(T1)、散沫花组(T2)、海娜花组(T3)、米诺地尔酊组(T4),每组各8只,行背部局部脱毛处理后,除空白组外其余小鼠均皮下注射丙酸睾酮溶液5 mg/kg·d以构建雄激素性脱发模型,同时T1、T2、T3组分别用凤仙花粉、散沫花粉和海娜花粉于脱发部位外敷封包,1次/d,每次0.5 h;T4组外用5%米诺地尔酊,2次/d;模型组及空白组均予外用生理盐水。35 d后对小鼠背部进行拍照,并分别检测小鼠血清睾酮、双氢睾酮及脱毛处皮片睾酮、双氢睾酮、Ⅱ型5α还原酶的含量,同时取背部脱毛区全层皮肤制作石蜡切片,计算终毛/毳毛比。通过SPSS 20.0对实验数据进行统计学分析。结果药物组各组均能诱导C57BL/6小鼠毛发生长。治疗35 d后各药物组小鼠背部脱毛区均可见新发生长,其中T3组背部毛发密度最高,且可见部分皮肤变为灰色,T2组小鼠背部毛发密度最低;药物组实验部位皮肤组织HE染色切片在100倍显微镜视野下计数的总毛囊数量(22.75±4.301、31.38±13.212、33.00±13.825、31.12±8.357)及终毛毛囊数量(13.25±2.605、18.88±9.463、21.25±8.379、21.62±5.805)均高于模型组(9.12±6.854、3.62±2.504),差异有统计学意义(P<0.05);T1及T3组小鼠皮片中睾酮(0.81±0.12、0.85±0.19)、双氢睾酮(1.41±0.23、1.29±0.39)含量均明显低于模型组(4.75±0.41、6.48±0.57),差异有统计学意义(P<0.05);各药物组血清中睾酮、双氢睾酮含量及皮片中Ⅱ型5α还原酶含量与模型组间均无显著性差异。结论凤仙花、散沫花和海娜花对C57BL/6小鼠雄激素性脱发模型有治疗作用,其中凤仙花和海娜花可能通过降低局部皮肤中的雄激素含量来治疗雄激素性脱发。

关键词：雄激素性脱发凤仙花散沫花海娜花机制

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碳素钢及中高合金钢中高硅的快速分析

冶钢科技 1994年第1期 54-57页

作者：曾理胡永轩

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饮食因素对不同类型尿结石的影响

现代预防医学 2007年第8期34卷 1401-1402+1405页

作者：曹秋生曹欣胡燕霞黄士杰黄存嫦胡永轩湖南湘南学院广州市第八人民医院广东省第二人民医院郴州市中医院

[目的]探讨饮食因素、24h尿pH和出入水量在不同类型尿结石发生中的作用。[方法]采用病例与对照研究方法,病例组选择经泌尿外科手术或体外震波碎石(ESWL)后病例;对照组选自同一医院内科住院无尿结石患者。尿结石标本经红外光谱议鉴定结... 详细信息

[目的]探讨饮食因素、24h尿pH和出入水量在不同类型尿结石发生中的作用。[方法]采用病例与对照研究方法,病例组选择经泌尿外科手术或体外震波碎石(ESWL)后病例;对照组选自同一医院内科住院无尿结石患者。尿结石标本经红外光谱议鉴定结石成分,确定结石类型;以封闭式问卷,专门调查员询问病例与对照组的饮食习惯,被调查者自我评价日常生活中常吃或不常吃的饮食,检测24 h尿pH和出入水量。[结果]一水草酸钙结石最多,占38%;草酸钙结石和含草酸钙结石占结石总数的78%。4种不同类型尿结石的主要危因素为:①92.9%的一水草酸钙(COM)结石患者常吃动物蛋白,85.7%的患者24h尿pH低于6.0(P﹤0.01);②90%的一水草酸钙+磷酸三钙结石患者常吃动物蛋白(P﹤0.05);③100%的尿酸结石患者常吃动物蛋白,24 h尿pH低于6.0(P﹤0.01);④二水草酸钙(COD)结石患者少吃西红柿、芹菜,与正常人比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。[结论]长期大量吃动物蛋白,24 h尿pH低于6.0,饮水量低于1 500 ml/d是尿石发生的重要危险因素。

关键词：饮食因素尿结石影响

Sjcb2 DNA疫苗的构建及其在HeLa细胞中的表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第5期24卷 385-386页

作者：胡永轩肖建华黄家芳杨秋林湖南南华大学病原生物学研究所湖南湘南学院微生物与免疫教研室郴州423000 北京航天总医院北京100800

构建日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶基因核酸疫苗,PCR、双酶切和DNA序列鉴定后,运用电穿孔技术将重组体pcDNA3.1(+)/Sjcb2转染Hela细胞,免疫细胞化学检测其能在HeLa细胞浆内表达,为抗日本血吸虫核酸疫苗的研制打基础。

关键词：日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗真核表达

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广州地区241例头癣及病原菌分布情况分析

中华皮肤科杂志 2011年第8期44卷 585-586页

作者：蔡文莹鲁长明胡永轩鲁莎席丽艳中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科医学真菌研究中心广州510120

目的了解广州地区头癣及其病原菌分布情况。方法对1997年2月至2010年8月在本院皮肤科诊治的241例头癣患者资料进行回顾性分析。结果241例头癣患者中白癣179例占74．27％，脓癣34例占14．11％，黑点癣28例占11．62％，未发现黄癣。病原... 详细信息

目的了解广州地区头癣及其病原菌分布情况。方法对1997年2月至2010年8月在本院皮肤科诊治的241例头癣患者资料进行回顾性分析。结果241例头癣患者中白癣179例占74．27％，脓癣34例占14．11％，黑点癣28例占11．62％，未发现黄癣。病原菌中犬小孢子菌182株占80．89％，紫色毛癣菌25株占11．11％，须毛癣菌10株占4．44％，断发毛癣菌3株占1．33％，红色毛癣菌2株占0．89％，石膏样小孢子菌2株占0．89％，疣状毛癣菌1株占0．44％。患者年龄段分层分析结果显示，主要感染人群为学龄前儿童占39．00％。结论广州地区头癣中自癣所占比例最高；犬小孢子菌为头癣患者的主要致病菌；主要感染人群为学龄前儿童。

关键词：病原菌分布广州地区头癣紫色毛癣菌石膏样小孢子菌犬小孢子菌学龄前儿童患者资料

日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶基因的获得及结构与功能分析

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中国人兽共患病杂志 2004年第9期20卷 790-793页

作者：胡永轩肖建华曾桥万志刚张愉快黄家芳南华大学病原生物研究所衡阳421001

目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)中国大陆株 (chinesemainlandstrain)成虫cDNA文库中获得日本血吸虫新基因 -组织蛋白酶B内切酶基因 (CathepsinBendopeptidase) ,利用生物信息学技术对其结构和功能进行分析和预测。方法... 详细信息

目的　从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)中国大陆株 (chinesemainlandstrain)成虫cDNA文库中获得日本血吸虫新基因 -组织蛋白酶B内切酶基因 (CathepsinBendopeptidase) ,利用生物信息学技术对其结构和功能进行分析和预测。方法　从已构建好的日本血吸虫成虫cDNA文库中挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并进行生物信息学分析和登录 ;使用NCBI,SAPS ,TMHMM ,Signal,PsortII,Protscale和Scanprosite等软件对新基因的结构和功能进行分析和预测。结果　对 382个阳性克隆进行测序 ,获得部分新基因 ,其中包括组织蛋白酶B内切酶基因(AY2 2 6 984 )。利用Internet在线分析和相关生物信息学软件对新基因的结构和功能进行了分析和预测。结论　日本血吸虫组织蛋白酶B内切酶基因所编码蛋白为一跨膜蛋白 ,含有半胱胺酸蛋白酶结构域 ,可能对宿主血红蛋白具有降解作用 ,从而在日本血吸虫生长。

关键词：日本血吸虫 cDNA文库克隆步移法生物信息学组织蛋白酶B肽链内切酶