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野生型Kras基因和Lnc-TNFAIP3逆转胰腺癌细胞恶性表型及作用机制初步研究

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野生型Kras基因和Lnc-TNFAIP3逆转胰腺癌细胞恶性表型及作用机制...

作者：胡先华川北医学院

学位级别：硕士

第一部分野生型Kras在胰腺癌细胞迁移侵袭中的机制初探目的:1.探讨野生型Kras基因过表达对胰腺癌细胞株生物学行为的影响;2.探讨野生型Kras基因作用于胰腺癌细胞侵袭迁移过程的潜在分子机制。方法:1.利用慢病毒转染方法,将野生型Kras... 详细信息

第一部分野生型Kras在胰腺癌细胞迁移侵袭中的机制初探目的:1.探讨野生型Kras基因过表达对胰腺癌细胞株生物学行为的影响;2.探讨野生型Kras基因作用于胰腺癌细胞侵袭迁移过程的潜在分子机制。方法:1.利用慢病毒转染方法,将野生型Kras和突变型KrasG12D过表达基因分别转染到胰腺癌细胞Panc-1,构建野生型和突变型Kras稳定过表达细胞株,标记为KrasWT和KrasG12D;2.利用CCK-8实验、平板克隆形成实验、细胞周期检测、细胞划痕实验、transwell实验、流式细胞术等检测胰腺癌细胞的增殖、迁移侵袭等生物学行为变化;3.裸鼠成瘤实验检测不同Kras基因背景胰腺癌细胞体内成瘤能力;*** blot和免疫组化实验检测上述细胞株和裸鼠肿瘤的相关蛋白E-cadherin、α-E-catenin、MMP-9、MMP-3、P-Stat3 表达水平,探索野生型 Kras 基因作用于胰腺癌细胞的机制过程。结果:1.成功构建KrasWT、KrasG12D过表达胰腺癌细胞株;2.体外实验显示,与Panc-1相比,KrasWT细胞增殖能力、侵袭迁移能力减弱,p<0.05,差异具有统计学意义,而KrasG12D侵袭迁移能力增强,p<0.05,差异具有统计学意义,增殖能力差异无明显变化;3.裸鼠成瘤实验显示,KrasWT组肿瘤平均体积小于Panc-1组,KrasG12D组肿瘤平均体积大于Panc-1组,p<0.05,差异均具有统计学意义;*** blot和免疫组化结果显示,与对照组相比,KrasWT 的 E-cadherin、α-E-catenin、MMP-9、MMP-3、P-Stat3表达均上调。结论:1.野生型Kras基因能抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力,突变型Kras能增强细胞侵袭迁徙能力,且在体内有促进增殖作用,这种促进作用在体外实验中并不明显;2.野生型Kras基因抑制细胞迁徙侵袭迁移能力可能是通过wnt/β-catenin通路实现的。第二部分 Lnc-TNFAIP3在胰腺癌细胞迁徙侵袭的机制初探目的:1.探讨Lnc-TNFAIP3过表达与胰腺癌细胞生物学行为之间的关系;***-TNFAIP3作用于胰腺癌细胞侵袭迁移过程的作用机制。方法:1.利用慢病毒转染方法,构建Lnc-TNFAIP3稳定过表达胰腺癌细胞株;2.利用CCK-8、平板克隆实验、细胞周期检测、细胞划痕实验、transwell实验、流式细胞术等检测细胞株增殖能力、迁移侵袭能力等生物学行为变化,Western blot检测细胞株相关蛋白E-cadherin、α-E-catenin、vimentin、fibronectin 表达水平,探索 Lnc-TNFAIP3 作用于胰腺癌细胞的机制过程;3.转录组测序获得差异表达基因并进行富集通路分析,选择与Lnc-TNFAIP3紧密关系的基因和通路进行验证,探索其共同作用于胰腺癌的机制。结果:1.成功构建Lnc-TNFAIP3过表达胰腺癌细胞株;***-TNFAIP3过表达后,胰腺癌细胞增殖能力、迁移侵袭能力减低,细胞周期、细胞凋亡差异无统计学意义;3.与对照组相比,迁移侵袭相关蛋白 E-cadherin、α-E-catenin、vimentin、fibronectin 表达水平无明显差异;4.经转录组测序筛选获得差异表达的基因2363个,上调1254个,下调1109个,KEGG通路分析上调基因主要参与细胞周期、RNA转运、致病性大肠杆菌感染、肌动蛋白细胞骨架的调节、白细胞跨内迁移、p53信号通路、糖酵解等通路,下调表达基因主要参与氨基酸的生物合成、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路、小分析核糖核酸、胰岛素抵抗、补体系统等通路。结论:***-TNFAIP3过表达后,胰腺癌细胞增殖能力减低;***-TNFAIP3过表达后,胰腺癌细胞迁移侵袭能力减低,但相关蛋白表达无显著变化;3.通过KEGG通路富集分析,利用cytoscape软件筛选出关联性较高的 10 个基因 Actb、Vc1、Fn1、Rhoa、Cfl1、Actn4、Cdc42、Wasl、Msn、Actg1,以作后续研究。

关键词：胰腺癌野生型Kras 突变型Kras 迁移侵袭 Lnc-TNFAIP3 慢病毒转染

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关于高校实验室生物安全问题的探讨

卫生职业教育 2015年第18期33卷 105-106页

作者：胡先华川北医学院四川南充637000

实验室生物安全是高校实验室建设与管理的一项重要内容,是建设和谐校园的必要条件。针对日益重要的实验室生物安全问题,建议从硬件设施建设、建立专门的管理机构、完善安全规章制度、加强安全教育、严格废弃物管理、加强自查能力等方面... 详细信息

实验室生物安全是高校实验室建设与管理的一项重要内容,是建设和谐校园的必要条件。针对日益重要的实验室生物安全问题,建议从硬件设施建设、建立专门的管理机构、完善安全规章制度、加强安全教育、严格废弃物管理、加强自查能力等方面来加强实验室生物安全管理,确保高校的教学和科研顺利进行。

关键词：实验室生物安全生物风险评估自查能力

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肿瘤免疫逃逸相关分子及其机制研究进展

中国医药科学 2023年第8期13卷 36-38,90页

作者：胡先华川北医学院医学检验系四川南充637000

肿瘤细胞可通过多种途径逃避机体的免疫杀伤作用,如异常表达肿瘤表面抗原,改变细胞表面分子结构,或利用Fas/FasL(Fas ligand)系统分泌免疫抑制因子等抑制肿瘤免疫反应等。此外,不同种类的活化免疫细胞如自然杀伤(NK)细胞、调节性T细胞(T... 详细信息

肿瘤细胞可通过多种途径逃避机体的免疫杀伤作用,如异常表达肿瘤表面抗原,改变细胞表面分子结构,或利用Fas/FasL(Fas ligand)系统分泌免疫抑制因子等抑制肿瘤免疫反应等。此外,不同种类的活化免疫细胞如自然杀伤(NK)细胞、调节性T细胞(Treg)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、髓系抑制细胞(MDSC)、缺氧诱导因子1(HIF-1)、B7-H4等在肿瘤免疫逃逸过程中也扮演重要角色。NK细胞作为监视屏障、Treg抑制免疫细胞的活性并分泌免疫抑制细胞因子转化生长因子TGF-β(TGF-β)和白介素-10(IL-10)等、TAM降解细胞外基质,增加血管通透性,促进肿瘤细胞侵袭和迁移、HIF-1调控血管内皮生长因子(VEGF)的产生,促进内皮细胞增殖,促进新生血管出芽等。本文对近年来不同种类活化免疫细胞参与肿瘤免疫逃逸机制的研究进展做一综述。

关键词：肿瘤免疫逃逸免疫抑制免疫治疗

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动态脑电图与常规脑电图诊断病毒性脑炎的价值比较

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临床合理用药杂志 2018年第7期11卷 137-138页

作者：王频胡先华重庆市南川区人民医院脑电图室 408400

目的对比动态脑电图与常规脑电图诊断病毒性脑炎的价值。方法将96例病毒性脑炎患者随机分为动态脑电图组和常规脑电图组,每组各48例,并根据患者病情将其分为:轻度病毒性脑炎组、中度病毒性脑炎组、重度病毒性脑炎组。对比2种检查方法的... 详细信息

目的对比动态脑电图与常规脑电图诊断病毒性脑炎的价值。方法将96例病毒性脑炎患者随机分为动态脑电图组和常规脑电图组,每组各48例,并根据患者病情将其分为:轻度病毒性脑炎组、中度病毒性脑炎组、重度病毒性脑炎组。对比2种检查方法的检测异常率。结果动态脑电图组异常率为81.2%(39/45)高于常规脑电图组的50.0%(24/48),差异有统计学意义(P<0.01)。动态脑电图组患者轻、中、重度患者检测异常率均高于常规脑电图组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论动态脑电图在病毒性脑炎的早期辅助诊断中的临床应用价值高于常规脑电图,值得在临床推广使用。

关键词：动态脑电图常规脑电图病毒性脑炎

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医学检验专业实验室建设的探索与思考

中国医药科学 2015年第1期5卷 198-200页

作者：胡先华川北医学院医学检验系四川南充637000

医学检验实验室在培养学生动手能力和创新能力方面起着重要作用,加强实验室建设,不仅需要硬件设施的投入,还要科学化规范化的管理,更新教学体系,完善教学方法等,充分提高实验室建设水平,培养适应市场需求的高素质人才。

关键词：医学检验实验室建设教学改革实验室管理

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计划分娩中地诺前列酮栓放置时间的选择

中国现代医药杂志 2013年第7期15卷 88-89页

作者：姜小庆胡先华西安航天总医院陕西西安710100

地诺前列酮栓是通过FDA认证的已被推荐的促宫颈成熟药物。用于足月妊娠有引产指征的产妇，安全有效，与既往经典的缩宫素引产比较可以缩短产程，提高临产率及阴道分娩率，降低剖宫产率，增加自然分娩的机会。本院产科对于有引产指征者... 详细信息

地诺前列酮栓是通过FDA认证的已被推荐的促宫颈成熟药物。用于足月妊娠有引产指征的产妇，安全有效，与既往经典的缩宫素引产比较可以缩短产程，提高临产率及阴道分娩率，降低剖宫产率，增加自然分娩的机会。本院产科对于有引产指征者使用地诺前列酮栓引产，效果好，

关键词：地诺前列酮栓放置时间计划分娩引产指征剖宫产率促宫颈成熟 FDA认证缩宫素引产

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500例病毒性脑炎的临床与脑电图分析

中国实用医药 2015年第28期10卷 76-77页

作者：胡先华钟华吴清重庆市南川区人民医院脑电图室 408400 重庆市南川区人民医院神经内科 408400 广东医学院

目的研究500例病毒性脑炎的临床与脑电图。方法回顾性分析500例病毒性脑炎患者的临床资料及检查报告,所有患者均行脑电图检查,其中284例行CT检查,357例行磁共振检查,436例行脑脊液检查。研究病毒性脑炎常见的临床特点,比较脑电图与其他... 详细信息

目的研究500例病毒性脑炎的临床与脑电图。方法回顾性分析500例病毒性脑炎患者的临床资料及检查报告,所有患者均行脑电图检查,其中284例行CT检查,357例行磁共振检查,436例行脑脊液检查。研究病毒性脑炎常见的临床特点,比较脑电图与其他检查手段的差异。结果病毒性脑炎好发于儿童及青壮年,以头痛、发热、意识障碍等为早期主要临床表现;脑电图检查异常率87.20%,CT检查异常率26.06%,磁共振检查异常率46.22%,脑脊液检查异常率61.24%,脑电图检查异常率明显高于其他检查手法,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论病毒性脑炎好发于儿童及青壮年,常以头痛、发热、意识障碍等为前驱症状,脑电图检查敏感性高,临床上值得推广。

关键词：病毒性脑炎临床脑电图

星状神经节阻滞在椎动脉型颈椎病患者中的临床效果分析

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第7期 56-57页

作者：韩兴伟胡先华西安航天总医院陕西西安710100

探讨星状神经节阻滞在椎动脉型颈椎病患者中的临床效果分析。方法:选取2019年2月至2020年2月我院收治的60例椎动脉型颈椎病患者为研究对象,随机分为对照组(n=30例)和观察组(n=30例)。对照组予以物理治疗,观察组则在此基础上采用星状神... 详细信息

探讨星状神经节阻滞在椎动脉型颈椎病患者中的临床效果分析。方法:选取2019年2月至2020年2月我院收治的60例椎动脉型颈椎病患者为研究对象,随机分为对照组(n=30例)和观察组(n=30例)。对照组予以物理治疗,观察组则在此基础上采用星状神经节阻滞治疗。对两组治疗效果进行评估,比较两组患者临床治疗效果比较情况、两组不良反应发生情况。结果:观察组临床治疗总有效率96.67%高于对照组83.33%(P<0.05)。观察组出现眩晕、心率减慢、反应迟钝、血压降低的总发生率6.67%低于对照组36.67%(P<0.05)。结论:常规物理治疗的基础上,采用星状神经节阻滞治疗椎动脉型颈椎病患者,临床治疗效果显著且不良反应发生较少,利于稳固患者生命安全,值得推广和应用。

关键词：物理治疗星状神经节阻滞椎动脉型颈椎病患者不良反应

SYSMEX XN-2000血液分析仪在体液标本计数与分类中的应用

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检验医学 2016年第11期31卷 978-980页

作者：胡先华张金花川北医学院医学检验系四川南充637000 川北医学院附属医院检验科四川南充637000

目的：探讨SYSMEX XN-2000全自动血液分析仪（简称XN-2000）在体液标本计数中的应用。方法收集76例患者的体液（胸腹水）标本，分别用XN-2000和手工镜检法对其进行有核细胞计数，以手工法计数结果为依据，将76例胸腹水标本分为≤199个/... 详细信息

目的：探讨SYSMEX XN-2000全自动血液分析仪（简称XN-2000）在体液标本计数中的应用。方法收集76例患者的体液（胸腹水）标本，分别用XN-2000和手工镜检法对其进行有核细胞计数，以手工法计数结果为依据，将76例胸腹水标本分为≤199个/μL（A组）、200-999个/μL（B组）和≥1000个/μL （C组）3个组，并进行统计分析。结果 XN-2000与手工法有核细胞计数和分类结果比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 XN-2000能满足临床检测需求。

关键词：血液分析仪体液有核细胞分类