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沙门氏菌FliT-FliD蛋白复合物及大肠杆菌O157:H7 Z0021蛋白结构与功能研究

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沙门氏菌FliT-FliD蛋白复合物及大肠杆菌O157:H7 Z0021蛋白结构与...

作者：胡俊强山东大学

学位级别：硕士

鞭毛位于细菌的表面,是细菌主要的运动器官。自然界中,通过鞭毛的推动作用细菌能逃离不利的环境,到达营养更丰富、更利于其生存的环境中。有些肠道致病菌在鞭毛的推动作用下,能很快的吸附到上皮细胞表面,进入血液,使宿主致病。因此,越... 详细信息

鞭毛位于细菌的表面,是细菌主要的运动器官。自然界中,通过鞭毛的推动作用细菌能逃离不利的环境,到达营养更丰富、更利于其生存的环境中。有些肠道致病菌在鞭毛的推动作用下,能很快的吸附到上皮细胞表面,进入血液,使宿主致病。因此,越来越多的新型抗菌药物都选择鞭毛的合成途径作为靶点。细菌鞭毛的合成是一个自组装的过程。它是由一系列的蛋白组成的一个大的蛋白质复合体。与鞭毛合成相关基因的转录翻译都有着严格的调控。按照基因的转录顺序,鞭毛基因被分为三类：第一级、第二级以及第三级鞭毛基因。flhDC操纵子处于整个鞭毛基因转录翻译的最上游,首先被翻译出来。此操纵子翻译出来的FlhD和FlhC两个蛋白能组装成异源蛋白六聚体FlhD4C2。FlhD4C2复合物是一种转录调控因子,能促进第二级鞭毛基因的转录。二级鞭毛基因主要表达基体、钩形鞘蛋白及鞭毛特异性转录因子628。三级鞭毛基因主要负责鞭毛蛋白、一些调控蛋白及一些未知功能蛋白的表达。鞭毛蛋白的表达和组装过程受不同层次上很多因子的调控。鞭毛基因的调控涉及到DNA水平、mRNA水平及蛋白水平,FlhD4C2复合体是鞭毛合成调控的重要位点。本文的研究对象FliT是在蛋白水平上调控FlhDC功能的蛋白。 FliT是一种鞭毛特异性的分子伴侣,它能特异性地结合FliD,一方面抑制FliD在细胞质中的聚沉,另一方面促进FliD的运输。FliT还可以和FlhDC复合体相互作用,抑制鞭毛基因的表达。本论文的主要研究内容和结论如下：（1）确定FliD与FliT作用的最小区域。为了找到与F1iT相互作用的最小FliD片段,我们克隆了四个FliD片段：FliD1-115aa、FliD1-215aa、FliD115-end、215-end。通过pull down,我们将与FliT作用的区域确定为FliDC端的210个氨基酸残基。（2）获得FliT与FliD的蛋白复合物晶体。我们共转了FliT94与FliD（215-end）,得到含有可同时表达FliD和FliT蛋白的菌株。通过离子交换柱、分子筛纯化蛋白,冰上用胰蛋白酶消化蛋白复合体30min,筛晶体得到了FliT与FliD的蛋白复合物晶体。（3）确定FliT与FliD、 FlhDC作用的氨基酸。我们克隆了FliT的5个点突变体：F7S、W11S、W30S、Y40S、Y67S。通过pull down,我们发现W30S突变体不能再和FliD结合,由此,我们得知FliT30位的色氨酸参与其与FliD的相互作用。用同样的方法,我们遗憾地发现5个点突变体都还能继续与FlhDC结合。本课题的另一部分是关于大肠杆菌0157：H7中Z0021蛋白结构和功能的研究。大肠杆菌0157：H7是一种胃肠病原体,能引发人体多种疾病。Z0021基因位于OI-1菌毛编码区,是一种新发现的鞭毛合成抑制因子。敲除Z0021基因后,大肠杆菌0157：H7细菌表面鞭毛数量增加,移动性显著增强。相反,如果过表达Z0021基因,就会抑制细菌移动。通用转录报告系统,发现Z0021蛋白不影响FlhDC的转录翻译,但影响二级三级基因的转录。在Z0021过表达的菌株中,FlhD4C2表达水平也随之上调。我们尝试通过纯化结晶的方法得到Z0021蛋白的结构,并解释其对细菌移动性的抑制机理。SignalP4.1Server预测发现Z0021的前18位氨基酸可能是信号肽。我们构建了Z0021-pGEX和Z0021-23-end-pGEX克隆,通过细菌移动性实验,我们发现Z0021的全长蛋白和片段23-end均能抑制细菌移动性。由此,我们推测Z0021发挥功能的区域可能是细胞质而非周质空间。

关键词：鞭毛 FliT FliD ZOO21 细菌移动性

西秦岭地区同源偏铝质和含白云母过铝质花岗岩类成因研究

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西秦岭地区同源偏铝质和含白云母过铝质花岗岩类成因研究

作者：胡俊强中国地质大学(北京)

学位级别：硕士

关于(强)过铝质花岗岩类的起源,及其与同期偏铝质花岗岩类之间的关系,学界尚存在很大的争议。过铝质花岗岩的起源对于了解花岗岩的岩石成因、大陆地壳的形成和演化具有重要的意义。本研究揭示青藏高原西秦岭地区大约243–242 Ma的过马... 详细信息

关于(强)过铝质花岗岩类的起源,及其与同期偏铝质花岗岩类之间的关系,学界尚存在很大的争议。过铝质花岗岩的起源对于了解花岗岩的岩石成因、大陆地壳的形成和演化具有重要的意义。本研究揭示青藏高原西秦岭地区大约243–242 Ma的过马营复式岩体(GCP,Guomaying Composite Pluton)中同时存在偏铝质花岗岩类和含白云母的过铝质花岗岩类,因此,过马营复式岩体中的中三叠世花岗岩类可以在岩相学和地球化学上划分为两组。第Ⅰ组样品的特征表现为稍高的KO/NaO比值和偏铝质特点,其具有较低的Zr饱和温度(740–756℃);来自该组的同期岩浆锆石表现出相对低的Hf含量(9312–13407 ppm),和较低的U/Yb比值(1.36–3.68)。相比之下,第II组样品在某种程度上表现为较低的KO/NaO比值,并且主要显示强过铝质的特征,同时具有略高的锆饱和温度(752–778℃);该组的同期岩浆锆石显示出相对高的Hf含量(99235–153456ppm),和普遍高的U/Yb比值(1.19–4.78)。这种差异暗示两组锆石是不同批次岩浆作用的产物。两组样品具有相似的微量元素和Sr–Nd–Pb–Hf同位素组成,指向两组样品均可能起源于中下地壳变基性岩源区,熔融残余相包含角闪石,这与传统意义上认为的强过铝质花岗岩的源区解释并不一致。偏铝质花岗岩类被解释为西秦岭中–下地壳中角闪岩的部分熔融,而含白云母的过铝质花岗闪长岩是通过含角闪岩和变质花岗岩、变质英云闪长岩、变质硬砂岩、不成熟的碎屑岩(例如火山碎屑岩)的混合源区部分熔融产生。两组样品中含有高An牌号的斜长石核部,暗示其可能来自富水玄武质熔体,以循环晶的形式通过岩浆通道进入浅部岩浆房。据推断,不同的岩浆源区组成,裹挟转熔矿物组合、不同程度的循环晶再循环(包括角闪石或黑云母聚合体)、岩浆混合作用等机制共同控制着过马营复式岩体岩浆成分的变化。因此,本文的数据表明,含白云母强过铝质花岗岩的源岩可能为再循环的变沉积岩,亦可能来源于角闪岩为主导的源区,并伴有一些变质花岗岩、变质英云闪长岩、变质硬砂岩、不成熟的碎屑岩的参与。

关键词：强过铝质Ⅰ型花岗岩地球化学转熔矿物相循环晶多批次岩浆

城市历史文化广场空间活力分析与评价——以洛阳市周王城广场为例

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城市历史文化广场空间活力分析与评价——以洛阳市周王城广场为例

作者：胡俊强河南科技大学

学位级别：硕士

城市历史文化广场是城市重要的公共空间之一,它不仅是城市居民休闲娱乐、交往休息的空间场所,更是一座城市文化形成的见证者和展示者,具有发扬和传承历史文化的重要作用。但是近年来,随着城市化进展加快,城市历史文化广场在建设过程中... 详细信息

城市历史文化广场是城市重要的公共空间之一,它不仅是城市居民休闲娱乐、交往休息的空间场所,更是一座城市文化形成的见证者和展示者,具有发扬和传承历史文化的重要作用。但是近年来,随着城市化进展加快,城市历史文化广场在建设过程中出现了一些列问题,导致广场品质下降、空间活力衰败,不能更好的满足人们的需求和传承历史文化的需要,这对城市历史文化广场的发展产生了巨大的挑战。基于上述背景,该文在环境行为学理论、场所理论的基础上,以洛阳市周王城广场为研究对象,以提升周王城广场空间活力为目标,通过实地调研、现场访谈、评价体系构建等方法分析了广场使用现状和空间活力存在的问题,并针对问题提出相应的优化策略。该文的主要研究内容如下:(1)城市历史文化广场空间活力评价要素分析。首先借鉴了其他类型城市公共空间活力的影响要素,并将其总结为自然环境影响因素、地理位置影响因素、空间环境影响因素、事件影响因素;其次对这四种影响因素具体在城市广场中的重要性加以分析,最后通过专家因子打分法,对27个影响因子进行筛选最终确定了24个影响因子作为城市历史文化广场空间活力的评价指标。(2)城市历史文化广场空间活力评价体系构建。对第二章所选取的24个评价指标进行归纳总结,从自然活力、区位活力、场地活力、设施活力、文化活力5个维度进行活力评价体系构建,然后运用德菲尔法、层次分析法构建城市历史文化广场空间活力评价模型,通过权重计算和一致性检验最终确定准则层和各指标层的权重值,其中各准则层的权重值从高到底分别为区位活力、文化活力、场地活力、设施活力、自然活力。(3)洛阳市周王城广场空间活力分析与评价。通过构建的城市历史文化广场空间活力评价体系,对洛阳市周王城广场空间活力进行分析与评价,计算出各项指标得分及广场综合得分,其中得分较高的活力有区位活力和文化活力,并通过分析总结了广场存在的问题。(4)洛阳市周王城广场空间活力优化策略。在对周王城广场空间活力分析与评价的基础之上,通过总结其存在的问题,从完善服务设施,丰富空间活动类型;深入挖掘挖掘场地文化,加深人们对场地的记忆;加强维护管理,提升空间品质三个方面提出周王城广场空间活力优化策略,并针对南广场重点空间进行了景观提升。

关键词：历史文化广场空间活力周王城广场评价体系

伏马毒素降解菌的分离鉴定与降解特性及机理研究

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伏马毒素降解菌的分离鉴定与降解特性及机理研究

作者：胡俊强南京农业大学

学位级别：硕士

伏马毒素是一类由镰刀菌在一定温度、湿度条件下产生的水溶性次级代谢产物,主要污染玉米及其制品。伏马毒素能引起猪肺水肿和马脑白质软化症等疾病,人类的食管癌和神经管缺陷也与其密切相关,严重威胁人畜健康。近年来关于生物法控制粮... 详细信息

伏马毒素是一类由镰刀菌在一定温度、湿度条件下产生的水溶性次级代谢产物,主要污染玉米及其制品。伏马毒素能引起猪肺水肿和马脑白质软化症等疾病,人类的食管癌和神经管缺陷也与其密切相关,严重威胁人畜健康。近年来关于生物法控制粮食和饲料中的霉菌毒素已成为研究热点。本文对伏马毒素B1(FB1)的制备和FB1降解菌进行了研究,主要包括以下研究内容:伏马毒素的制备、分离与纯化:在灭菌大米中接种高产毒镰刀菌,制备毒素基质。选用XAD-2大孔吸附树脂初步净化毒素提取液,通过调节温度、pH、溶液浓度优化吸附条件。筛选合适的溶剂体系,利用高速逆流色谱分离纯化获得大量的FB1和伏马毒素B3(FB3)。制备的毒素经质谱检测结合核磁共振进行定性分析,经高效液相色谱检测结合称重法进行定量分析。结果表明,利用大孔吸附树脂联合高速逆流色谱单次可制备124 mg FB1和47 mg FB3,纯度分别可达96.8%和95.6%,总回收率为75%。本方法制备量大、成本低,制备获得的FB1为降解菌的筛选提供了物质基础。以FB1为唯一碳源,从土壤中分离得到一株FB1高效降解菌FDS-1。通过形态学观察、生理生化实验和16S rRNA序列分析,鉴定为鞘氨醇盒菌(Sphingopyxis sp.)。FDS-1的最适生长温度为30℃,最适生长pH为8.0,在无机盐培养基中,FDS-1的最适降解温度为25℃,最适降解pH范围为8.0～9.0。该菌株FB1降解活性物质分布于细胞内部。以FDS-1全基因组为模板,克隆获得两段FB1降解酶基因fumD和fumI。将获得的两段基因插入pET29A载体后转化至*** BL21中构建重组大肠杆菌,通过IPTG诱导重组大肠杆菌表达降解酶基因,表达产物均为无活性的包涵体沉淀,以高浓度尿素溶解包涵体,镍柱纯化后通过梯度透析复性降解酶。结果表明,FD酶的分子量为58 kDa,最适降解温度为30℃～40℃,最适降解pH范围是5.0～9.0;FI酶的分子量为48kDa,最适降解温度为40℃,最适降解pH为8.0～9.0,两种酶的热稳定性较差,60℃时均会丧失生物学活性。把FD酶和FI酶作用后的FB1的降解产物进行质谱分析,获得降解产物的结构,初步推断FB1经FD酶降解后形成水解伏马毒素B1(HFB1),HFB1经FI酶作用后转化为2-酮基-HFB1,但FI酶不能直接降解FB1。将融合信号肽(AprE、NprE、SacB)的目的基因插入pAX01载体构建重组质粒,利用化学法将重组质粒转入枯草芽孢杆菌WB800感受态细胞,成功构建重组芽孢杆菌。其中fumD基因在芽孢杆菌中成功表达,fuml基因未能分泌表达。对不同时间节点FD降解酶的活性进行检测。结果表明,FD降解酶酶活在24 h时达到最高,且三种信号肽对FD降解酶的分泌量无显著影响。

关键词：伏马毒素高速逆流色谱鞘氨醇盒菌降解机制

卫星时频生成与保持技术中的基准频率处理技术研究

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卫星时频生成与保持技术中的基准频率处理技术研究

作者：胡俊强西安电子科技大学

学位级别：硕士

本论文作为基础性研究,根据我国导航卫星时频生成与保持技术的要求,利用DDS将星载原子钟输出的10MHz信号经过频率处理产生高频率稳定度、高分辨率、低相位噪声的基准10.23MHz时频信号。对于主备钟信号的相位差测量,本文根据群相位同步... 详细信息

本论文作为基础性研究,根据我国导航卫星时频生成与保持技术的要求,利用DDS将星载原子钟输出的10MHz信号经过频率处理产生高频率稳定度、高分辨率、低相位噪声的基准10.23MHz时频信号。对于主备钟信号的相位差测量,本文根据群相位同步的概念,通过参考频率信号和被测频率信号之间相位重合检测构成测量闸门的方法消除了通常计数测量方法中存在的士1计数误差,测量分辨率能够大幅提高。通过实验表明,该方法宽范围的测量分辨率可达5×10-11/s,满足低成本、宽范围的应用需求。该基准频率处理技术可以根据记录下卫星星载钟的漂移数据,如根据温度—频率变化数据算出调整信号,控制DDS保证基准频率信号的稳定度。由于成本低,灵活,信号处理范围宽,因此可以广泛运用于一些高精密仪器的设计,填补我国高精密仪器设计的空白,产生可观的社会和经济效益。

关键词：频率处理 DDS 群相位相位差测量

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纳米银及其复合物光学和抗菌性能研究

纳米银及其复合物光学和抗菌性能研究

作者：胡俊强昆明理工大学

学位级别：硕士

纳米银(Ag NPs)由于其良好的光学、催化以及抗菌性能,而受到了广泛的关注。目前纳米银的制备方法有很多种,但是通过不同方法制备出的纳米银的颗粒大小、分散程度等都有不同,甚至可以通过改变外在的温度等参数或掺杂不同的金属离子来改... 详细信息

纳米银(Ag NPs)由于其良好的光学、催化以及抗菌性能,而受到了广泛的关注。目前纳米银的制备方法有很多种,但是通过不同方法制备出的纳米银的颗粒大小、分散程度等都有不同,甚至可以通过改变外在的温度等参数或掺杂不同的金属离子来改变纳米银的内部结构,从而改善它的性能。除了抗菌性能以外,纳米银的颜色也受到了广泛关注,在分子探测(增强表面拉曼)、金属离子探测及纳米银的表面处理(织物整理剂、涂料和抗菌涂料等)等方面都有应用。聚乙烯醇(PVA)具有良好的水溶性,通常情况下可以作为分散剂和保护剂来制备纳米材料。但是,其稳定作用需要一定的时间来实现,刚使用PVA制备好的纳米银在低浓度下就有一定的不稳定性。从外观来看,会反映在纳米银溶液的颜色上面,同时,纳米银的内部结构(颗粒大小、颗粒排列方式)也会发生改变,这些变化可以通过紫外可见光谱(UV-vis)、透射电镜(TEM)来确定。处于稳定状态的纳米银,根据颗粒的形状、大小的不同呈现出不同的颜色,在实际使用过程中,这些外观的颜色可能会影响其使用范围。在本工作中,首先以PVA制备的亚稳态纳米银为研究对象,发现低浓度(如10ppm纳米银)时的颜色可以从黄色变为酒红色,最后变为黑色。利用TEM,通过对其外观及颗粒形貌大小的分析,结合紫外-可见光谱的分析,研究了纳米银内部的基本情况,并和外观表现进行对照,认为纳米银的颜色变化是纳米银粒子由链状团聚到无规则团聚的结果,对此提出了变化过程的理论依据。其次,应用纳米银的自催化特性,发现通过调整加入的铜离子的浓度,在较高温度下可以制备出无色且抗菌性能良好的纳米银铜溶液,这种银芯铜壳结构具有良好的抗菌性能,同时可以实现纳米银无色化从而用于织物抗菌处理,我们结合TEM和紫外-可见光谱研究了这种结构的形成机理。最后,研究了纳米银在氯化钠溶液环境中的稳定性,发现纳米银可以在合适的氯化钠环境中完全变为无色,并且不会形成氯化银沉淀,TEM分析发现,纳米银颗粒在氯化钠环境中尺寸变小,分析认为,氯化钠环境导致银离子从纳米银颗粒中释放,形成银离子水溶液,抗菌性能下降。这些结果证明,虽然氯化钠有助于降低纳米银的颜色从而使黄色变浅,但同时会使纳米银转换为银离子而导致抗菌性能明显下降。

关键词：纳米银颜色变化亚稳态抗菌性能

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芒硝蠕变特性及本构模型研究

四川大学学报（工程科学版） 2015年第5期47卷 78-85页

作者：王军保刘新荣张倩倩胡俊强西安建筑科技大学土木工程学院陕西西安710055 重庆大学土木工程学院重庆400045

为研究芒硝蠕变特性,利用RLW-2000岩石流变试验机对芒硝开展了三轴压缩蠕变试验;基于此,以分数阶粘滞体代替广义Kelvin模型中的常规粘滞体,建立了分数阶广义Kelvin模型;针对其蠕变方程形式复杂、应用不便的缺点对其进行了简化,将简化后... 详细信息

为研究芒硝蠕变特性,利用RLW-2000岩石流变试验机对芒硝开展了三轴压缩蠕变试验;基于此,以分数阶粘滞体代替广义Kelvin模型中的常规粘滞体,建立了分数阶广义Kelvin模型;针对其蠕变方程形式复杂、应用不便的缺点对其进行了简化,将简化后的分数阶广义Kelvin模型与Heard稳态蠕变模型相结合,构建了一种新的岩石蠕变本构模型,并利用芒硝蠕变试验结果反演了模型参数。结果显示:同一围压下,随轴向应力增大,芒硝蠕变变形量和稳态蠕变率均随之增加,而各级荷载加载过程中芒硝变形模量不断减小;芒硝蠕变过程具有非线性特征,且随蠕变时间延长,芒硝屈服强度逐渐降低;拟合曲线和试验结果吻合良好,说明该模型能够较好地描述芒硝的蠕变特性。

关键词：芒硝蠕变特性分数阶广义Kelvin模型 Heard模型

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新型塑料检查井专用料的开发与应用研究

中国塑料 2010年第9期24卷 64-67页

作者：郭林李艳胡俊强杨建华四川仁智油田技术服务股份有限公司四川绵阳621000 昆明普尔顿管业有限公司云南昆明650109

主要介绍了塑料检查井的应用背景、现状及存在的问题,针对该问题设计开发出一种高性能的塑料检查井专用料。与普通料相比,专用料的熔体流动速率由4～6 g/10 min提高到6～10 g/10 min,缺口冲击强度由6 kJ/m2提高到8～24 kJ/m2,弯曲模量由... 详细信息

主要介绍了塑料检查井的应用背景、现状及存在的问题,针对该问题设计开发出一种高性能的塑料检查井专用料。与普通料相比,专用料的熔体流动速率由4～6 g/10 min提高到6～10 g/10 min,缺口冲击强度由6 kJ/m2提高到8～24 kJ/m2,弯曲模量由2.0 GPa提高到4.5～6.0 GPa。该专用料具有应用范围广、加工性能好、使用方便的特点,能有效地解决目前塑料检查井在强度、韧性和成本等方面的问题。

关键词：塑料检查井专用料弯曲模量弯曲强度环刚度

全民健身背景下我国体育公园公共体育服务供给问题及优化策略研究

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全民健身背景下我国体育公园公共体育服务供给问题及优化策略研究