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利用DNA洗牌技术构建GRATEN体系用于基因组编辑的研究

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利用DNA洗牌技术构建GRATEN体系用于基因组编辑的研究

作者：王肖猛聊城大学

学位级别：硕士

基因突变一直是研究基因功能的最有效方法。随着现代基因组测序技术的迅速发展,大量的基因或其调控因子功能需要鉴定。因此建立精确、高效的基因组定点突变技术,运用反向遗传学方法研究基因(或DNA)的功能是当前功能基因组学研究的热点... 详细信息

基因突变一直是研究基因功能的最有效方法。随着现代基因组测序技术的迅速发展,大量的基因或其调控因子功能需要鉴定。因此建立精确、高效的基因组定点突变技术,运用反向遗传学方法研究基因(或DNA)的功能是当前功能基因组学研究的热点之一。人工介导的锌指核酸酶技术(ZFN)、类转录激活因子样效应物核酸酶技术(TALEN)和RNA介导的规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)系统都可以精确地在基因组的特定位点上产生DNA双链切口,进而经细胞内源性修复机制(同源重组修复或非同源末端连接)的修复而实现基因插入、缺失和碱基替换等突变。与传统的基因组编辑技术相比,基因编辑新技术不仅保留了可定点修饰的特点,还可应用到更多的物种上,大大提高了基因定点突变效率,其载体的构建时间缩短,成本降低,为实现基因组定点突变提供广阔的平台。然而,最近的研究发现,CRISPR系统脱靶率非常高。本研究利用DNA洗牌技术一次性克隆多个基因,并实现一次性定点突变二个氨基酸位点。利用DNA洗牌技术构建了表达载体,首次在植物中利用引导RNA偶联核酸内切酶(guided RNA and tethered endonuclease,GRATEN)用于基因组编辑,研究GRATEN系统介导的基因组编辑技术在植物基因组中定点突变的可能性。在烟草叶片中瞬时表达,并进行了致突变的初步研究。GRATEN系统包含蛋白质和RNA二部分,将二组分克隆到同一植物表达载体。蛋白质组分包含来自于噬菌体MS2外壳蛋白(MS2 coat protein,MCP)和核酸内切酶Fok I的切割结构域,MCP的N和C端分别融合Fok I,表达后形成Fok I:MCP:Fok I融合蛋白。RNA组分包含串联的指导RNA(guided RNA,g RNA)和MCP结合RNA。g RNA与目标DNA通过碱基配对而识别并结合到靶DNA,MCP以二聚体的形式与形成特定二级结构的RNA结合,由此在靶DNA特定位点形成Fok I二聚体,切割DNA,产生双链断裂,经细胞内修复机制(主要为非末端连接,Non-Homologous End Joining,NHEJ)产生碱基替换、缺失和插入等突变。利用GRATEN系统,我们选择本氏烟草(Nicotiana benthamiana)八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因作为打靶基因。结果显示可产生较高(约35.7%)基因突变率。我们的研究结果初步说明GRATEN系统可用于植物(有可能在其他生物)基因组定点突变,为功能基因组研究、基因治疗等提供了一种新的设计思路和技术。

关键词： DNA洗牌技术基因组编辑非同源末端连接 GRATEN 突变

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建立微波标准场的高性能天线的研制

电波科学学报 2007年第3期22卷 518-521,526页

作者：闻映红肖猛王维龙焦欣北京交通大学电信学院北京100044 中国计量科学研究院北京100013

建立微波功率密度标准是解决微波场强的量值溯源和计量问题的关键，而建立精确的宽频带、宽量程微波功率密度标准装置离不开产生微波标准场的高性能微波天线.通过理论计算和仿真分析研制了频率覆盖1～18 GHz的5付角锥形喇叭天线，用以... 详细信息

建立微波功率密度标准是解决微波场强的量值溯源和计量问题的关键，而建立精确的宽频带、宽量程微波功率密度标准装置离不开产生微波标准场的高性能微波天线.通过理论计算和仿真分析研制了频率覆盖1～18 GHz的5付角锥形喇叭天线，用以建立量程为10mW/cm^2的宽频带微波功率密度标准装置.采用三天线法对实际制作完成后的天线的增益和驻波比进行了测量.结果表明，所研制的天线的性能完全符合性能设计要求.此外，还研究分析了由天线在微波功率密度标准发生装置中所引入的不确定度，给出了其对微波功率密度标准发生装置的总不确定度的贡献.结果表明所研制的天线完全符合宽频带、宽量程和高精度的微波功率密度发生装置的要求.

关键词：微波标准场高性能天线

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昆虫病原线虫侵染鳞翅目幼虫的血淋巴病理学

中国生物防治 2000年第3期16卷 114-117页

作者：肖猛四川省农业管理干部学院成都610071

菜青虫经口感染斯氏线虫后 ,2 0小时左右在其血淋巴中出现杆状的共生细菌 ,并开始大量增殖 ,48小时的细菌数已达出现初期的 1万倍以上。用 3种不同品系线虫试验的结果显示 :经分别感染不同线虫的大蜡螟幼虫 ,其血细胞数总的增减变化趋... 详细信息

菜青虫经口感染斯氏线虫后 ,2 0小时左右在其血淋巴中出现杆状的共生细菌 ,并开始大量增殖 ,48小时的细菌数已达出现初期的 1万倍以上。用 3种不同品系线虫试验的结果显示 :经分别感染不同线虫的大蜡螟幼虫 ,其血细胞数总的增减变化趋势是一致的 ,在感染初期血细胞数较健康虫体明显降低 ,4～ 6小时达最低值 ;随后逐渐增加 ,1 2小时后血细胞数达到高峰 ;随后又迅速下降。感染线虫的家蚕 1 2小时后其血淋巴的蛋白质含量较对照明显降低 ,血糖总量较小辐度的降低 (对照中则继续增高 ) 。

关键词：斯氏线虫共生菌鳞翅目幼虫血淋巴病理学

激光修复GH4169镍基高温合金的高温拉伸性能

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中国激光 2016年第8期43卷 161-166页

作者：赵剑峰成诚谢得巧肖猛南京航空航天大学机电学院江苏南京210016

采用镍基高温合金FGH95粉末对航空发动机常用材料GH4169合金进行激光修复试验,测试不同工艺参数下修复试样的高温拉伸性能并对其断裂机理进行分析。研究表明,在合适的工艺参数下,修复试样的高温抗拉强度可达到无损试样的85%以上;当激光... 详细信息

采用镍基高温合金FGH95粉末对航空发动机常用材料GH4169合金进行激光修复试验,测试不同工艺参数下修复试样的高温拉伸性能并对其断裂机理进行分析。研究表明,在合适的工艺参数下,修复试样的高温抗拉强度可达到无损试样的85%以上;当激光线能量密度为100J/mm2时,修复试样的高温抗拉强度达到最大值708 MPa,为无损试样的90.4%,其屈服强度也达到最大值538 MPa,超过无损试样的4.3%。修复试样的高温拉伸断裂位置位于基体的热影响区,在激光束照射所产生的交变循环热作用下,热影响区发生的元素偏析是导致修复试样高温拉伸性能下降的主要原因。

关键词：激光技术激光修复高温合金高温拉伸性能元素偏析

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地热能有机朗肯循环系统控制策略研究

化工学报 2024年

作者：闫沛伟张曼铮肖猛苗政华北电力大学低品位能源多相流与传热北京市重点实验室

有机朗肯循环在中低温热能利用领域有着重要的应用。对其控制策略的研究是该技术走向实用化的必须过程。本文基于干热岩地热井口条件，通过热力学计算和设备选型设计了对应的ORC机组，并对该机组进行建模和动态仿真，研究了四种策略对OR... 详细信息

有机朗肯循环在中低温热能利用领域有着重要的应用。对其控制策略的研究是该技术走向实用化的必须过程。本文基于干热岩地热井口条件，通过热力学计算和设备选型设计了对应的ORC机组，并对该机组进行建模和动态仿真，研究了四种策略对ORC机组性能的影响规律及控制性能：恒定过热度运行，恒定蒸发压力运行，恒定负荷运行以及变负荷运行。结果表明：通过工质泵流量进行调节可以满足ORC系统的动态控制，实现系统的高效和稳定运行。恒定过热度运行不仅能在热源温度波动时保证系统的安全运行，同时也表现出最佳的输出性能。恒定蒸发压力运行、恒定负荷运行和变负荷运行可以在其需要的稳压、稳负荷和变负荷场景中应用，但它们都对过热度有极大的影响，这限制了它们的适用范围。因此在实际应用中应根据具体的工作场景在控制策略中组合不同的运行模式。

关键词：地热源有机朗肯循环动态仿真控制策略系统输出功

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蚁群算法在时延约束选播路由问题中的应用

计算机工程与应用 2008年第24期44卷 121-123,127页

作者：肖猛李陶深广西大学计算机与电子信息学院南宁530004

在分析选播通信服务的基础上,研究了蚁群算法在网络选播路由问题中的应用,提出了一种基于蚁群系统原理,用于解决有时延约束的选播路由问题。算法采用调整最优解路径上的信息素和算法重启策略,较好地解决了蚁群算法易于陷入局部最优的问... 详细信息

在分析选播通信服务的基础上,研究了蚁群算法在网络选播路由问题中的应用,提出了一种基于蚁群系统原理,用于解决有时延约束的选播路由问题。算法采用调整最优解路径上的信息素和算法重启策略,较好地解决了蚁群算法易于陷入局部最优的问题。仿真实验结果表明,该算法是有效且切实可行的,它可以在满足延时约束的条件下迅速找到最优解。

关键词：蚁群算法时延约束选播路由服务质量(QoS)

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浅埋特厚煤层综放面支架合理工作阻力研究

采矿与安全工程学报 2018年第1期35卷 78-85页

作者：黄鹏肖猛李俊孟王奎李猛中国矿业大学深部岩土力学与地下工程国家重点实验室江苏徐州221116 中国矿业大学矿业工程学院江苏徐州221116

在浅埋特厚煤层综放开采覆岩运移特征的基础上,提出基于控顶效果及工作面支架来压超限比例的工作阻力反演优化法。具体为统计4个工作面支架工作阻力指标,即:额定阻力、均值阻力、均值偏阻力和均值上阻力,考虑2个评判标准—控顶效果与支... 详细信息

在浅埋特厚煤层综放开采覆岩运移特征的基础上,提出基于控顶效果及工作面支架来压超限比例的工作阻力反演优化法。具体为统计4个工作面支架工作阻力指标,即:额定阻力、均值阻力、均值偏阻力和均值上阻力,考虑2个评判标准—控顶效果与支架压力超限比重来确定工作面合理的工作阻力,基于核算的工作面阻力,采用类比法设计相邻工作面的合理工作阻力,结合现场监测对支架工作阻力进行反馈及修正。金地煤矿1322工作面支架工作阻力监测数据表明:修正后相邻工作面液压支架在来压期间,其工作阻力值是核算的额定工作阻力值的80%~90%;液压支架工作良好,并未出现立柱收缩或压架等现象。

关键词：浅埋特厚煤层综放面工作阻力反演

激光修复GH4169镍基高温合金的弯曲性能

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中国激光 2013年第11期40卷 126-131页

作者：戚永爱赵剑峰谢德巧李悦沈理达肖猛南京航空航天大学机电学院江苏南京210016

基于激光修复技术,采用镍基高温合金FGH95粉末对航空发动机常用材料GH4169合金进行不同激光线能量密度q下激光修复对比试验,对修复试样进行弯曲性能测试与金相分析。研究激光线能量密度对修复试样弯曲性能的影响,探讨激光修复后试样弯... 详细信息

基于激光修复技术,采用镍基高温合金FGH95粉末对航空发动机常用材料GH4169合金进行不同激光线能量密度q下激光修复对比试验,对修复试样进行弯曲性能测试与金相分析。研究激光线能量密度对修复试样弯曲性能的影响,探讨激光修复后试样弯曲性能变化的微观机理。结果表明:修复试样弯曲强度与无损试样接近,基本达到无损试样的弯曲性能。当q=120.0J/mm2时,修复试样弯曲强度最大,为827.16 MPa,高于无损试样0.5%。随着激光线能量密度的增加,修复试样弯曲强度先增加后减小。在较高激光线能量密度下(154.3J/mm2),因修复区组织枝晶粗化,导致修复试样弯曲性能下降。

关键词：激光技术激光修复 GH4169合金弯曲性能微观组织

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矸石充填材料侧压系数影响因素试验研究

采矿与安全工程学报 2020年第1期37卷 73-80页

作者：肖猛巨峰何泽全李开源王鹏中国矿业大学深部岩土力学与地下工程国家重点实验室江苏徐州221116 中国矿业大学力学与土木工程学院江苏徐州221116 山东新巨龙能源有限责任公司山东菏泽274000

破碎矸石在压缩过程中的侧压系数是固体充填沿空留巷工作面巷旁支护体设计的关键参数。然而以往研究中大多使用经验参数,与现场实际情况差别较大。基于此,本文在破碎矸石压缩试验的基础上,采用颗粒流数值模拟软件,通过三维扫描重构矸石... 详细信息

破碎矸石在压缩过程中的侧压系数是固体充填沿空留巷工作面巷旁支护体设计的关键参数。然而以往研究中大多使用经验参数,与现场实际情况差别较大。基于此,本文在破碎矸石压缩试验的基础上,采用颗粒流数值模拟软件,通过三维扫描重构矸石颗粒并建立数值模型,确定破碎矸石颗粒流细观参数,并研究颗粒级配、加载速率对破碎矸石压实特性和侧压系数的影响规律。结果表明:破碎矸石压实过程可分为初始压密阶段、承载能力增长阶段和应力-应变线性阶段3个阶段;破碎矸石侧压系数随着压实的不同阶段不断增长,在应力-应变线性阶段趋于稳定,稳定值在0.35~0.40;加载速率增高,能够提高破碎矸石早期承载能力,同时降低早期侧压系数,但在应力-应变线性阶段加载速率对破碎矸石压实特性影响较小;矸石颗粒级配中粒径较高时,矸石轴向承载能力降低,同时侧压系数降低。研究成果可为充填开采无煤柱沿空留巷参数设计提供理论依据。

关键词：采选充+ 沿空留巷侧压系数颗粒流