检索结果-南通市图书馆

橡胶树膜系统酵母双杂交cDNA文库构建及HbSRPP7互作蛋白筛选

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

热带作物学报 2023年第9期44卷 1735-1744页

作者：聂智毅康桂娟覃怀德曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所/农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101

橡胶树橡胶粒子上的蛋白质在橡胶生物合成一系列反应过程中起着关键作用,它们直接决定着橡胶烃分子的数量和大小,影响天然橡胶的产量和质量。小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)是丰度仅次于橡胶延伸因子(rubber elong... 详细信息

橡胶树橡胶粒子上的蛋白质在橡胶生物合成一系列反应过程中起着关键作用,它们直接决定着橡胶烃分子的数量和大小,影响天然橡胶的产量和质量。小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)是丰度仅次于橡胶延伸因子(rubber elongation factor,REF)的橡胶粒子蛋白组分,与橡胶粒子发育和橡胶生物合成密切相关。目前已知橡胶粒子上存在多种SRPP家族蛋白,但大部分成员的功能尚不清楚。SRPP可能通过与其他橡胶粒子蛋白相互作用发挥功能。为了筛选SRPP蛋白家族成员之一Hb SRPP7的互作蛋白,本研究利用位点特异性重组技术构建了原始库容为1.5×10^(7)CFU的均一化橡胶树胶乳膜蛋白酵母双杂交系统(membrane yeast two-hybrid system,MYTH)cDNA文库,该文库插入片段平均长度大于1500 bp,重组率约为100%。构建了用于MYTH系统筛选HbSRPP7互作蛋白的pBT3STE-SRPP7和pBT3SUC-SRPP7诱饵载体并确认其能在NMY32酵母菌株中正确表达,无自激活活性。使用pBT3STE-SRPP7诱饵质粒对胶乳MYTHcDNA文库进行筛选,获得21个HbSRPP7候选互作的蛋白,包括3个REF家族蛋白(HbREF1、HbREF3和HbREF8)、2个SRPP家族蛋白(HbSRPP1、HbSRPP2)、2个活性氧清除相关蛋白(thioredoxin H-type-like、L-ascorbate peroxidase 2)以及5个胁迫相关蛋白(high mobility group Bprotein 2-like、RPM1-interacting protein 4-like、stress-related protein-like、salt stress-induced hydrophobic peptide ESI3-like和F-box/kelch-repeat protein)。结果显示HbSRPP7除了可能通过与橡胶生物合成相关的橡胶粒子蛋白互作参与橡胶生物合成,也可能通过与生物和非生物逆境胁迫相关蛋白互作,响应橡胶树乳管生物和非生物逆境胁迫系统信号,参与橡胶粒子上的橡胶生物合成调控。该研究结果有助于了解SRPP家族蛋白的功能,为揭示橡胶粒子上参与橡胶生物合成的蛋白复合体组成,阐明橡胶生物合成及其调控的分子机制奠定基础。

关键词：橡胶树 HbSRPP7 膜蛋白酵母双杂交系统 cDNA文库互作蛋白

蟋蟀神经肽AST系列基因串联体在苏云金芽孢杆菌中的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

蟋蟀神经肽AST系列基因串联体在苏云金芽孢杆菌中的表达

作者：聂智毅华南热带农业大学

学位级别：硕士

蟋蟀神经肽ASTs是从二点蟋蟀(Gryllus bimaculatus)脑中分离的一种保幼激素抑制素(allatostatin,AST),体外实验显示它能强烈抑制昆虫咽侧体合成保幼激素。蟋蟀神经肽AST基因富含GC序列,共编码15个AST多肽,C末端有一共同的序列Y/FXFGL/I/... 详细信息

蟋蟀神经肽ASTs是从二点蟋蟀(Gryllus bimaculatus)脑中分离的一种保幼激素抑制素(allatostatin,AST),体外实验显示它能强烈抑制昆虫咽侧体合成保幼激素。蟋蟀神经肽AST基因富含GC序列,共编码15个AST多肽,C末端有一共同的序列Y/FXFGL/I/V。本文主要工作就是通过构建苏云金芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭表达载体,将构建的神经肽AST系列基因导入苏云金芽孢杆菌进行表达分析,并在基因表达后利用表达产物进行虫效实验。利用PCR的方法从携带cry3Aa基因及其启动子的苏云金芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭载体pHT305A中扩增得到cry3Aa基因的启动子及cry3Aa基因与启动子的融合片段,克隆于苏云金芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭载体pHT304中,构建成苏云金芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭表达载体pHT3AP及苏云金芽孢杆菌—大肠杆菌穿梭融合表达载体pHT3AG。 AST、AST、AST及AST基因串联体连接至pHT3AP和pHT3AG的多克隆位点上导入苏云金芽孢杆菌无质粒突变株BMB171中进行表达分析,其中pHT3AG—AST和pHT3AG—AST能在苏云金芽孢杆菌无晶体突变株BMB171中表达目的蛋白cry3Aa—AST和cry3Aa—AST。比较重组质粒受体菌和空白质粒受体菌表达产物SDS-PAGE图谱,可见重组质粒受体菌比空白质粒受体菌多表达了一种蛋白,该蛋白质的分子量约93—94kD,与理论推导值94kD相近,应为目的蛋白。对cry3Aa—AST和cry3Aa—AST在苏云金芽孢杆菌表达系统表达的培养时间与表达量之间关系进行了研究,实验结果表明培养约60—72h受体菌中的目标蛋白量最高。以表达的目标蛋白cry3Aa—AST和cry3Aa—AST对椰心叶甲进行虫效测试。把清水、pHT3AG空载体表达产物、表达了cry3Aa—AST和cry3Aa—AST融合蛋白的BMB171pHT3AG-AST和BMB171pHT3AG-AST通过浸叶法处理椰子树未展开的芯叶,喂食各龄椰心叶甲。从喂食表达蛋白的第二天起开始记录椰心叶甲取食量、体重和死亡数。结果表明BMB171pHT3AG-AST和BMB17lpHT3AG-AST对椰心叶甲低龄幼虫、高龄幼虫及成虫的致死效果不明显,对其食欲及生长发育也无明显影响。

关键词：蟋蟀神经肽 AST系列基因苏云金芽孢杆菌 cry3Aa基因载体构建表达毒性

巴西橡胶树HbNTL1基因启动子的克隆与序列分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通报 2013年第1期29卷 83-88页

作者：康桂娟黎瑜曾日中聂智毅中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室和省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室儋州571737

膜结合NAC转录因子(NTLs)是植物NAC转录因子家族中一类C端具有跨膜结构域(transmembrane motifs,TMs)的转录调控因子,在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中具有重要的功能。根据巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)膜结合类NAC转录因子... 详细信息

膜结合NAC转录因子(NTLs)是植物NAC转录因子家族中一类C端具有跨膜结构域(transmembrane motifs,TMs)的转录调控因子,在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中具有重要的功能。根据巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)膜结合类NAC转录因子HbNTL1基因cDNA序列,利用基因组步移的方法从巴西橡胶树叶片基因组DNA中克隆获得了HbNTL1基因上游1 718 bp的调控片段。序列分析表明,该段序列含有一个典型的真核生物核心启动子区域,转录起始位点A位于起始密码子上游206 bp处。该启动子序列除了含有多个TATA-box、CAAT-box等基本顺式作用元件外,还存在赤霉素、茉莉酸和脱落酸等激素响应元件以及大量逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,如ABRE、DOFCOREZM、MYBCORE、W-box和MYCCONSENSUSATHSE等反应元件,表明HbNTL1转录因子可能是一个逆境胁迫相关NAC转录因子,在橡胶树抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要功能。

关键词：巴西橡胶树 HbNTL1启动子顺式调控元件逆境胁迫

不同提取液对巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质提取和分离的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

植物生理学报 2013年第10期49卷 1089-1098页

作者：代龙军黎瑜聂智毅康桂娟段翠芳曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地海南儋州571737

橡胶粒子是巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)乳管细胞内进行橡胶生物合成的亚细胞结构;对橡胶粒子的蛋白质组学研究,可为揭示天然橡胶生物合成机理提供线索。采用5种提取液分别提取橡胶粒子蛋白,并对橡胶粒子蛋白进行SDS-PAGE和16-BAC/SD... 详细信息

橡胶粒子是巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)乳管细胞内进行橡胶生物合成的亚细胞结构;对橡胶粒子的蛋白质组学研究,可为揭示天然橡胶生物合成机理提供线索。采用5种提取液分别提取橡胶粒子蛋白,并对橡胶粒子蛋白进行SDS-PAGE和16-BAC/SDS-PAGE电泳分离及MALDI TOF/TOF串联质谱分析,证明不同提取液抽提的橡胶粒子蛋白具有不同组成,发现分子量较高的橡胶延伸因子家族蛋白更难从橡胶粒子上被洗脱和提取。通过检索橡胶树转录组数据库,鉴定了3个新的橡胶粒子蛋白,即醌氧化还原酶、含蓖麻毒素B链凝集素结构域蛋白及枯萎/脱水相关蛋白。本研究建立的橡胶粒子蛋白质提取和分离方法,为进一步鉴定低丰度和具有重要功能的橡胶粒子蛋白提供了参照体系。

关键词：巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质提取液

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

酵母双杂交技术研究与应用进展

安徽农业科学 2009年第7期37卷 2867-2869,2926页

作者：李先昆聂智毅曾日中海南大学园艺园林学院海南儋州571737 中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地--海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737

酵母双杂交是利用遗传学方法在酵母真核细胞体内研究蛋白质之间相互作用的非常有效的一种分子生物学技术,被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域,已成为分子生物学研究领域的重要实验手段之一,获得了许多有价值的... 详细信息

酵母双杂交是利用遗传学方法在酵母真核细胞体内研究蛋白质之间相互作用的非常有效的一种分子生物学技术,被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域,已成为分子生物学研究领域的重要实验手段之一,获得了许多有价值的重要发现。随着分子生物学的发展,在酵母双杂交的基础上又建立起了酵母单杂、反向双杂交、三杂交及核外双杂交等多项技术,并已经成功地运用于蛋白质之间、蛋白质与DNA、RNA和配体之间相互作用的研究。对酵母双杂交及其相关技术与应用研究进展进行了综述。可以预见,在人类、水稻和拟南芥等模式生物基因组测序完成后,酵母双杂交及其衍生技术将在功能基因组学和蛋白质组学的研究中发挥越来越重要的作用。

关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用功能基因组学

巴西橡胶树HbNAC1基因启动子的克隆及序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基因组学与应用生物学 2012年第5期31卷 447-454页

作者：康桂娟黎瑜夏可灿聂智毅曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地儋州571737 海南大学农学院海口570228

NAC转录因子是植物特有的一类转录调控因子,在植物的生长发育、激素调节和境胁迫应答中具有重要的功能。为研究NAC转录因子在巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)抗逆胁迫中的功能,本项目组根据巴西橡胶树NAC转录因子-HbNAC1基因序列,通过Ge... 详细信息

NAC转录因子是植物特有的一类转录调控因子,在植物的生长发育、激素调节和境胁迫应答中具有重要的功能。为研究NAC转录因子在巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)抗逆胁迫中的功能,本项目组根据巴西橡胶树NAC转录因子-HbNAC1基因序列,通过Genome Walking方法从巴西橡胶基因组DNA中获得了长度为1861bp的HbNAC1基因的5'调控区片段,序列分析表明该段序列含有一个典型的真核生物核心启动子区域,转录起始位点T位于起始密码子上游52bp处。该启动子序列除了含有TATA-box、CAAT-box等基本顺式作用元件外,还具有茉莉酸响应元件以及大量光顺式作用元件和逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,这表明HbNAC1基因在橡胶树逆境胁迫应答过程具有重要功能,其启动子可能是一个光诱导型和组织特异性启动子。

关键词：巴西橡胶树 HbNAC1启动子顺式调控元件逆境胁迫

橡胶树一个胶乳高表达MDR型ABC转运蛋白的克隆与表达研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农学通报 2011年第12期27卷 181-186页

作者：聂智毅李波白瑞璞黎瑜中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室/省部共建国家重点实验室培养基地--海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737 海南大学海南儋州571737

ABC转运蛋白(ATP-Binding Cassette)是目前已知最大、功能最广泛的蛋白家族之一,与植物次生代谢物的排泌、积累及跨膜运转密切相关。本研究筛选已构建的乙烯刺激橡胶树胶乳消减文库,克隆了1个ABC转运蛋白基因EST,通过RACE技术获得其全长... 详细信息

ABC转运蛋白(ATP-Binding Cassette)是目前已知最大、功能最广泛的蛋白家族之一,与植物次生代谢物的排泌、积累及跨膜运转密切相关。本研究筛选已构建的乙烯刺激橡胶树胶乳消减文库,克隆了1个ABC转运蛋白基因EST,通过RACE技术获得其全长cDNA序列,该基因开放阅读框(ORF)共3753bp,编码1251个氨基酸残基。研究表明其在橡胶树基因组中存在多个拷贝,主要在胶乳中表达,且在乙烯或茉莉酸刺激(刺激产胶)条件下上调表达。推测其可能与橡胶生物合成过程中的物质转运密切相关。

关键词： ABC转运蛋白橡胶树表达分析

巴西橡胶树茉莉酸诱导胶乳cDNA文库的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农学通报 2010年第13期26卷 376-379页

作者：聂智毅黎瑜李先昆段翠芳中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培养基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737

以巴西橡胶树热研7-33-97为材料,对橡胶树割线下方施用0.1%茉莉酸,采集胶乳,提取胶乳总RNA并纯化mRNA,构建巴西橡胶树茉莉酸诱导胶乳融合表达文库。检测表明,获得的初级文库滴度为1.9×106pfu/mL,插入片段在0.5～5kb之间,平均大小为1kb... 详细信息

以巴西橡胶树热研7-33-97为材料,对橡胶树割线下方施用0.1%茉莉酸,采集胶乳,提取胶乳总RNA并纯化mRNA,构建巴西橡胶树茉莉酸诱导胶乳融合表达文库。检测表明,获得的初级文库滴度为1.9×106pfu/mL,插入片段在0.5～5kb之间,平均大小为1kb左右;表明该文库质量合格,为今后克隆胶乳中的茉莉酸信号应答基因奠定基础。

关键词：茉莉酸橡胶树 cDNA文库

橡胶粒子膜蛋白双向电泳体系的建立和质谱初步分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

热带作物学报 2006年第3期27卷 22-29页

作者：段翠芳聂智毅曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部热带作物生物学重点开放实验室海南儋州571737

橡胶粒子是橡胶树乳管细胞中进行橡胶生物合成的一种特殊细胞器。参与橡胶生物合成的橡胶转移酶、橡胶延长因子等重要酶类和相关的蛋白质调控因子均定位于橡胶粒子的表面或镶嵌于橡胶粒子膜中。本研究在SDS-PAGE分离橡胶粒子膜蛋白的基... 详细信息

橡胶粒子是橡胶树乳管细胞中进行橡胶生物合成的一种特殊细胞器。参与橡胶生物合成的橡胶转移酶、橡胶延长因子等重要酶类和相关的蛋白质调控因子均定位于橡胶粒子的表面或镶嵌于橡胶粒子膜中。本研究在SDS-PAGE分离橡胶粒子膜蛋白的基础上,使用pH3￣10非线性IPG胶条进行2-DE双向电泳,成功地分离了橡胶粒子膜蛋白,在2-DE银染胶上共得到约520个蛋白质点,并通过基质辅助激光解吸附飞行质谱(MALDI-TOF)对部分蛋白质点进行了初步分析鉴定。检索蛋白质数据库证明其中的蛋白质点包括橡胶延长因子(REF)和橡胶过敏蛋白Hev3等典型的橡胶粒子膜蛋白,另外还有一些功能未知的蛋白质。从银染2-DE胶上可以看出,REF在橡胶粒子膜蛋白中占有很大的比例,这表明REF在橡胶生物合成中可能具有非常重要的作用。通过比较蛋白质组学研究发现,橡胶粒子膜上存在乙烯和茉莉酸信号响应蛋白。乙烯和茉莉酸对橡胶生物合成的调控作用可能与橡胶粒子膜上存在它们的响应蛋白有关。橡胶粒子膜蛋白2-DE双向电泳体系的建立为全面研究橡胶粒子膜蛋白的组成及其变化奠定了基础。

关键词：橡胶树橡胶粒子膜蛋白双向电泳质谱分析