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人脐带间充质干细胞来源外泌体对Treg和TH17细胞的调节作用

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中国实验血液学杂志 2019年第1期27卷 221-226页

作者：郭礼妍赖沛龙耿素霞陈晓梅王玉连黄恬杜欣翁建宇华南理工大学医学院广东广州510006 广东省人民医院广东省医学科学院广东省老年医学研究所广东广州510000

目的:探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体对Treg和TH17细胞的影响。方法:应用超高速离心法获取脐带间充质干细胞培养上清来源的外泌体,通过电子显微镜检、Nanosight和Western blot方法对外泌体形态、粒径和所含蛋白进行鉴定。在外周血单... 详细信息

目的:探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体对Treg和TH17细胞的影响。方法:应用超高速离心法获取脐带间充质干细胞培养上清来源的外泌体,通过电子显微镜检、Nanosight和Western blot方法对外泌体形态、粒径和所含蛋白进行鉴定。在外周血单个核细胞(PBMC)的培养体系中,以外泌体共培养为实验组,PBS组为对照组,应用流式细胞术检测实验组与对照组Treg及TH17细胞比例。结果:人脐带间充质干细胞来源的外泌体在电子显微镜下呈杯状圆盘形,平均粒径142 nm,表达外泌体标志性蛋白CD9及CD63。流式细胞术结果显示,外泌体组Treg(CD4^+CD25^+Foxp3^+)细胞比例明显高于无外泌体组(5.30±0.13%vs 3.38±0.09%)(P<0.001),而外泌体组TH17(CD4^+IL17A^+)细胞比例明显低于无外泌体组(7.78±0.31%vs 11.33±0.24%)(P<0.001)。结论:人脐带间充质干细胞来源的外泌体能通过上调Treg和下调TH17参与免疫调节,提示有望成为新的"非细胞"免疫调节制剂。

关键词：人脐带间充质干细胞外泌体免疫调节调节性T细胞 Th17细胞

CD133在骨髓增生异常综合征患者中的表达及临床意义

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南方医科大学学报 2011年第5期31卷 854-855,863页

作者：钟立业杜欣耿素霞翁建宇郑海涛吴穗晶李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 广东省医学科学院/广东省人民医院血液科广东广州510080

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中CD133的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪采用直接免疫荧光标记法,分别测定31例难治性贫血伴幼稚细胞增多(RAEB)、10例难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)以及11例再生障碍性贫血患... 详细信息

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中CD133的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪采用直接免疫荧光标记法,分别测定31例难治性贫血伴幼稚细胞增多(RAEB)、10例难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)以及11例再生障碍性贫血患者骨髓中CD133+细胞和CD34+/CD38-细胞比例,对比分析CD133及CD34/CD38在不同亚型MDS中的表达及临床意义。结果在RAEB型MDS患者骨髓有核细胞中,CD133阳性细胞平均占6.75%,RCMD患者平均占1.41%,而再生障碍性贫血对照组占2.70%,RAEB组显著高于其他两组(P0.05);CD34+/CD38-细胞比例在3组中均小于1%,统计学上无显著性差异(P>0.05)。结论 CD133在MDS的进展类型RAEB患者骨髓细胞中高表达,CD133有助于RAEB分型诊断;而CD34+/CD38-标记在MDS分型诊断中并无价值。

关键词：骨髓增生异常综合征 CD133 流式细胞术

异基因造血干细胞移植后慢性粒细胞白血病患者bcr-abl融合基因水平的动态变化

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第38期12卷 7407-7411页

作者：耿素霞杜欣翁建宇陆泽生郭荣陈志红广东省人民医院血液科广东省广州市510080 广东省人民医院医学研究中心广东省广州市510080

背景:bcr-abl融合基因不仅是慢性粒细胞白血病的诊断标准,其水平的变化也是判断病情或疗效的惟一指标,尤其是bcr-abl融合基因的动态变化对于异基因造血干细胞移植效果的评估和预后判断可能更为重要。目的:了解慢性粒细胞白血病患者异基... 详细信息

背景:bcr-abl融合基因不仅是慢性粒细胞白血病的诊断标准,其水平的变化也是判断病情或疗效的惟一指标,尤其是bcr-abl融合基因的动态变化对于异基因造血干细胞移植效果的评估和预后判断可能更为重要。目的:了解慢性粒细胞白血病患者异基因造血干细胞移植后bcr-abl融合基因水平的变化情况。设计:回顾性病例分析。对象:2001-04/2007-01在广东省人民医院血液科收治的确诊1年内行异基因造血干细胞移植的慢性粒细胞白血病患者22例,中位年龄31.5岁,患者对治疗均签署知情同意书,治疗方案经医院医学伦理委员会批准。方法:所有同胞供者均采用粒细胞集落刺激因子行外周血干细胞动员。所有患者均采用改良BU/CY联合FLU预处理方案,供受者血型不相合者于移植前7d、1d行血浆置换以降低血型抗体滴度。患者经深静脉输入同胞供者平均单个核细胞数为5.48×108/kg,平均CD34+细胞数为10.45×106/kg。由于移植和随访时间不同,每例患者收集标本3～14份,共130份外周血标本。主要观察指标:通过实时荧光定量PCR法检测22例患者异基因造血干细胞移植后不同时间130份外周血标本中bcr-abl融合基因的水平。结果:移植后6个月内,bcr-abl融合基因总体水平逐渐降低,移植后1、3、6个月bcr-abl阴性患者的比例分别为33.33%、53.33%和84.62%,bcr-abl高水平阳性(bcr-abl/abl≥0.02%)患者的比例分别为58.33%、33.33%和15.38%,低水平阳性(bcr-abl/abl<0.02%)患者的比例分别为8.33%、13.33%和0。移植6个月后,多数患者连续多次检测不到bcr-abl融合基因,其中持续阴性者9例(69.23%),低水平波动者1例(7.69%),低水平持续阳性者1例(7.69%),复发2例(15.38%);复发的2例患者移植后6个月内连续检测bcr-abl融合基因水平均未降低至0,且3次检测结果中2次属于高水平阳性。结论:异基因造血干细胞移植后,慢性粒细胞白血病患者bcr-abl融合基因总体水平逐渐下降,但不同患者bcr-abl变化情况各异,通过实时定量PCR检测可明确其变化趋势。

关键词：异基因造血干细胞移植 bcr—abl融合基因慢性粒细胞白血病 PCR

地西他滨治疗骨髓增生异常综合征的临床疗效及P15甲基化变化研究

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中国实用内科杂志 2015年第6期35卷 531-533页

作者：邓程新吴萍翁建宇王玉春耿素霞陆泽生廖鹏军邹小立杜欣广东省人民医院(广东省医学科学院)血液内科广州510080

目的分析地西他滨治疗骨髓增生异常综合征（MDS）患者的临床疗效与不良反应,并探讨治疗后P15基因的甲基化水平变化。方法对广东省人民医院血液科2009年11月至2012年3月接受地西他滨治疗的31例MDS患者[难治性血细胞减少伴多系病态造血（R... 详细信息

目的分析地西他滨治疗骨髓增生异常综合征（MDS）患者的临床疗效与不良反应,并探讨治疗后P15基因的甲基化水平变化。方法对广东省人民医院血液科2009年11月至2012年3月接受地西他滨治疗的31例MDS患者[难治性血细胞减少伴多系病态造血（RCMD）9例,难治性贫血伴有原始细胞增多I（RAEB-Ⅰ）11例,RAEB-Ⅱ7例,慢性粒单核细胞白血病（CMML）4例]进行回顾性分析,其中28例接受5 d方案,3例接受3 d方案。从中抽取7例RAEB-Ⅰ及RAEB-Ⅱ患者,使用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）连续监测其P15基因甲基化水平的变化。结果在可评估的28例患者中,完全缓解（CR）3例,骨髓完全缓解伴血液学改善（m CR＋HI）5例,骨髓完全缓解（m CR）7例,单纯血液学改善（HI）3例,疾病稳定（SD）9例,疾病进展1例,CR率10.7%,总有效率（CR＋m CR＋HI）64.3%,2年生存率为46.4%。经地西他滨治疗后,患者P15基因明显降低,且用药后第1周下降幅度最大,达20%~60%。结论地西他滨治疗MDS患者具有一定疗效,不良事件具有可控性,且治疗后P15基因明显下降。

关键词：地西他滨骨髓增生异常综合征甲基化 P15基因

不同分级的慢性移植物抗宿主病与B淋巴细胞相关性的临床研究

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临床荟萃 2008年第12期23卷 849-851页

作者：邢海洲杜欣翁建宇陆泽生耿素霞广东省人民医院血液科广东广州510080

目的探讨不同分级慢性移植物抗宿主病(cGVHD)与B细胞分布特征关系,以期寻求其早期诊断及预后的实验室依据。方法回顾性研究2002年以来,资料完整的61例cGVHD患者的临床资料及免疫细胞流式细胞仪细胞表型结果;分析不同分级状态下,cGVHD患... 详细信息

目的探讨不同分级慢性移植物抗宿主病(cGVHD)与B细胞分布特征关系,以期寻求其早期诊断及预后的实验室依据。方法回顾性研究2002年以来,资料完整的61例cGVHD患者的临床资料及免疫细胞流式细胞仪细胞表型结果;分析不同分级状态下,cGVHD患者B淋巴细胞比例的动态变化。cGVHD分级标准依据2005年,国际健康发展计划协会提出了cGVHD的分级评价标准。结果B淋巴细胞在不同分级cGVHD组间差异明显,造血重建组与不同分级状态下cGVHD组间有统计学意义,造血重建初期、无cGVHD发生、轻度、中度和重度时分别为(2.14±0.97)%、(8.49±2.25)%、(12.08±3.32)%、(13.45±2.64)%、(16.14±5.88)%,P=0.002。结论不同分级cGVHD状态下,B淋巴细胞表现出不同的分布趋势;通过对不同分级cGVHD患者B淋巴细胞亚群的分析,为B细胞在cGVHD发生机制中的作用提供了证据。并可能通过临床监测B淋巴细胞群变化为临床判定cGVHD分级及其预后提供实验依据。

关键词：移植物抗宿主病 B淋巴细胞体征和症状

治疗前中性粒细胞与淋巴细胞比值对AML患者诱导治疗后完全缓解所需时间的影响

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山东医药 2017年第15期57卷 66-68页

作者：庞艳彬范丽霞化罗明赵松颖杜欣耿素霞罗建民河北大学附属医院河北保定071000 广东省人民医院/广东省医学科学院河北医科大学第二医院

目的观察治疗前中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对非高白细胞急性髓系白血病(AML)患者诱导治疗后完全缓解(CR)所需时间的影响。方法 AML患者87例,根据治疗前NLR将患者分为低NLR组(NLR0.05)。KaplanMeier法分析显示高NLR组的AML患者CR所... 详细信息

目的观察治疗前中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)对非高白细胞急性髓系白血病(AML)患者诱导治疗后完全缓解(CR)所需时间的影响。方法 AML患者87例,根据治疗前NLR将患者分为低NLR组(NLR0.05)。KaplanMeier法分析显示高NLR组的AML患者CR所需时间较低NLR组延长(P<0.05)。结论治疗前NLR≥2的AML患者诱导治疗后CR所需时间较NLR<2者长,治疗前NLR可能影响AML患者的治疗反应。

关键词：急性白血病中性粒细胞淋巴细胞完全缓解率

异基因造血干细胞移植患者FOXP3 mRNA表达与移植物抗宿主病发生的关系

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第14期13卷 2631-2635页

作者：杜欣耿素霞翁建宇陆泽生吴穗晶林秋雄广东省人民医院血液科广东省广州市510080 广东省人民医院医学研究中心广东省广州市510080

背景:转录因子FOXP3是调节性T细胞的特异性标志,对于造血干细胞移植后移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达水平的关系目前仍存在争议。目的:观察异基因造血干细胞移植后患者外周血FOXP3mRNA的表达,初步探讨利用FOXP3mRNA表达水平的变化进... 详细信息

背景:转录因子FOXP3是调节性T细胞的特异性标志,对于造血干细胞移植后移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达水平的关系目前仍存在争议。目的:观察异基因造血干细胞移植后患者外周血FOXP3mRNA的表达,初步探讨利用FOXP3mRNA表达水平的变化进行临床早期诊断移植物抗宿主病的可能性。设计:回顾性病例分析。对象:选取2001-03/2007-06在广东省人民医院血液科行异基因造血干细胞移植的白血病患者31例,男18例,女13例,平均年龄32岁。方法:所有患者均采用改良BU/CY联合FLU方案进行预处理,经深静脉输入单个核细胞数5.48(3.7～8.4)×108/kg,CD34+细胞数10.45(3.6～28.0)×106/kg。移植后出现移植物抗宿主病的患者在治疗前、治疗好转或缓解时留取外周血标本,尚无移植物抗宿主病的患者复查时采集外周血标本。主要观察指标:采用实时定量PCR技术监测外周血样本FOXP3mRNA表达及其与患者移植物抗宿主病的发生情况。结果:31例患者行异基因造血干细胞移植后,9例未出现移植物抗宿主病,9例发生急性移植物抗宿主病,13例出现慢性移植物抗宿主病。FOXP3表达水平的变化与急性移植物抗宿主病的临床演变相关,急性移植物抗宿主病发生时FOXP3水平较临床无移植物抗宿主病时明显降低(P=0.009),好转后FOXP3水平又逐步升高或恢复到基础水平;慢性移植物抗宿主病患者FOXP3的表达水平与无移植物抗宿主病患者相比无明显差异(P=0.107)。结论:急性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达降低有关,动态检测FOXP3mRNA表达水平的变化有可能为临床早期诊断急性移植物抗宿主病或预测其发生提供参考。实验数据未发现慢性移植物抗宿主病的发生与FOXP3表达有关。

关键词：转录因子FOXP3 移植物抗宿主病 PCR

青蒿琥酯调控Thl7/Treg平衡抑制慢性移植物抗宿主病的实验研究

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中华血液学杂志 2019年第1期40卷 63-68页

作者：陈晓梅翁建宇赖沛龙王玉连黄欣耿素霞郭礼妍黄恬曾令基杜欣广东省人民医院(广东省医学科学院)血液科、广东省老年医学研究所广州510080

目的探讨青蒿琥酯抗慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的作用及可能机制。方法将B10D2小鼠的骨髓细胞和脾脏细胞混合悬液通过尾静脉输入近交系雌性BALB/c小鼠体内建立cGVHD模型,分别予青蒿琥酯(实验组)和丙酮腹腔(对照组)注射治疗。观察两组小... 详细信息

目的探讨青蒿琥酯抗慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的作用及可能机制。方法将B10D2小鼠的骨髓细胞和脾脏细胞混合悬液通过尾静脉输入近交系雌性BALB/c小鼠体内建立cGVHD模型,分别予青蒿琥酯(实验组)和丙酮腹腔(对照组)注射治疗。观察两组小鼠的cGVHD临床表现、生存时间和组织病理学改变;应用流式细胞术分析小鼠外周血和脾脏Th17和Treg细胞比例;免疫磁珠分选BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞,分别予丙酮和青蒿琥酯进行干预72 h,流式细胞术分析两组Th17/Treg细胞比例。结果①实验组小鼠cGVHD临床症状较对照组明显减轻,生存时间延长[(55.71±6.99)d对(46.57±7.83)d,χ^2=5.457,P=0.020]。②实验组小鼠皮肤及肺脏cGVHD病理损伤较轻。③与对照组比较,实验组小鼠外周血、脾脏Th17细胞比例均降低[(0.58±0.19)%对(1.51±0.18)%,t=7.233,P<0.001;(0.71±0.18)%对(1.48±0.38)%,t=3.653,P=0.011],Treg细胞比例增高[(8.40±0.23)%对(4.45±0.04)%,t=15.680,P<0.001;(10.48±0.48)%对(6.62±0.24)%,t=6.590,P=0.003],Th17/Treg细胞比值均下降(0.09±0.03对0.34±0.05,t=7.621,P=0.002;0.06±0.02对0.19±0.03,t=6.993,P=0.002)。④体外培养小鼠脾脏CD4+T细胞,青蒿琥酯干预组较对照组Th17细胞比例减低[(0.82±0.37)%对(3.39±1.22)%,t=4.044,P=0.007],Treg细胞比例明显增高[(34.63±1.29)%对(14.28±1.69)%,t=19.119,P<0.001],Th17/Treg细胞比值下降(0.24±0.09对0.02±0.01,t=4.780,P=0.003)。结论青蒿琥酯可通过减少Th17细胞及增加Treg细胞,恢复Th17/Treg平衡,减轻cGVHD的临床与病理学损伤,从而发挥抗cGVHD作用。

关键词：青蒿琥酯 Th17细胞调节性T细胞 Th17/Treg平衡慢性移植物抗宿主病

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B淋巴细胞肿瘤患者胸腺近期输出功能情况

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