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自噬在板层小体形成中作用的初步探讨

自噬在板层小体形成中作用的初步探讨

作者：耿清伟安徽医科大学

学位级别：硕士

背景皮肤渗透性屏障位于表皮角质层,主要作用是防止水份和电解质丢失。板层小体(LB)存在于表皮棘层上部及颗粒层的角质形成细胞(KC)内,在维持皮肤渗透屏障稳定性中具有重要作用,其缺失或功能紊乱将导致一系列皮肤屏障损伤性皮肤病,如... 详细信息

背景皮肤渗透性屏障位于表皮角质层,主要作用是防止水份和电解质丢失。板层小体(LB)存在于表皮棘层上部及颗粒层的角质形成细胞(KC)内,在维持皮肤渗透屏障稳定性中具有重要作用,其缺失或功能紊乱将导致一系列皮肤屏障损伤性皮肤病,如银屑病、鱼鳞病等。但LB的具体来源尚不明确。近年来研究显示自噬可能参与LB的形成。窄谱中波紫外线(NB-UVB)照射是治疗银屑病的有效方法,且紫外线照射可诱导自噬。因此,我们推测自噬可能在LB形成中具有重要作用。目的研究自噬在LB形成中的作用,从而为皮肤屏障损伤相关皮肤病提供新的治疗方向。方法首先使用自噬诱导剂雷帕霉素50nmol/L分别处理人永生化角质形成细胞株HaCaT 0h、12h、24h和48h,用Western blot检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、支架蛋白P62(P62)、Rab11a四种自噬相关蛋白表达变化情况,用透射电镜(TEM)观察LB数量及直径大小变化情况。接着使用自噬抑制剂巴弗洛霉素A1 100nmol/L分别处理HaCaT细胞0h、12h、24h和48h后,用Western blot检测自噬相关蛋白mTOR、LC3、P62、Rab11a的变化情况,用TEM观察LB数量及直径大小变化情况。结果 50nmol/L雷帕霉素处理HaCaT细胞后,Western blot结果显示:与0h对照组相比,12h、24h、48h时LC3-II/I的表达显著性增加(t=22.87、34.03、10.13,P0.05)。TEM结果显示:与0h对照组相比,48h时LB数量显著性增加(q=10.00,P0.05)。100nmol/L巴弗洛霉素A1处理HaCaT细胞后,Wetern blot结果显示:与0h对照组相比,12h、24h、48h时LC3-II/I的表达显著性减少(t=18.91、24.86、25.68,P0.05)。TEM结果显示:与0h对照组相比,48h时LB数量显著性减少(q=5.00,P<0.05);12h、24h时LB直径显著性减小(t=2.09、2.26,P<0.05)。结论自噬信号可能参与LB形成过程的调节,当自噬信号增强时LB数量增加;当自噬信号减弱时LB形成受抑制,数量减少及直径变小。LB可能是在自噬溶酶体出现时或降解后形成。

关键词：自噬板层小体皮肤屏障

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板层小体在皮肤渗透屏障形成中的作用

中华皮肤科杂志 2018年第2期51卷 163-165页

作者：耿清伟宋秀祖安徽医科大学杭州临床学院皮肤科杭州310009

表皮内板层小体（1amellarbodies，LB）是位于棘层上部和颗粒层细胞内的椭圆形囊泡或泡管状分泌性细胞器，直径100～300nm。LB在角质形成细胞分化时形成，最早出现于表皮棘层上部，到达颗粒层后数量不断增加，在维持皮肤屏障稳态方面具... 详细信息

表皮内板层小体（1amellarbodies，LB）是位于棘层上部和颗粒层细胞内的椭圆形囊泡或泡管状分泌性细胞器，直径100～300nm。LB在角质形成细胞分化时形成，最早出现于表皮棘层上部，到达颗粒层后数量不断增加，在维持皮肤屏障稳态方面具有重要作用。LB还可以存在于皮肤外器官的细胞中，如肺、胃、支气管、口腔等，具有脂质储存和分泌的功能，又被命名为板层颗粒、多LB、被膜颗粒、Odland小体等.

关键词：板层小体皮肤渗透皮肤屏障细胞分化角质形成被膜颗粒表皮内细胞器

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皮肤上皮样血管瘤22例临床病理分析

中华皮肤科杂志 2018年第6期51卷 459-462页

作者：耿清伟王敏宋秀祖安徽医科大学杭州临床学院皮肤科杭州310009

目的探讨皮肤上皮样血管瘤的临床表现与组织病理学特征。方法回顾分析22例上皮样血管瘤患者的临床和病理资料。结果22例上皮样血管瘤患者中，男10例，女12例；发病年龄16～62岁，平均45．91岁；病程1个月至20年，平均37个月。皮损位于头... 详细信息

目的探讨皮肤上皮样血管瘤的临床表现与组织病理学特征。方法回顾分析22例上皮样血管瘤患者的临床和病理资料。结果22例上皮样血管瘤患者中，男10例，女12例；发病年龄16～62岁，平均45．91岁；病程1个月至20年，平均37个月。皮损位于头部14例（63．6％），耳部6例（27．3％），额部2例（9．1％），大腿部1例（4．5％），其中1例同时累及头皮及额部。组织病理学检查：22例均表现为血管增生，内衬上皮样内皮细胞，管周大量淋巴细胞及嗜酸性粒细胞浸润。所有皮损均累及真皮层，另外皮下组织受累8例（36．4％）。6例免疫组化显示，血管壁CD31、CD34、Ⅷ因子均为阳性。结论上皮样血管瘤是一种少见的以血管增生和炎症浸润为主要特征的皮肤疾病，需要临床结合组织病理检查进行诊断。

关键词：嗜酸粒细胞增多性血管淋巴样增生 Kimura病上皮样血管瘤

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自噬在板层小体形成中的作用

自噬在板层小体形成中的作用

2019全国中西医结合皮肤性病学术年会

作者：耿清伟杭州市第三人民医院皮肤科

板层小体在维持皮肤渗透性屏障的稳定性中起着至关重要的作用,其缺失或功能障碍可导致多种脂质代谢紊乱性皮肤病的发生,包括银屑病、鱼鳞病等。然而,板层小体的确切来源目前还尚不明确。最近研究表明,自噬可能参与板层小体的形成。为了...

板层小体在维持皮肤渗透性屏障的稳定性中起着至关重要的作用,其缺失或功能障碍可导致多种脂质代谢紊乱性皮肤病的发生,包括银屑病、鱼鳞病等。然而,板层小体的确切来源目前还尚不明确。最近研究表明,自噬可能参与板层小体的形成。为了进一步研究自噬在角质形成细胞中形成中的作用。我们分别用自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂巴弗洛霉素A1孵育HaCaT细胞,通过Western blot检测自噬流变化情况,并通过透射电镜观察板层小体的形成。我们发现雷帕霉素处理48h后,自噬上游信号的表达上调,面板层小体的数量显著增加(P<0.05);而巴弗洛霉素A1处理48h后,自噬下游信号的表达下调,面板层小体的数量显著减少(P<0.05)。我们的研究表明,自噬可能在角质形成细胞内板层小体的形成中具有重要作用。

关键词：

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泛发型环状肉芽肿一例

泛发型环状肉芽肿一例

2019全国中西医结合皮肤性病学术年会

作者：耿清伟宋秀祖杭州市第三人民医院皮肤科

报告1例泛发型环状肉芽肿患者的诊治过程并分析其临床特征和组织病理学特点,以提高临床医生的认识。

关键词：

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黑素核在黑素细胞转运与降解中的作用

黑素核在黑素细胞转运与降解中的作用

2019全国中西医结合皮肤性病学术年会

作者：耿清伟宋秀祖安徽医科大学杭州临床学院杭州市第三人民医院皮肤科

表皮内黑素细胞(melanocyte,MC)与邻近的角质形成细胞(keratinocyte,KC)组成表皮黑素单元。皮肤颜色取决于MC合成黑素的能力,黑素转运到KC的效率,黑素在KC内降解的速率。近年来黑素转运及降解在皮肤颜色中的作用越来越受到重视。既往研...

表皮内黑素细胞(melanocyte,MC)与邻近的角质形成细胞(keratinocyte,KC)组成表皮黑素单元。皮肤颜色取决于MC合成黑素的能力,黑素转运到KC的效率,黑素在KC内降解的速率。近年来黑素转运及降解在皮肤颜色中的作用越来越受到重视。既往研究认为黑素小体(melanosome)是黑素转运与降解的主要形式,新近研究发现的黑素核(melanin core或melanocore)胞吐-胞吞转运途径,以及转运后在KC内的

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泛发型环状肉芽肿一例

泛发型环状肉芽肿一例

2018全国中西医结合皮肤性病学术年会

作者：耿清伟宋秀祖安徽医科大学杭州临床学院皮肤科

患者男,36岁。躯干部皮肤丘疹伴痒2年余,累及全身半年。患者2年余前无明显诱因下,背部出现散在大小不等的丘疹,自诉部分丘疹出现"脓疱",挤压可见黏液样物质,脓疱干涸后中央出现脐凹。自觉瘙痒,遇热、出汗后瘙痒可加重。半年前类似皮疹...

患者男,36岁。躯干部皮肤丘疹伴痒2年余,累及全身半年。患者2年余前无明显诱因下,背部出现散在大小不等的丘疹,自诉部分丘疹出现"脓疱",挤压可见黏液样物质,脓疱干涸后中央出现脐凹。自觉瘙痒,遇热、出汗后瘙痒可加重。半年前类似皮疹逐渐增多,累及面部、颈部及四肢。患者曾至多家医院就诊,予以抗过敏药物等治疗,症状缓解不明显。为明确诊断,于我院门诊就诊。患者从事水产养殖业,既往体健,家族中无类似患者。体检:一般情况可,系统检查未见明显异常。皮肤科检查:颈部、躯干和四肢对称分布的弥漫性米粒至黄豆大小暗红色丘疹,部分丘疹中央可见脐凹,表面带有光泽,部分丘疹上可见痂皮;背部皮疹部分融合成钱币大小的环状斑块,颈部可见水肿型红斑。实验室检查:血常规,肝、肾功能,血脂及血糖均正常,乙肝、HⅣ、梅毒检测等均阴性。背部皮损组织病理学检查:表皮轻度肥厚,偶可见穿通到表皮的胶原物质;真皮浅层可见淋巴细胞、组织细胞形成的栅栏状肉芽肿,部分肉芽肿中间可见胶原坏死及粘蛋白沉积,散在较多多核巨细胞。结合临床病史、皮损特点及组织病理结果,诊断为泛发型环状肉芽肿。予硫酸羟氯喹片0.2g,每日2次,复方甘草酸苷片50mg,每日3次,治疗3月后皮损较前减轻,目前仍在随访中。

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窄谱中波紫外线对体外培养人黑素细胞自噬水平的影响

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中华皮肤科杂志 2018年第9期51卷 665-669页

作者：王敏耿清伟高亚丽华优宋秀祖安徽医科大学杭州临床学院杭州市第三人民医院皮肤科杭州 310009

目的观察窄谱中波紫外线（NB—UVB）照射对黑素细胞自噬水平的影响，探讨NB—uVB治疗白癜风的可能机制。方法体外培养正常人黑素细胞给予单次0（对照组）、50、100和200mJ／cm^2NB—UVB照射，照射后24h收集细胞，单丹酰戊二胺染色法（MD... 详细信息

目的观察窄谱中波紫外线（NB—UVB）照射对黑素细胞自噬水平的影响，探讨NB—uVB治疗白癜风的可能机制。方法体外培养正常人黑素细胞给予单次0（对照组）、50、100和200mJ／cm^2NB—UVB照射，照射后24h收集细胞，单丹酰戊二胺染色法（MDc）检测细胞自噬体变化，免疫印迹法检测自噬信号磷酸化磷酸腺苷蛋白激酶（p-AMPK）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、微管相关蛋白轻链3Ⅱ／I（Lc3Ⅱ／I）及P62表达变化，透射电镜观察自噬体与黑素小体超微结构变化。免疫印迹结果采用单因素方差分析进行比较，黑素小体、自噬体与自噬溶酶体数量采用Kmskal-wallis日检验进行统计分析。结果MDc染色显示，对照组、50、100和200mJ／cm^***组自噬体染色阳性率分别为（21．83±3．50）、（23．66±4．12）、（38．08±4．10）、（40．23±1．45）％，100、200mJ／cm^2组显著高于对照组和50mJ/cm^2 NB—UVB组（均P〈0．05）。免疫印迹法显示，与对照组相比，100、200肌l／cm^2组p—AMPK、Lc3Ⅱ／I表达均显著上调（均P〈0．05），而p—mTOR及P62表达均显著下降（均P〈0．05）。透射电镜结果显示，与对照组自噬体与自噬溶酶体数量（1．88±1．18）相比，100、200mJ／cm^2组（5．12±1．13、5．25±1．04）均显著增多（P〈0．05）。50、100、200mJ／cm^2组黑素小体数量（39．12±9．42、57．38±7．11、59．75±15．15）均较对照组（18．50±4．18）显著增多（均P〈0．05）。结论NB—UVB照射不仅可以促进黑素小体生成，还可以激活黑素细胞的自噬信号通路，促进自噬体及自噬溶酶体的形成，推测其为白癜风的治疗机制之一。

关键词：黑素细胞白癜风自噬紫外线疗法黑素小体

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皮肤上皮样血管瘤22例临床病理分析

皮肤上皮样血管瘤22例临床病理分析

2019全国中西医结合皮肤性病学术年会

作者：耿清伟王敏宋秀祖安徽医科大学杭州临床学院皮肤科

目的探讨皮肤上皮样血管瘤的临床表现与组织病理学特征。方法回顾分析22例上皮样血管瘤患者的临床和病理资料。结果 22例上皮样血管瘤患者中,男10例,女12例;发病年龄16～62岁,平均45.91岁;病程1个月至20年,平均37个月。皮损位于头部14例...

目的探讨皮肤上皮样血管瘤的临床表现与组织病理学特征。方法回顾分析22例上皮样血管瘤患者的临床和病理资料。结果 22例上皮样血管瘤患者中,男10例,女12例;发病年龄16～62岁,平均45.91岁;病程1个月至20年,平均37个月。皮损位于头部14例(63.6%),耳部6例(27.3%),额部2例(9.1%),大腿部1例(45%),其中1例同时累及头皮及额部。组织病理学检查:22例均表现为血管增生,内衬上皮样内皮细胞,管周大量淋巴细胞及嗜酸性粒细胞浸润。所有皮损均累及真皮层,另外皮下组织受累8例(3.4%)。6例免疫组化显示,血管壁CD31、CD34、Ⅷ因子均为阳性。结论上皮样血管瘤是一种少见的以血管增生和炎症浸润为主要特征的皮肤疾病,需要临床结合组织病理检查进行诊断。

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