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酸枣仁提取物靶向调控促进骨骼增长的miRNA筛选

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中国组织工程研究 2022年第35期26卷 5658-5664页

作者：罗石任谢艳张丽殷娜河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南省洛阳市471002

背景:生长激素大部分在慢波睡眠期间分泌,而慢波睡眠启动和延长的一个决定因素是5-羟色胺。作者前期研究发现,酸枣仁提取物可以通过升高5-羟色胺1A受体的表达,使其与5-羟色胺结合,延长慢波睡眠,从而促进生长激素的分泌,促进骨骼增长。... 详细信息

背景:生长激素大部分在慢波睡眠期间分泌,而慢波睡眠启动和延长的一个决定因素是5-羟色胺。作者前期研究发现,酸枣仁提取物可以通过升高5-羟色胺1A受体的表达,使其与5-羟色胺结合,延长慢波睡眠,从而促进生长激素的分泌,促进骨骼增长。同时发现,酸枣仁提取物可以下调脑组织5-羟色胺2A受体的表达,会使5-羟色胺1A受体失去竞争抑制与5-羟色胺更好地结合,从而促进慢波睡眠的延长,促进生长激素的分泌,引发骨骼增长。目的:证明酸枣仁提取物可以通过降低5-羟色胺2A受体促进小鼠骨骼增长,并筛选由酸枣仁提取物调控靶向5-羟色胺2A受体促进骨骼增长的miRNA。方法:(1)昆明种小鼠分为空白对照组、酸枣仁提取物高、低剂量组、阳性对照组和5-羟色胺2A受体选择性抑制剂组(以下简称抑制剂组),每组10只。空白对照组小鼠每日灌胃去离子水,酸枣仁提取物高、低剂量组分别灌胃酸枣仁提取物混悬液0.16,0.32 mg/g,阳性对照组灌胃酸枣仁皂甙A标准品溶液,抑制剂组灌胃酸枣仁提取物水溶液0.32 mg/g,同时灌胃最后3 d每天侧脑室注射10μg M100907。灌胃后第25天观察药物对小鼠体长的影响,ELISA法观察药物对血清生长激素、脑组织5-羟色胺2A受体表达的影响。(2)SD大鼠分为空白对照组、酸枣仁提取物组、阳性对照组和5-羟色胺2A受体选择性抑制剂组(以下简称抑制剂组),于灌胃第3天开始,观察药物对慢波睡眠的影响。(3)然后用芯片法检测药物引起骨骼增长的小鼠与普通小鼠脑组织差异表达的miRNAs,并优选以5-羟色胺2A受体为靶基因的miRNA,同时进行qRT-PCR验证。结果与结论:(1)用药25 d后,高剂量组小鼠体长明显长于空白对照组(P<0.01);小鼠血清生长激素水平明显高于空白对照组和抑制剂组(P<0.01,P<0.01);酸枣仁提取物组脑组织5-羟色胺2A受体表达水平明显降低,低于抑制剂组(P<0.01);(2)酸枣仁提取物组和阳性对照组慢波睡眠期时长均大于空白对照组(P<0.01,P<0.01),也大于抑制剂组(P<0.05,P<0.05);药物对异相睡眠时期无影响;(3)符合筛选条件的差异表达miRNAs共16个,其中表达上调13个,表达下调3个;(4)经qRT-PCR验证调控5-羟色胺2A受体的为上调的miR-34a-5p;(5)提示酸枣仁提取物可以通过抑制5-羟色胺2A受体的表达延长慢波睡眠,从而促进生长激素分泌引起小鼠骨骼增长,其可能的机制为药物上调了miR-34a-5p的表达从而引起5-羟色胺2A受体的低表达。

关键词：酸枣仁提取物 5-羟色胺2A受体小鼠骨骼增长 miRNA 大鼠慢波睡眠

附子理中丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗2型糖尿病性腹泻(脾肾阳虚证)的效果及对胃肠道微生态、炎症指标的影响

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临床医学研究与实践 2023年第3期8卷 125-127页

作者：张宁罗石任中牟县人民医院内分泌科河南郑州451450 河南省骨科医院药剂科河南郑州450000

目的探讨附子理中丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗2型糖尿病性腹泻(脾肾阳虚证)的效果。方法选取2020年5月至2021年6月收治的80例2型糖尿病性腹泻(脾肾阳虚证)患者为研究对象,根据随机数字表法将其分为对照组与观察组,各40例。对照组接受... 详细信息

目的探讨附子理中丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗2型糖尿病性腹泻(脾肾阳虚证)的效果。方法选取2020年5月至2021年6月收治的80例2型糖尿病性腹泻(脾肾阳虚证)患者为研究对象,根据随机数字表法将其分为对照组与观察组,各40例。对照组接受常规降糖治疗加双歧杆菌四联活菌片,观察组在对照组基础上给予附子理中丸。比较两组的治疗效果。结果观察组的治疗总有效率为95.00%,高于对照组的75.00%(P<0.05)。治疗后,观察组的双歧杆菌、乳酸杆菌含量高于对照组,大肠杆菌、肠球菌含量低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-2(IL-2)、降钙素原(PCT)水平低于对照组(P<0.05)。结论附子理中丸联合双歧杆菌四联活菌片治疗2型糖尿病性腹泻(脾肾阳虚证)的效果满意,可调节胃肠道微生态,改善炎症指标,值得推广。

关键词：附子理中丸双歧杆菌四联活菌片 2型糖尿病性腹泻

基于数据挖掘《太平圣惠方》治疗骨痹用药规律研究

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中医学报 2022年第3期37卷 654-660页

作者：罗石任殷娜成鹏阁河南省洛阳正骨医院河南省骨科医院河南郑州450000

目的:挖掘分析《太平圣惠方》中治疗骨痹的组方规律。方法:选取《太平圣惠方》治疗痹证的医案复方,运用中医传承辅助平台(V2.5)构建数据库,对药物使用的频数、性味、归经等进行统计,分析其组方规律。结果:对315首治疗骨痹方进行频数分... 详细信息

目的:挖掘分析《太平圣惠方》中治疗骨痹的组方规律。方法:选取《太平圣惠方》治疗痹证的医案复方,运用中医传承辅助平台(V2.5)构建数据库,对药物使用的频数、性味、归经等进行统计,分析其组方规律。结果:对315首治疗骨痹方进行频数分析发现,性味以温性为主;五味以辛、甘、苦居多;主要归肝、心、脾等经;其中出现频数位于前3位的药物为当归、桂心和川芎;常用药对为当归、桂心,川芎、当归,川芎、桂心等;提取核心药物组合20个,衍生新处方10个。结论:《太平圣惠方》治疗骨痹的组方特色以补血、活血为主,常以活血通经、补火助阳、散寒止痛、祛风除湿为法。

关键词：骨痹《太平圣惠方》用药规律中医传承辅助平台数据挖掘

基于现代文献的药食同源中药在产后痹治疗中的应用研究

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光明中医 2022年第20期37卷 3649-3652页

作者：殷娜罗石任李冬冬张云芳谢艳河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院)临床药学研究室河南洛阳471002

目的探索治疗产后痹的药食同源中药的使用状况,为促进母婴用药安全提供参考。方法检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库,收集符合纳入标准的文献,筛选统计文献所记载的方剂中药食同源中药品种及使用频次,参照《... 详细信息

目的探索治疗产后痹的药食同源中药的使用状况,为促进母婴用药安全提供参考。方法检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库,收集符合纳入标准的文献,筛选统计文献所记载的方剂中药食同源中药品种及使用频次,参照《中药学》及2015版《中华人民共和国药典》对药物功效类别、性味、归经进行归类分析。结果共纳入173篇文献,含中药方剂197首,筛选出药食同源中药37味,用药频次在50%以上的依次为当归、黄芪、甘草、肉桂。药物功效以补虚为主,药性以平、温居多,药味以甘、辛多见,归经多入脾、肺经。结论药食同源中药在产后痹的治疗中应用广泛,可发挥益气养血、解表散寒、温经通络的作用,与产后痹的基本病机相符,可在用药治疗中为保障母婴安全提供参考。

关键词：药食同源中药产后痹

洛阳正骨传统方药活血灵汤的HPLC指纹图谱研究

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国医论坛 2022年第2期37卷 67-71页

作者：罗石任殷娜韩宇成鹏阁河南省洛阳正骨医院/河南省骨科医院河南郑州450000 河南省中医院河南郑州450000

目的:建立活血灵汤的HPLC指纹图谱评价体系,为活血灵汤的质量控制提供科学、合理的方法。方法:采用高效液相色谱法,以AgilentC18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm)为色谱柱;以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);检测波... 详细信息

目的:建立活血灵汤的HPLC指纹图谱评价体系,为活血灵汤的质量控制提供科学、合理的方法。方法:采用高效液相色谱法,以AgilentC18柱(4.6 mm×250 mm, 5μm)为色谱柱;以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);检测波长255 nm;柱温30℃;进样量20μL。对10批活血灵汤样品进行测定,以中药色谱指纹图谱相似度评价软件建立了活血灵汤的标准指纹谱,并进行相似度评价、对共有峰进行归属及确认。结果:10批活血灵汤HPLC指纹图谱相似度不低于0.98,共标定了20个共有峰,6个峰得到化学确认。结论:建立的HPLC指纹图谱方法稳定易行,重复性好,反映了活血灵汤中的成分,可作为活血灵汤的质量控制方法。

关键词：活血灵汤高效液相色谱法指纹图谱实验研究

平乐正骨活血灵汤的制备工艺优化及电导率用于汤剂的质量控制研究

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中国处方药 2022年第5期20卷 15-18页

作者：罗石任郑旭霞殷娜张虹河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院)药剂科郑州450000

目的优选活血灵汤的制备工艺,探索以电导率作为汤剂制备工艺评价与质量控制手段的可行性。方法采用正交试验设计,主要以有效组分阿魏酸、芍药苷的量和干浸膏得率为指标,全面考察活血灵汤的制备工艺,分别测定57个煎煮液的干浸膏得率与电... 详细信息

目的优选活血灵汤的制备工艺,探索以电导率作为汤剂制备工艺评价与质量控制手段的可行性。方法采用正交试验设计,主要以有效组分阿魏酸、芍药苷的量和干浸膏得率为指标,全面考察活血灵汤的制备工艺,分别测定57个煎煮液的干浸膏得率与电导率,分析其相关性。结果优选的活血灵汤制备工艺条件为取处方药材加8倍量水,提取3次,每次30 min;煎煮液的干浸膏得率与其电导率线性关系显著(P<0.01)。结论该方法操作简单,重复性好,可为批量代煎提供参考。采用电导率检测法可简便、快捷的反映出中药汤剂中的干浸膏得率,便于快速检测汤剂质量。

关键词：活血灵汤制备工艺电导率质量控制

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不同产地野菊花中微量元素含量的测定

中国药房 2016年第6期27卷 827-830页

作者：罗石任王丽果河南省洛阳正骨医院/河南省骨科医院郑州450000

目的：建立测定不同产地野菊花中微量元素含量的方法。方法：采用石墨炉原子吸收分光光度法（GFAAS）测定药材中铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）的含量;采用原子冷吸收分光光度法（HGAAS）测定药材中汞（Hg）的含量;采用火焰原子吸收分光... 详细信息

目的：建立测定不同产地野菊花中微量元素含量的方法。方法：采用石墨炉原子吸收分光光度法（GFAAS）测定药材中铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）的含量;采用原子冷吸收分光光度法（HGAAS）测定药材中汞（Hg）的含量;采用火焰原子吸收分光光度法（FAAS）测定药材中铜（Cu）、铁（Fe）、锰（Mn）、钙（Ca）、锰（Mg）、锌（Zn）的含量。结果：Pb、Cd、As、Hg、Cu、Fe、Mn、Ca、Mg、Zn检测质量浓度线性范围分别为0~50（r=0.999 9）、0~10（r=0.999 2）、0~50（r=0.999 0）、0~20（r=0.999 5）、0~5（r=0.999 3）、0~15（r=0.999 8）、0~2（r=0.999 9）、0~50（r=1.000 0）、0~20（r=0.999 9）、0~2μg/L（r=0.999 8）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈3%;加样回收率分别为94.25%~97.43%（RSD=1.07%）、94.97%~99.46%（RSD=1.68%）、96.25%~99.46%（RSD=1.09%）、96.61%~99.91%（RSD=1.26%）、94.11%~98.41%（RSD=1.68%）、93.11%~99.59%（RSD=2.73%）、93.11%~99.48%（RSD=2.63%）、93.01%~99.85%（RSD=2.49%）、95.13%~99.75%（RSD=1.58%）、94.08%~97.37%（RSD=1.18%）,n均为6。结论：该方法操作简便、稳定、重复性好,可用于不同产地野菊花中微量元素含量的测定。

关键词：野菊花微量元素原子吸收分光光度法石墨炉原子吸收分光光度法原子冷吸收分光光度法火焰原子吸收分光光度法

酸枣仁提取物靶向5-羟色胺1A受体影响骨骼增长的微小核糖核酸的筛选及功能验证

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中国中医骨伤科杂志 2023年第12期31卷 7-14页

作者：梁国辉王桂芝谢艳毛雯正罗石任张丽吴晓龙河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院) 河南洛阳471002

目的:筛选由酸枣仁提取物调控的靶向5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)影响骨骼增长的微小核糖核酸(miRNA),并阐明酸枣仁提取物通过该miRNA调控5-HT1AR影响骨骼增长的作用机制。方法:将大小鼠分别分为正常对照组、用药组、阳性对照组和五羟色胺1... 详细信息

目的:筛选由酸枣仁提取物调控的靶向5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)影响骨骼增长的微小核糖核酸(miRNA),并阐明酸枣仁提取物通过该miRNA调控5-HT1AR影响骨骼增长的作用机制。方法:将大小鼠分别分为正常对照组、用药组、阳性对照组和五羟色胺1A受体选择性抑制剂组,并用不同溶液灌胃。一段时间后观察药物对小鼠体长、血清生长激素和脑组织五羟色胺1A受体表达以及对大鼠慢波睡眠的影响。筛选骨骼增长的小鼠与普通小鼠脑组织差异表达miRNAs,优选以五羟色胺1A受体为靶基因的miRNA并进行qRT-PCR验证。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-200c-3p与5-HT1AR之间的调控关系,进而培养小鼠脑皮层细胞并鉴定。通过给予高剂量和低剂量药物和过表达及沉默miR-200c-3p,ELISA法观察5-HT1AR的表达,并通过qRT-PCR法观察给药后细胞内miR-200c-3p的表达。结果:用药组小鼠血清生长激素、体长及脑组织五羟色胺1A受体表达均高于其他组;慢波睡眠时长用药组与阳性对照组长于正常对照组和抑制剂组;药物对异相睡眠时期无影响;两个实验组有13个miRNAs表达上调,3个miRNAs表达下调;经qRT-PCR验证调控五羟色胺1A受体的为下调的miR-200c-3p,且双荧光素酶报告基因实验证明miR-200c-3p可以调控5-HT1AR表达。体外培养小鼠脑皮层细胞,过表达miR-200c-3p引起5-HT1AR表达下降,而沉默miR-200c-3p后则5-HT1AR表达升高,且药物对体外培养的脑皮层细胞中miR-200c-3p的表达有调控作用。结论:小鼠体内可能存在酸枣仁提取物,通过调控miR-200c-3p的表达上调五羟色胺1A受体的表达,延长慢波睡眠,进而促进生长激素的分泌,最终促进体长增长。

关键词：酸枣仁提取物五羟色胺1A受体小鼠骨骼增长微小核糖核酸筛选

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加味益气丸定性鉴别与含量测定

中国实验方剂学杂志 2013年第5期19卷 129-132页

作者：杜天信王秀真杜志谦李洁张毅罗石任河南正骨研究院河南洛阳471000 河南中医学院郑州450008

目的:提高加味益气丸的质量标准体系。方法:采用薄层色谱法对处方中当归、防己、陈皮进行定性鉴别研究;采用高效液相色谱法对柴胡皂苷a、d进行含量测定研究。结果:薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;柴胡皂苷a在0.050 4～0.352 6 g.L-1... 详细信息

目的:提高加味益气丸的质量标准体系。方法:采用薄层色谱法对处方中当归、防己、陈皮进行定性鉴别研究;采用高效液相色谱法对柴胡皂苷a、d进行含量测定研究。结果:薄层色谱斑点清晰,阴性对照无干扰;柴胡皂苷a在0.050 4～0.352 6 g.L-1线性关系良好(r=0.9997),平均回收率96.17%,RSD 0.18%。柴胡皂苷d在0.034 6～0.242 3 g.L-1线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率96.22%,RSD 0.16%。结论:建立的薄层色谱法和高效液相色谱法专属性强、准确度高、重复性好,可用于加味益气丸的的质量控制。

关键词：加味益气丸薄层色谱法高效液相色谱法柴胡皂苷