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柑橘溃疡病菌的分子鉴定及检测技术研究

柑橘溃疡病菌的分子鉴定及检测技术研究

作者：罗志萍华中农业大学

学位级别：硕士

柑橘溃疡病(Citrus Bacterial Canker Disease,CBCD)为一种由地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis ***,Xac)引起的细菌性病害，该病害对柑橘生产危害严重，世界许多国家将其列为重要检疫性病害。目前，国内外均十分重... 详细信息

柑橘溃疡病(Citrus Bacterial Canker Disease,CBCD)为一种由地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis ***,Xac)引起的细菌性病害，该病害对柑橘生产危害严重，世界许多国家将其列为重要检疫性病害。目前，国内外均十分重视该病原菌的鉴定和检疫检验技术研究，在包括分子生物学鉴定方法在内的多种快速检疫鉴定技术研究中取得重要进展。本研究对来源于湖北的一个表现柑橘溃疡病类似症状的柑橘样品上的病原菌进行了分子鉴定，并从生物学、PCR和免疫荧光技术3个方面对柑橘溃疡病菌的快速检测技术进行了研究，取得如下研究结果： 1．从表现类似柑橘溃疡病的柑橘干叶上共分离到形成4种不同菌落的细菌。分别对来源于南京的阳性对照菌株、病斑研磨液X及分离获得的4个菌进行PCR扩增，其中阳性对照菌株和病斑研磨液X均扩增出一条与预期大小一致的413bp的目标片段;而从分离到的X中扩增出大小为500—600bp的片段;从水稻白叶枯病菌、X、X和X中未扩增出任何片段。分别对以上扩增产物进行克隆和测序，结果表明，来源于南京(NJ-XC)的对照菌株和湖北病叶研磨液的克隆片段全长均为413个核苷酸，与Silva等(2002)报道的相应序列相似性分别为99％(411／413)和100％(413／413)。从分离菌X中扩增出的片段全长557 bp，GenBank Blast(nr)检索结果表明该片段与根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的一个片段高度相似，部分片段相似性为93％(484／515)。 2．用浓度为10 cfu／ml的柑橘溃疡病菌培养液针刺法接种7个柑橘品种离体叶片后，表现出不同的发病情况。其中福本、红肉脐、纽荷尔橙、墨西哥莱檬和枳壳发病均较快，症状明显，而粗柠檬和邓肯葡萄柚的症状表现不明显，仅出现了黄褐色坏死现象。 3．分别采用氯仿／异戊醇方法提取的DNA和蛋白酶K裂解液作模板进行PCR扩增，其中以提取的DNA作模板，从来自南京、四川和湖北的3个柑橘溃疡病菌株NJ-XAC、SC-XAC和HB-XAC中均扩增出了预期大小413bp的目标片段;直接用裂解液作模板在相同条件下进行PCR扩增，从NJ-XAC和SC-XAC中也扩出了目标片段，但其电泳条带相对较弱。 4．用浓度为1×10 cfu／ml的菌液经涂片、BSA封闭、抗体结合和荧光显微观察，结果显示，30℃下用BSA封闭2h，30℃下抗体结合1h，荧光抗体浓度为4ug/ml，室温放40min后镜检，就可以在荧光显微镜下清晰地观察到柑橘溃疡病菌菌体发出绿色荧光。

关键词：柑橘溃疡病菌 PCR 致病性试验免疫荧光柑橘

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柑橘溃疡病菌免疫荧光检测技术研究

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2006年第8期34卷 143-145页

作者：罗志萍洪霓湖北省出入境检验检疫局湖北武汉430022 华中农业大学植物科技学院湖北武汉430064

选取不同浓度的柑橘溃疡病菌SOB培养液,利用载玻片进行固定、封闭、抗体结合、免疫荧光标记及荧光强度检测,以探讨免疫荧光检测技术在柑橘溃疡病菌快速检测方面的应用。结果表明,30℃下用BSA封闭2h,30℃下抗体结合1 h,荧光抗体浓度为4μ... 详细信息

选取不同浓度的柑橘溃疡病菌SOB培养液,利用载玻片进行固定、封闭、抗体结合、免疫荧光标记及荧光强度检测,以探讨免疫荧光检测技术在柑橘溃疡病菌快速检测方面的应用。结果表明,30℃下用BSA封闭2h,30℃下抗体结合1 h,荧光抗体浓度为4μg/mL,室温放置40 m in后,在荧光显微镜下可以清楚看到绿色的柑橘溃疡病菌体。该方法操作简便,检测过程仅需4 h,抗原抗体反应特异性极强,检测灵敏度可达103cfu/mL。

关键词：柑橘溃疡病菌 IgG—FITC 免疫荧光检测植物检疫

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警示卡在护士静脉用药安全配置中的应用

护士进修杂志 2011年第23期26卷 2205-2206页

作者：罗志萍汪国丽浙江省丽水市中心医院浙江丽水323000

静脉用药是临床护理工作中基础的操作项目之一。随着新药层出不穷和大量应用于临床，特别是老年人、儿童用药剂量的特殊性、用药时间差异性及临床护士人员配置不足等原因，容易出现静脉用药配置护理缺陷。为切实提高静脉用药的安全性，... 详细信息

静脉用药是临床护理工作中基础的操作项目之一。随着新药层出不穷和大量应用于临床，特别是老年人、儿童用药剂量的特殊性、用药时间差异性及临床护士人员配置不足等原因，容易出现静脉用药配置护理缺陷。为切实提高静脉用药的安全性，减少护理缺陷，保障病人生命安全，我科从2010年1月起建立药物警示卡，对护士在静脉用药环节的操作进行针对性警示，以减少护理不良事件发生，提高用药正确率和及时性。

关键词：静脉用药用药警示卡护理

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湖南省农业外来有害生物现状调查与分析

植物检疫 2018年第6期32卷 73-80页

作者：蒋国辉罗志萍长沙海关湖南长沙423000

本研究采用文献调研、实地考察与专家咨询相结合的方式,调查了湖南省农林业生态系统中外来有害生物的种类及分类地位、起源、引入路径和危害影响等内容。查明我省共有农业外来有害生物233种,包括植物183种,动物26种,病原微生物24种;这... 详细信息

本研究采用文献调研、实地考察与专家咨询相结合的方式,调查了湖南省农林业生态系统中外来有害生物的种类及分类地位、起源、引入路径和危害影响等内容。查明我省共有农业外来有害生物233种,包括植物183种,动物26种,病原微生物24种;这些农业外来有害生物中,来自美洲的有142种,占总数的60.9%,来自亚洲的有38种,占总数的16.3%,来源于欧洲的28种,占总数的12.0%,来源于非洲的有17种,占总数的7.3%,来自大洋洲的有7种,占总数的3.0%,1种外来有害生物尚不清楚其来源。外来物种主要通过人为因素先传入我国,而后进一步扩散至湖南,因此我们既要加强省内各入境口岸的检疫工作,又要对人为引种进行严格的风险评估和后续管理工作。

关键词：农业外来有害生物现状调查分析

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湖北柑橘溃疡病菌的PCR鉴定及序列分析

湖北农业科学 2006年第5期45卷 542-545页

作者：罗志萍洪霓湖北出入境检验检疫局武汉430022 华中农业大学柑橘脱毒中心武汉430070

选用引物JYF5/JYR5对湖北疑似柑橘溃疡病标本进行了PCR鉴定和确证,同时改进了DNA抽提方法,优化了PCR条件,并与南京柑橘溃疡病菌株进行分子克隆比较。结果表明,南京菌株NJ-XC分离物扩增片段与Silva等报道的相应序列相似性为99%(411/413)... 详细信息

选用引物JYF5/JYR5对湖北疑似柑橘溃疡病标本进行了PCR鉴定和确证,同时改进了DNA抽提方法,优化了PCR条件,并与南京柑橘溃疡病菌株进行分子克隆比较。结果表明,南京菌株NJ-XC分离物扩增片段与Silva等报道的相应序列相似性为99%(411/413);湖北标本菌株HB-X0扩增片段与报道的相应序列相似性为100%(413/413),二者存在一定的差异。此外发现引物JYF5/JYR5能扩增叶表的根癌土壤杆菌,其片段大小为575bp。

关键词：柑橘溃疡病菌 PCR鉴定序列分析

农业“走出去”非洲粮食投资合作的机遇与挑战

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世界农业 2013年第11期 163-167,184页

作者：陈建东龚国祥罗志萍湖北出入境检验检疫局

本文阐述了非洲国家粮食生产、国际贸易及中非双边粮食贸易情况,通过分析非洲国家农业开发优惠政策、中非农业合作政策、对非投资风险及防范等,提出中国农业"走出去",在非洲进行粮食投资合作具有广阔的前景。

关键词：非洲农业粮食投资合作

VBA技术在出口蜂产品的TC族抗生素杯碟法检验数据处理中的应用

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计算机与应用化学 2006年第5期23卷 407-410页

作者：陈勇罗志萍郭明星西北农林科技大学信息工程学院陕西扬陵712100 湖北出入境检验检疫局技术中心湖北武汉430022

针对蜂产品的TC族抗生素检验原始数据手工处理中的难点,本文提出了利用VBA面向对象编程技术在Excel中进行数据分析处理,生成相关数据报表及图表的设计思想及关键技术,成功开发出“蜂产品的TC族抗生素检验数据处理系统”,为利用VBA技术... 详细信息

针对蜂产品的TC族抗生素检验原始数据手工处理中的难点,本文提出了利用VBA面向对象编程技术在Excel中进行数据分析处理,生成相关数据报表及图表的设计思想及关键技术,成功开发出“蜂产品的TC族抗生素检验数据处理系统”,为利用VBA技术提高该检验项目工作效率做了有益的尝试。

关键词： VBA技术 Excel TC族抗生素检验蜂产品

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桃缩叶病组织的光学和电子显微镜观察

西北农林科技大学学报（自然科学版） 1993年第S2期26卷 29-32,127-128页

作者：黄丽丽康振生罗志萍西北农业大学植保系陕西杨陵712100

光学显微镜和电子显微镜观察发现,感染桃缩叶病的碧桃叶片的厚度,细胞的层数和细胞的直径都大于健康叶片;感病叶片的栅栏组织随症状发展而消失;叶肉细胞内的叶绿体数明显减少,并且有的细胞内则无叶绿体,表现症状的叶肉均有菌丝的分布。... 详细信息

光学显微镜和电子显微镜观察发现,感染桃缩叶病的碧桃叶片的厚度,细胞的层数和细胞的直径都大于健康叶片;感病叶片的栅栏组织随症状发展而消失;叶肉细胞内的叶绿体数明显减少,并且有的细胞内则无叶绿体,表现症状的叶肉均有菌丝的分布。以上结果表明桃缩叶病引起的畸形主要是由于叶肉细胞不规律增殖造成,叶绿体的减少消失是病叶失绿的直接原因,这些病变都与菌丝的扩展密切相关。

关键词：桃缩叶病碧桃细胞增殖叶片畸形

护理人员评价指标体系在骨科护理管理工作中的应用

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中医药管理杂志 2015年第3期23卷 121-123页

作者：罗志萍丽水市中心医院骨科浙江丽水313000

目的:研究护理人员评价指标体系在骨科护理管理工作中的应用效果。方法:根据骨科护理特点,结合护理人员评价指标体系,制定骨科护理人员绩效考核制度,通过对护理能级、工作质量以及工作量的考核来进行护理人员的绩效评定,该评价体系自201... 详细信息

目的:研究护理人员评价指标体系在骨科护理管理工作中的应用效果。方法:根据骨科护理特点,结合护理人员评价指标体系,制定骨科护理人员绩效考核制度,通过对护理能级、工作质量以及工作量的考核来进行护理人员的绩效评定,该评价体系自2013年1月开始实施,以实施前的2012年作为对比,观察护理人员和患者的满意度。结果:从调查结果来看,实施后护士满意度和患者满意度分别为91.67%和98.73%,显著高于实施前的66.67%和79.37%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:护理人员评价指标体系具有较高的应用价值,借鉴其中的观点,根据骨科护理特点,制定护理绩效考核制度能够有效的提高护理人员的工作积极性和满意度,同时有效的提高了护理质量。

关键词：骨科护理管理绩效考核