检索结果-南通市图书馆

应用DGGE技术研究熏制鳗鱼在低温贮藏过程中的微生物动态变化

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食品科技 2014年第3期39卷 80-85页

作者：尹伟力刘宁耿金培杨丽君段效辉粟智平烟台出入境检验检疫局烟台264000

为延长水产品货架期,利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法,研究了熏制鳗鱼在低温贮藏条件下主要微生物的动态变化。提取鱼肉中微生物核酸,进行降落PCR扩增,得到多种微生物特异性保守核酸序列。利用变性梯度凝胶电泳分析扩增出的微生物核酸... 详细信息

为延长水产品货架期,利用变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法,研究了熏制鳗鱼在低温贮藏条件下主要微生物的动态变化。提取鱼肉中微生物核酸,进行降落PCR扩增,得到多种微生物特异性保守核酸序列。利用变性梯度凝胶电泳分析扩增出的微生物核酸序列。DGGE图谱表明,熏制鳗鱼在贮藏初期微生物群落较为丰富,随着贮藏时间增长,只有几种优势菌存在。经DNA序列分析表明,熏制鳗鱼的特定腐败菌为腐败希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens)、乳酸杆菌(Lactobacillus)、嗜冷肠杆菌(Enterobacteriaceae)和磷发光杆菌(Photobacterium phosphoreum)。

关键词：熏制鳗鱼 DGGE 微生物动态变化

半巢式-RT-Realtime PCR检测李痘病毒

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植物检疫 2012年第3期26卷 26-29页

作者：粟智平张静黄迎波李桂芬耿金培朱水芳烟台出入境检验检疫局山东烟台264000 湖南出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院

李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是我国重要的植物检疫性有害生物。本研究根据PPV中CP基因(coat protein gene)的保守序列,设计了3条PCR引物和1条TaqMan探针,建立了半巢式-RT-RealtimePCR检测PPV的方法。该方法有机地结合了巢式PCR和实时... 详细信息

李痘病毒(Plum pox virus,PPV)是我国重要的植物检疫性有害生物。本研究根据PPV中CP基因(coat protein gene)的保守序列,设计了3条PCR引物和1条TaqMan探针,建立了半巢式-RT-RealtimePCR检测PPV的方法。该方法有机地结合了巢式PCR和实时荧光PCR技术;3条引物形成的2套PCR体系相互验证,有效提高了结果的准确性;荧光探针有效提高了检测的灵敏度。实验结果表明,本方法准确、灵敏、简便、快速,检出低限可达37fg/μL植物总RNA。

关键词：李痘病毒外壳蛋白基因半巢式-RT-Realtime PCR

基于种特异性标记鉴定不同虫态草地贪夜蛾的技术研究

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应用昆虫学报 2023年第4期60卷 1307-1313页

作者：李清文张静粟智平战一迪刘勇山东农业大学植物保护学院泰安271018 烟台海关技术中心烟台264000 济南海关技术中心济南250014 黄山区农业农村水利局黄山245700

【目的】草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵、低龄幼虫、蛹甚至成虫和其他鳞翅目害虫混合发生时,常难以准确识别;植保监测站以及海关等获取的可能包括草地贪夜蛾等大量昆虫残片的混合样品,也需要快速准确的物种鉴定。本文构建了基于... 详细信息

【目的】草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda的卵、低龄幼虫、蛹甚至成虫和其他鳞翅目害虫混合发生时,常难以准确识别;植保监测站以及海关等获取的可能包括草地贪夜蛾等大量昆虫残片的混合样品,也需要快速准确的物种鉴定。本文构建了基于种特异性标记的草地贪夜蛾的快速准确鉴定方法。【方法】利用线粒体DNA COⅠ基因通用引物LCO1490/HCO2198扩增11种供试鳞翅目昆虫的COⅠ序列,然后根据草地贪夜蛾的保守序列片段设计6对PCR特异性引物、1对qPCR特异性引物和探针,提取供试昆虫的DNA,并以此为模板对引物进行种特异性检测。【结果】PCR引物SF_F3/SF_R3和qPCR引物60F/154R可特异性扩增不同虫态(卵、幼虫、蛹和成虫)的草地贪夜蛾基因组模板;灵敏度检测表明,PCR和qPCR引物对草地贪夜蛾DNA模板的最低检测浓度分别为1ng/μL和10pg/μL。【结论】本研究建立的基于种特异性标记的物种快速鉴定方法,提高了不同虫态的草地贪夜蛾的鉴定效率和准确度。

关键词：草地贪夜蛾线粒体DNA COⅠ基因 PCR 实时荧光定量PCR

双引物探针RT-Realtime PCR检测马铃薯A病毒

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植物检疫 2012年第1期26卷 26-28页

作者：张京宣梁炜耿金培陈洪俊杨益娥粟智平山东出入境检验检疫局山东青岛266000 烟台出入境检验检疫局中国检验检疫科学研究院

马铃薯A病毒(Potato virus A,PVA)是我国重要的检疫性有害生物。本研究根据PVA中CP基因(coat protein gene)的保守序列,设计了两套PCR引物和TaqMan探针,建立了双引物探针RT-RealtimePCR检测PVA的方法。该方法采用实时荧光PCR技术,有效... 详细信息

马铃薯A病毒(Potato virus A,PVA)是我国重要的检疫性有害生物。本研究根据PVA中CP基因(coat protein gene)的保守序列,设计了两套PCR引物和TaqMan探针,建立了双引物探针RT-RealtimePCR检测PVA的方法。该方法采用实时荧光PCR技术,有效地提高了检测的灵敏度;同时两套引物探针相互验证,有效提高了结果的准确性。实验结果表明,本方法准确、灵敏、简便、快速,检出低限可达0.5fg/μL植物总RNA。

关键词：马铃薯A病毒 CP基因双引物探针RT-Realtime PCR

半巢式反转录实时荧光PCR检测马铃薯黑环斑病毒

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植物检疫 2009年第6期23卷 24-26页

作者：耿金培粟智平鲁闽许红岩陈燕平烟台出入境检验检疫局 264000

本研究根据基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式反转录实时荧光PCR检测PBRSV的新方法。该方法采用***快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术... 详细信息

本研究根据基因组中RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)保守序列,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式反转录实时荧光PCR检测PBRSV的新方法。该方法采用***快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式反转录实时荧光PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、单重Realtime PCR等方法高。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达300fg/μL植物总RNA。

关键词：马铃薯黑环斑病毒半巢式反转录实时荧光PCR 检测

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浅谈大豆带病种子的诊断及危害

植物检疫 2010年第1期24卷 20-22页

作者：栾晶方绍庆耿金培粟智平王颖鲁闽张京宣王真烟台出入境检验检疫局山东烟台264000

本文以检疫工作实践为基础,总结介绍了进境大豆检疫中几种常见种传病害的病粒症状、危害情况及防治措施。通过对大豆带病种子的直接检验,可现场识别部分种传病害,大大提高检验检疫效率。

关键词：大豆种传病害直接鉴别

半巢式RT-Realtime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系

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植物检疫 2009年第3期23卷 17-20页

作者：耿金培粟智平张京萱方绍庆王真烟台出入境检验检疫局 264000

马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virusY,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本文根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶基因序列保守区域,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测PVYn的新方... 详细信息

马铃薯Y病毒脉坏死株系(Potato virusY,PVYn)是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本文根据PVYn基因组中RNA依赖的RNA聚合酶基因序列保守区域,设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针,建立了半巢式RT-Realtime PCR检测PVYn的新方法。该方法采用***快速提取植物总RNA,并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大,也是对第一步PCR产物的确认,因此,检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Real time PCR等方法高。实验结果表明,该方法检测灵敏度可达4fg/μL植物总RNA。

关键词：马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN) 半巢式RT-Realtime PCR 检测

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基因芯片检测转基因油菜

农业生物技术学报 2003年第6期11卷 588-592页

作者：黄文胜潘良文粟智平缪海珍朱水芳李瑶上海博星基因芯片有限公司动植物检疫实验所上海200092 上海出入境检验检疫局上海博星基因芯片有限公司北京100029 上海200135

在设计转基因油菜(Brassica napus)的基因芯片检测方法时,根据油菜中所转入的外源基因,选择了 CaMV35S 启动子、FMV35S 启动子、Nos 终止子、Bar 基因、Bamase 基因、Barstar 基因、EPSPS 基因、GOX 基因、PAT 基因和内源基因 Fbp 等设... 详细信息

在设计转基因油菜(Brassica napus)的基因芯片检测方法时,根据油菜中所转入的外源基因,选择了 CaMV35S 启动子、FMV35S 启动子、Nos 终止子、Bar 基因、Bamase 基因、Barstar 基因、EPSPS 基因、GOX 基因、PAT 基因和内源基因 Fbp 等设计了引物对与探针,并制备了寡核甘酸芯片,通过多重 PCR 对样品核酸进行扩增和荧光标记后,将 PCR 产物与芯片杂交,检测油菜样品中所含的外源基因。结果表明,实验有较好的特异性和重复性,在检测低含量的转基因油菜时灵敏度可达到0.5%。由于采用了多重 PCR 和芯片的多基因并行杂交的技术,一次可同时检测10个基因,在检测多品种混合的转基因油菜商品时具有独特优势。

关键词：转基因油菜基因芯片转基因检测多重 PCR

利用TaqMan探针实时荧光PCR方法检测香石竹细菌性萎蔫病菌

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植物病理学报 2011年第1期41卷 24-30页

作者：邵秀玲甘琴华厉艳赵文军吴兴海粟智平山东出入境检验检疫局青岛266002 中国检验检疫科学研究院北京100029 烟台出入境检验检疫局烟台264000

根据香石竹细菌性萎蔫病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对香石竹细菌性萎蔫病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法。除香石竹细菌性萎蔫病菌外,还对其他7种病原细菌菌株进... 详细信息

根据香石竹细菌性萎蔫病菌基因组16S-23S rRNA保守序列,设计并合成了一对特异性引物和一条具有稳定点突变特异性探针,建立了对香石竹细菌性萎蔫病菌的TaqMan实时荧光PCR检测方法。除香石竹细菌性萎蔫病菌外,还对其他7种病原细菌菌株进行了荧光PCR检测。结果表明,只有香石竹细菌性萎蔫病菌产生荧光,其他病原细菌均没有荧光产生。与常规PCR相比,实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,能检测到浓度为0.4 pg/μL的DNA,且能直接用于苗木等样品的检测,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用。

关键词：香石竹细菌性萎蔫病菌 TaqMan探针实时荧光PCR 检测