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烟草苯丙氨酸解氨酶基因NtPAL的克隆及功能分析

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中国烟草学报 2024年

作者：许力许永向海英黄海涛米其利陈钰栋蒋佳芮李雪梅高茜云南中烟工业有限责任公司技术中心

【背景和目的】烟草苯丙氨酸解氨酶参与苯丙氨酸代谢途径，不仅跟烟叶香气品质相关，而且对烟草抗病、抗逆等防御功能也有影响。为鉴定苯丙氨酸解氨酶参与烟草抗花叶病途径的基因功能。【方法】采用同源克隆的方法，在栽培烟草红花大金... 详细信息

【背景和目的】烟草苯丙氨酸解氨酶参与苯丙氨酸代谢途径，不仅跟烟叶香气品质相关，而且对烟草抗病、抗逆等防御功能也有影响。为鉴定苯丙氨酸解氨酶参与烟草抗花叶病途径的基因功能。【方法】采用同源克隆的方法，在栽培烟草红花大金元中克隆了苯丙氨酸解氨酶基因NtPAL，利用生物信息学方法分析NtPAL蛋白结构和进化关系。采用CRISPR/cas9基因编辑技术获得NtPAL基因编辑植株PAL-KO，在植株成熟期测定多酚含量和苯丙氨酸解氨酶活性。利用本氏烟草瞬时表达系统，进行NtPAL亚细胞定位分析。【结果】烟草NtPAL基因的全长CDS序列为2016bp，编码一个由671个氨基酸组成的PAL蛋白。NtPAL含有典型的苯丙氨酸解氨酶结构域PLN02457，是一个新的烟草NtPAL基因。亚细胞定位实验表明NtPAL定位在细胞核区域。与对照植株相比，编辑植株PAL-KO对烟草花叶病毒（TMV）的抗性降低，成熟期叶片中新绿原酸、莨菪亭、隐绿原酸、绿原酸及芸香苷等5种多酚含量均显著升高，苯丙氨酸解氨酶活性降低。【结论】烟草NtPAL通过调控多酚含量与苯丙氨酸解氨酶活性响应烟草花叶病抗性。该研究结果为深入阐明NtPAL在烟草抗病性增强和遗传改良方面的潜力奠定了理论基础。

关键词：烟草 NtPAL 亚细胞定位基因功能抗病性

叶面真菌群落对白粉病发病的分子生态响应机制

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激光生物学报 2024年第1期33卷 73-79页

作者：黄海涛刘文仪杨文武张建铎米其利李菁菁陈义强李浩斌尹华群高茜云南中烟工业有限责任公司技术中心云南省烟草化学重点实验室昆明650231 湖南农业大学环境与生态学院长沙410128 福建中烟技术中心厦门361022 红塔集团玉溪卷烟厂玉溪653100 中南大学资源加工与生物工程学院长沙410083

叶面微生物群落组成与植物叶部病害发生密切相关,但植物真菌性叶部病害的发病程度与叶面真菌群落组成及多样性的关联机制仍然未知。本研究利用真核生物内源转录间隔区(ITS)扩增子高通量测序技术,在茄科作物白粉病不同发病程度下,研究了... 详细信息

叶面微生物群落组成与植物叶部病害发生密切相关,但植物真菌性叶部病害的发病程度与叶面真菌群落组成及多样性的关联机制仍然未知。本研究利用真核生物内源转录间隔区(ITS)扩增子高通量测序技术,在茄科作物白粉病不同发病程度下,研究了叶面真菌群落的组成和多样性差异,解析了叶面真菌分子生态网络拓扑性质的变化规律,并探明了叶面真菌群落系统发育装配的生态过程。多样性分析表明,随着白粉病病情程度加重,叶面真菌群落丰富度及多样性逐渐下降;网络分析表明,相较于中度和重度感病植株,轻微发病植株叶面真菌网络的节点和连接数更多,网络密度、聚集系数和平均连通度更高。在不同发病程度的植株中,叶面真菌群落的系统发育装配的生态过程均由随机性主导,但随着发病程度加重,叶面真菌群落趋向于系统发育扩散。综上所述,病原菌入侵改变了叶面真菌群落结构,扰动了真菌群落之间的相互作用和群落系统发育的生态装配过程,这些结果为深入认识白粉病病害与叶面真菌群落关联机制和生产上防控该病具有重要意义。

关键词：白粉病叶面微生物真菌群落生态网络群落装配

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卷烟主流烟气中拟除虫菊酯类农药含量的检测方法

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中国烟草学报 2013年第1期19卷 5-9页

作者：吴娜耿永勤李雪梅米其利黄海涛周岚唐萍云南烟草科学研究院烟草添加剂安全测试中心昆明市科医路41号650106 云南红河学院理学院分析测试中心蒙自661100 云南省高校天然药物与化学生物学重点实验室蒙自661100

将超声波提取法与混合层析柱净化法联合,利用气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD),建立了一种高效、快速的卷烟主流烟气中拟除虫菊酯类农药含量的检测方法。通过对提取条件和净化条件进行优化,最佳条件为:丙酮超声波提取捕集有卷烟主流烟... 详细信息

将超声波提取法与混合层析柱净化法联合,利用气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD),建立了一种高效、快速的卷烟主流烟气中拟除虫菊酯类农药含量的检测方法。通过对提取条件和净化条件进行优化,最佳条件为:丙酮超声波提取捕集有卷烟主流烟气总粒相物的剑桥滤片,采用混合层析柱净化,卷烟主流烟气气相部分直接采用丙酮捕集,浓缩净化进样分析。优化条件下,方法的回收率为92.8%-97.3%,RSD为2.71%-9.02%,最低定量限为0.026-0.098μg/mL,最小检测限为0.0001-0.0009μg/mL,可满足卷烟主流烟气中拟除虫菊酯类农药含量的检测要求。

关键词：卷烟烟气超声波提取混合层析柱气相色谱拟除虫菊酯类农药

溶剂对卷烟烟气气相物捕集和细胞毒性检测的影响

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云南大学学报（自然科学版） 2010年第S1期32卷 134-138页

作者：米其利唐萍倪红梅黄海涛夭建华云南烟草科学研究院烟用添加剂安全性评价与研究中心云南省烟草化学重点实验室云南昆明650106

通过对不同溶剂和溶剂捕集液对卷烟烟气毒理学评价中常用细胞株的毒性作用研究,为卷烟烟气气相物捕集时选择高捕集率、低细胞毒性的溶剂提供依据.采用中性红细胞毒性法,研究了10种常用溶剂对中国仓鼠卵巢细胞的毒性作用,以及细胞毒性作... 详细信息

通过对不同溶剂和溶剂捕集液对卷烟烟气毒理学评价中常用细胞株的毒性作用研究,为卷烟烟气气相物捕集时选择高捕集率、低细胞毒性的溶剂提供依据.采用中性红细胞毒性法,研究了10种常用溶剂对中国仓鼠卵巢细胞的毒性作用,以及细胞毒性作用较小的溶剂的烟气捕集液对5种常用细胞株的毒性作用.在检测剂量范围内对中国仓鼠卵巢细胞的毒性作用结果为:磷酸缓冲液和乙酸乙酯无毒性作用;二甲基亚砜、70%甘油、无水乙醇、甲醇和丙酮的毒性作用较小;正丁醇、异丙醇和二氯甲烷的毒性作用较大.70%甘油、乙酸乙酯和丙酮的烟气气相物捕集液对5种细胞株的毒性作用大小不相同,其中70%甘油对卷烟烟气气相物的捕集效率相对较高,本身毒性较低,是较为理想的卷烟烟气气相物捕集溶剂.

关键词：溶剂细胞毒性细胞株中性红烟气捕集

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CHO细胞中性红试验参数研究

云南大学学报（自然科学版） 2010年第S1期32卷 127-129页

作者：唐萍米其利倪红梅李祝华夭建华云南烟草科学研究院烟用添加剂安全评价与研究中心云南省烟草化学重点实验室云南昆明650106

为探讨中性红摄入法测定中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)活性的有效性,为中性红比色法用于卷烟烟气毒理学评价提供参考.采用中性红吸入法,当中性红质量浓度为50～5000μg/mL,培育时间3h,溶解液pH值为3.0～4.0范围内,吸光值(A540nm)与CHO细胞... 详细信息

为探讨中性红摄入法测定中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)活性的有效性,为中性红比色法用于卷烟烟气毒理学评价提供参考.采用中性红吸入法,当中性红质量浓度为50～5000μg/mL,培育时间3h,溶解液pH值为3.0～4.0范围内,吸光值(A540nm)与CHO细胞的活细胞数呈正相关,是较为合适的实验参数.结果表明中性红比色法灵敏准确,结果稳定,操作简便,可以用于卷烟烟气细胞毒性的评价.

关键词：细胞毒性中性红 CHO细胞卷烟

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高通量测序在食品微生物生态学研究中的应用

食品科学 2016年第23期37卷 302-308页

作者：米其利李雪梅管莹高茜桂永发朱洲海夭建华云南中烟工业有限责任公司技术中心云南昆明650106 云南大学云南省微生物研究所云南昆明650091

随着分子生物学的发展,越来越多新的研究投入到对食品微生物的研究中。高通量测序作为一种新兴的分子生物学技术,具有数据产出通量高、分析全面、灵敏、快速等特点,被广泛用于食品微生物生态学的研究中。本文对高通量测序的操作流程及... 详细信息

随着分子生物学的发展,越来越多新的研究投入到对食品微生物的研究中。高通量测序作为一种新兴的分子生物学技术,具有数据产出通量高、分析全面、灵敏、快速等特点,被广泛用于食品微生物生态学的研究中。本文对高通量测序的操作流程及其在食品微生物生态学研究中的应用进行总结,评价该技术的优势和局限性,并对其在食品微生物研究中的应用前景进行展望,以期为食品微生物生态学的研究提供参考。

关键词：食品微生物生态学高通量测序多样性微生物区系

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卷烟全烟气直接暴露方法的研究进展

中国烟草学报 2013年第3期19卷 92-97页

作者：夭建华胡明阳米其利黄海涛唐萍李雪梅缪明明云南烟草科学研究院昆明理工大学生命科学与技术学院

综述了卷烟全烟气直接暴露方法的研究现状,分析了全烟气暴露试验的烟气暴露量控制与表征,以及影响该试验的重要影响因素,最后对全烟气直接暴露方法存在的问题进行了讨论和展望。

关键词：卷烟全烟气直接暴露细胞细菌体外试验

卷烟加工工艺重要工序及储叶条件对烟草中碳水化合物的影响研究

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云南大学学报（自然科学版） 2010年第S1期32卷 143-149页

作者：吴娜李雪梅黄海涛施红林夭建华米其利唐萍云南烟草科学研究院烟用添加剂安全性评价与研究中心云南省烟草化学重点实验室云南昆明650500 云南民族大学化学与生物技术学院云南昆明650106

研究了卷烟加工工艺过程中几个重要工序对烟草中碳水化合物含量的影响,并在实验室用人工气候箱模拟卷烟加工工艺过程中储叶的温湿度条件,进一步研究了润叶后不同储叶温度以及不同烟叶水分对烟草中碳水化合物含量的影响.实验结果表明:随... 详细信息

研究了卷烟加工工艺过程中几个重要工序对烟草中碳水化合物含量的影响,并在实验室用人工气候箱模拟卷烟加工工艺过程中储叶的温湿度条件,进一步研究了润叶后不同储叶温度以及不同烟叶水分对烟草中碳水化合物含量的影响.实验结果表明:随着卷烟加工工艺环节的依次推进,样品中细胞壁物质、淀粉、果胶、木质素和纤维素的含量呈下降趋势,而糖类化合物的含量变化规律性不明显;不同碳水化合物在不同工艺环节前后其含量变化也有所不同;在烟叶水分相同的条件下,淀粉、总糖的含量随着储叶温度的升高而降低;在储叶温度相同的条件下,淀粉、纤维素、细胞壁物质含量随着烟叶水分的增加而降低.

关键词：卷烟加工工艺储叶条件碳水化合物

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卷烟烟气小动物口鼻暴露方法的建立及评价

中国烟草学报 2019年第1期25卷 1-7页

作者：高茜刘欣管莹曾婉俐向海英米其利杨光宇李雪梅云南中烟工业有限责任公司技术中心云南省昆明市

【背景和目的】国际经济合作与发展组织(OECD)测试导则(TG)对化学物质暴露环境参数和浓度稳定性有明确要求,本文的目的是建立符合其要求的卷烟烟气小动物口鼻暴露方法。【方法】在小动物口鼻暴露系统中测定4种卷烟烟气在不同稀释倍数下... 详细信息

【背景和目的】国际经济合作与发展组织(OECD)测试导则(TG)对化学物质暴露环境参数和浓度稳定性有明确要求,本文的目的是建立符合其要求的卷烟烟气小动物口鼻暴露方法。【方法】在小动物口鼻暴露系统中测定4种卷烟烟气在不同稀释倍数下颗粒物数量浓度和挥发性有机物浓度,以确定符合OECD要求的卷烟烟气稀释倍数等参数。在该参数条件下,对40小鼠口鼻暴露连续2周,用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测小鼠肺灌洗液白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化,以进一步评估方法的稳定性。【结果】(1)4种卷烟主流烟气颗粒物浓度和总挥发性有机物(TVOC)在大于100倍稀释时,时间和空间变异系数均小于10%,符合OECD的要求,低于100倍则变异较大。(2)IL-10变异系数在6.9%～8.6%之间,TNF-α变异系数在13.4%～17.6%;IL-6变异系数在16.8%～23.2%之间。【结论】所建立的卷烟烟气口鼻暴露方法符合OECD导则要求,生物学效应指标检测结果可靠稳定。

关键词：口鼻暴露粒径分布颗粒物数量浓度总挥发性有机物小动物卷烟烟气