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人脐带间充质干细胞向肝细胞分化过程中长链非编码RNA核富集转录本1的作用

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中国组织工程研究 2022年第30期26卷 4847-4851页

作者：王丹丹禹亚彬刘世奇严雨楼张建淮南京医科大学江苏省南京市210000 南京医科大学附属淮安第一医院肝胆外科江苏省淮安市223300

背景:人脐带间充质干细胞在体外借助细胞因子可以诱导分化为肝样细胞,但是形成的肝样细胞功能上尚不够成熟。研究发现长链非编码RNA与细胞分化关系密切,并通过干预某些长链非编码RNA的表达达到了促进细胞分化的目的。目的:探讨长链非编... 详细信息

背景:人脐带间充质干细胞在体外借助细胞因子可以诱导分化为肝样细胞,但是形成的肝样细胞功能上尚不够成熟。研究发现长链非编码RNA与细胞分化关系密切,并通过干预某些长链非编码RNA的表达达到了促进细胞分化的目的。目的:探讨长链非编码RNA核富集转录本1对人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的影响。方法:建立人脐带间充质干细胞向肝细胞分化体系,用糖原染色和吲哚菁绿摄取实验评价肝细胞功能特性,qRT-PCR检测肝细胞特异性基因及核富集转录本1的mRNA表达。然后通过构建慢病毒干扰核富集转录本1表达,转染7 d后得到稳定转染的细胞株,然后进行肝向诱导分化4周,设立转染空质粒的阴性对照组,未进行病毒转染的对照组,qRT-PCR、Western blot检测肝细胞特异性基因和蛋白表达。结果与结论:①经糖原染色后可见细胞胞质内有红、紫色糖原颗粒,吲哚菁绿摄取后可见大量深绿色吲哚菁绿阳性细胞;②随着诱导时间延长,白蛋白、细胞色素酶P4503A4 mRNA表达量逐渐增加,核富集转录本1的mRNA表达量逐渐降低;③与阴性对照组和未转染对照组比较,在干扰核富集转录本1表达后,白蛋白、细胞色素酶P4503A4 mRNA和蛋白表达均明显增加;④结果表明,长链非编码RNA核富集转录本1可能参与了人脐带间充质干细胞向肝细胞的分化。

关键词：长链非编码RNA NEAT1 间充质干细胞肝细胞分化肝细胞特异性基因转染

体外定向诱导人脐带间充质干细胞分化为胰岛样细胞

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中国组织工程研究 2013年第6期17卷 1012-1017页

作者：禹亚彬陈维卞建民南京医科大学附属南京医院普外科江苏省南京市210000

背景:人脐带间充质干细胞具有获取容易、免疫原性低等优点,目前尚缺乏体外诱导其分化为胰岛样细胞的成熟方案。目的:探讨人脐带间充质干细胞在体外一定条件下分化为胰岛样细胞的可能性。方法:无菌条件下分离培养人脐带间充质干细胞,细胞... 详细信息

背景:人脐带间充质干细胞具有获取容易、免疫原性低等优点,目前尚缺乏体外诱导其分化为胰岛样细胞的成熟方案。目的:探讨人脐带间充质干细胞在体外一定条件下分化为胰岛样细胞的可能性。方法:无菌条件下分离培养人脐带间充质干细胞,细胞传3代后,采用两步法诱导其向胰岛样细胞分化:第1步,加入含100μg/Lβ-神经生长因子,4nmol/LActivinA,10mmol/L尼克酰胺,25μg/L表皮生长因子,体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养7d;第2步,将诱导液换为含10mmol/L尼克酰胺,10μg/L碱性成纤维细胞生长因子,1%胰岛素-转铁蛋白-硒的DMEM/F12培养基,诱导时间为14d。对照组单纯加入DMEM/F12培养基进行培养。结果与结论:诱导2周后脐带间充质干细胞开始聚集成团,诱导3周后,葡萄糖刺激试验阳性、PDX-1和Insulin基因表达。而对照组细胞无胰岛素分泌,胰岛细胞相关基因表达阴性。实验成功地将脐带间充质干细胞诱导成了胰岛样细胞。

关键词：干细胞干细胞培养与分化胰岛样细胞人脐带间充质干细胞分化胰岛素 PDX-1 其他基金干细胞图片文章

体外转染肝细胞核因子4α促进人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的研究

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体外转染肝细胞核因子4α促进人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的...

作者：禹亚彬南京医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs）在肝细胞核因子4α（Hepatocyte nuclear factor4alpha, HNF4α）转染后向肝细胞分化情况，为肝组织工程提供新的种子来源。方法：从人脐带华通... 详细信息

目的：探讨人脐带间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stem cells,HuMSCs）在肝细胞核因子4α（Hepatocyte nuclear factor4alpha, HNF4α）转染后向肝细胞分化情况，为肝组织工程提供新的种子来源。方法：从人脐带华通胶中分离出HuMSCs，用含有碱性成纤维生长因子（bFGF）、肝细胞生长因子(HGF)诱导9天后转染HNF4α。通过光学显微镜及免疫荧光技术观察诱导细胞的形态学变化;用Western-Blot检测肝细胞特异性蛋白的表达;用RT-PCR法检测肝细胞特异性基因的表达;并对细胞培养上清白蛋白(ALB)与尿素氮(BuN)进行特异性检验，对照组只转染空质粒PCDNA3.1。结果：本实验结果表明在早先报道的诱导方案下，可以较容易地将HuMSCs诱导为肝样细胞。过表达HNF4α可以使诱导分化细胞肝特异性蛋白及基因的表达水平显著升高，这可能是与肝富集因子网络及Wnt/β-Catenin信号通路相关的。结论：过表达HNF4α可以促进HuMSCs向肝细胞分化，从而为临床提供更好的细胞来源。

关键词：人脐带间充质干细胞肝分化肝细胞核因子4α

人脐带间充质干细胞与骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的比较

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中华肝胆外科杂志 2016年第1期22卷 13-16页

作者：禹亚彬顾殿华南京医科大学附属淮安第一医院肝胆外科淮安223300

目的比较人脐带间充质干细胞（UC—MSCs）与人骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）体外向肝细胞分化的能力。方法取第3代UC—MSCs与***，加入含20mg／L酸性成纤维生长因子（α-FGF）及20μg/L肝细胞生长因子（HGF）的IMDM培养液持续诱导，3—... 详细信息

目的比较人脐带间充质干细胞（UC—MSCs）与人骨髓间充质干细胞（BM—MSCs）体外向肝细胞分化的能力。方法取第3代UC—MSCs与***，加入含20mg／L酸性成纤维生长因子（α-FGF）及20μg/L肝细胞生长因子（HGF）的IMDM培养液持续诱导，3—4天换液一次。细胞诱导成功后，测定培养液上清白蛋白、尿素氮水平并用实时-PCR等方法对两种细胞分化水平进行比较。结果增殖能力实验显示，UC—MSCs比BM—MSCs具有更高的增殖能力。显微镜下UC—MSCs诱导的细胞较BM—MSCs诱导的细胞形态更加成熟、更接近肝细胞形态，胞浆内颗粒也更丰富。培养4周后UC—MSCs诱导的细胞分泌的白蛋白及尿素氮浓度高于BM—MSCs诱导的细胞（P〈0．05）。UC—MSCs组肝脏相关基因CK18、G6P、HGF、ALB表达亦高于BM—MSCs组（P〈0．05）。结论与BM—MSCs比较，UC—MSCs具有更强的肝细胞分化潜能，更适于晚期肝病的细胞治疗。

关键词：人脐带间充质干细胞人骨髓间充质干细胞肝细胞分化

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成人原代肝细胞微囊化冷冻

中华肝脏病杂志 2014年第9期22卷 686-692页

作者：杭化莲禹亚彬卞建民夏强上海交通大学医学院附属仁济医院肝脏外科 200127 南京医科大学附属南京医院普外科

目的建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人... 详细信息

目的建立一种稳定的成人肝细胞冷冻方法,为构建永生化肝细胞系提供充足的肝细胞来源,为肝细胞移植、生物人工肝支持系统治疗急、慢性肝病及肝细胞体外应用模型提供潜在的肝细胞资源.方法 20例供肝采用离体两步胶原酶灌注技术分离成人原代肝细胞.选择7个预置时间点（2、6、12、24、36、48、72 h）,在4℃人无血清培养基预置12 ～ 24 h后,使用海藻酸钠-多聚赖氨酸微球微囊化肝细胞,液氮保存.分析预置微囊冷冻组及对照组肝细胞的形态学、病理结构、白蛋白水平、尿素合成、细胞周期、肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白表达水平.各组间数据比较均采用方差分析,计数资料采用Fisher ＆#39;s exact test检验.结果在部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌流技术分离所得肝细胞活率和贴壁率分别是75.0％＆#177;4.6％和72.0％＆#177;6.0％.4℃预置12h或24h细胞的白蛋白分泌高于其他时间点,F=40.3,P值均＜0.05,差异有统计学意义.4℃预置12h或24h与立即冷冻（IC）组比较,解冻后贴壁肝细胞白蛋白和尿素合成水平明显增高,且肝细胞特异性功能基因mRNA和蛋白水平明显增高,此两个时间点是最适预置时间.预置微囊冷冻（PMC）组细胞与IC组比较,肝细胞形态保持的更为完整,细胞增殖周期、糖原染色及肝细胞功能特异性基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增强.PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天的白蛋白分泌分别与直接培养（DC）组分别比较,P值均＞ 0.05,差异均无统计学意义;而PMC组细胞在贴壁培养后第2、3、4天,与IC组的白蛋白水平比较（119.2 ng/ml对比101.2 ng/ml,110.0 ng/ml对比87.6 ng/ml,98.2 ng/ml对比73.8 ng/ml）和尿素合成比较（7.83μg/ml对比6.79 μ g/ml,6.83 μ g/ml对比5.89μg/ml,5.85 μg/ml对比4.83 μg/ml）均较IC组明显增高,两组比较,F值分别为22.1、31.1,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.结论部分肝叶切除后使用离体两步胶原酶灌注技术提供了一种创新、简单、可靠的肝细胞分离技术,人肝细胞在微囊化冷冻前4℃预置12 ～ 24h可更好地恢复形态和功能的完整性,为药理毒理学、生物人工肝以及细胞治疗的临床应用提供可能.

关键词：肝细胞细胞培养技术冷冻微囊化

HNF4α真核表达载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达

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南京医科大学学报（自然科学版） 2012年第10期32卷 1356-1360页

作者：禹亚彬杭化莲卞建民南京医科大学附属南京医院普外科江苏南京210006

目的:构建pcDNA3.1/HNF4α重组质粒,转染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUMSCs),并检测其在HUMSCs中的表达。方法:采用基因重组技术构建载体pcDNA3.1/HNF4α,经酶切和DNA测序鉴定,通过脂质体法转染HUMSCs后,进行RT-PCR和Western blot分析,免疫荧光检测转染后1周肝特异性生化指标。结果:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1/HNF4α,转染人脐带间充质干细胞后,RT-PCR示转染后HNF4αmRNA表达,Western blot分析见HNF4α蛋白表达,免疫荧光示转染1周后HNF4α促进了HUMSCs向肝细胞方向分化。结论:成功构建真核表达载体,并在HUMSCs中正确表达,为进一步研究HNF4α在干细胞向肝细胞分化中作用提供了实验基础。

关键词：质粒构建 HNF4α 人脐带间充质干细胞肝细胞分化

加速康复外科理念在老年患者行脾切除联合贲门周围血管离断术中的应用

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中国临床研究 2022年第2期35卷 198-201页

作者：王丹丹张建淮宋研禹亚彬徐建波祁付珍南京医科大学附属淮安第一医院肝胆外科江苏淮安223300

目的探讨加速康复外科(ERAS)在老年门静脉高压患者行脾切除联合贲门周围血管离断术围手术期应用的效果和意义。方法回顾性分析2015年8月至2019年8月在南京医科大学附属淮安第一医院因肝硬化门静脉高压行脾切除联合贲门周围血管离断术患... 详细信息

目的探讨加速康复外科(ERAS)在老年门静脉高压患者行脾切除联合贲门周围血管离断术围手术期应用的效果和意义。方法回顾性分析2015年8月至2019年8月在南京医科大学附属淮安第一医院因肝硬化门静脉高压行脾切除联合贲门周围血管离断术患者的临床资料,挑选出年龄>65岁的老年患者共62例。其中有32例患者采用加速康复理念进行围手术期相关处理,作为加速康复组;另30例患者采用传统围手术期处理,作为传统组。比较两组患者术中情况、术后并发症发生率、住院时间、住院费用等指标。结果加速康复组与传统组相比,术中出血量、手术时间、心血管事件、感染、出血、肝功能不全、门静脉血栓的发生率、术后死亡率及30 d再入院率比较差异无统计学意义(P>0.05)。ERAS组患者电解质紊乱发生率、住院费用、术后住院时间以及术后疼痛评分优于传统组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论加速康复理念应用于脾切除联合贲门周围血管离断的老年门静脉高压患者的围手术期能够降低手术风险,缩短住院时间,减少住院费用。

关键词：加速康复外科老年门静脉高压肝硬化脾切除

人脐带间充质干细胞分化为肝样细胞及对肝硬化大鼠肝功能的改善

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中华肝胆外科杂志 2014年第10期20卷 729-733页

作者：禹亚彬卞建民顾殿华南京医科大学附属淮安第一医院肝胆外科淮安223300 南京医科大学附属南京医院普外科

目的观察人脐带间充质干细胞（HuMSCs）体外诱导分化为肝样细胞后移植入肝硬化大鼠体内,观察其对大鼠肝功能的影响.方法采用四氯化碳法制备肝硬化大鼠模型.造模成功后,实验组经门静脉注射1 ml诱导分化来的肝样细胞（1×10 7个）,间充... 详细信息

目的观察人脐带间充质干细胞（HuMSCs）体外诱导分化为肝样细胞后移植入肝硬化大鼠体内,观察其对大鼠肝功能的影响.方法采用四氯化碳法制备肝硬化大鼠模型.造模成功后,实验组经门静脉注射1 ml诱导分化来的肝样细胞（1×10 7个）,间充质干细胞（MSC）组注射1 ml相同细胞量的HuMSCs,模型组注射等体积的生理盐水（NS）.以未造模的大鼠作为对照组.细胞移植后,取大鼠内眦静脉血及肝组织进行检测.结果细胞移植后1周,与模型组比较,实验组血清ALT、AST及TBil均明显下降（P＜0.05）,血清Alb明显上升（P＜0.05）;与MSC组比较,实验组Alb较高,差别亦具有统计学意义（P＜0.05）,但ALT、AST及TBil差别无统计学意义（P＞0.05）.细胞移植后4周,与模型组比较,实验组ALT,AST及TBil仍明显下降（P＜0.05）,Alb明显上升（P＜0.05）;与MSC组比较,实验组Alb、ALT、AST及TBil差别均具有统计学意义（P＜0.05）.RT-PCR结果显示,移植MSC或肝样细胞后,MSC组及实验组4种肝脏相关基因表达较模型组均显著增高（P＜0.05）.实验组基因的表达较MSC组显著增高（P＜0.05）.结论 HuMSCs诱导分化后能在一定程度上改善肝硬化大鼠的肝功能,其效果优于单纯移植MSC.

关键词：人脐带间充质干细胞肝样细胞移植肝硬化

人脐带间充质干细胞体外分化为胰岛素分泌细胞

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江苏医药 2013年第9期39卷 1021-1024,F0002页

作者：禹亚彬陈维储建卞建民南京医科大学附属南京医院(南京市第一医院)普通外科江苏省210006

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法采用直接贴壁法从脐带中分离UC-MSCs,取第3代细胞作流式细胞术鉴定其表型。用β-巯基乙醇、尼克酰胺和碱性成纤维生长因子(bFGF)诱导UC-MSCs(诱导组),对照组在... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可能性。方法采用直接贴壁法从脐带中分离UC-MSCs,取第3代细胞作流式细胞术鉴定其表型。用β-巯基乙醇、尼克酰胺和碱性成纤维生长因子(bFGF)诱导UC-MSCs(诱导组),对照组在未添加任何诱导试剂的培养基中培养。倒置显微镜下观察UC-MSCs的形态学变化;取诱导后3周的细胞进行双硫腙染色,采用化学发光免疫法测定培养上清液中胰岛素水平,RT-PCR检测胰岛细胞相关基因的表达。结果细胞高表达UC-MSCs相关抗原CD90、CD105和CD13,而低表达造血细胞相关抗原CD34、CD45和HLA-DR。UC-MSCs经诱导后细胞形态由梭形变为圆形或椭圆形,双硫腙染色为阳性。诱导组胰岛素水平明显高于对照组[(0.305±0.065)μU/ml vs.(0.085±0.024)μU/ml](P<0.01)。RT-PCR显示诱导后细胞表达胰岛细胞相关基因。结论 UC-MSCs具有向胰岛素分泌细胞分化的潜能。

关键词：脐带间充质干细胞胰岛素分泌细胞