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志贺毒素阴性的大肠埃希菌O157菌株的毒力因子检测

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第2期21卷 229-233页

作者：潘劲草孟冬梅黄志成祝水芬姚怀芳施世锋杭州市疾病预防控制中心 310006

目的　研究志贺毒素阴性的大肠埃希菌O15 7血清群菌株可能携带的毒力因子 ,以确定其致病群类型。方法　对 8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O15 7血清群菌株及分离自美国和我国江苏的EHECO15 7菌株 ,应用PCR技术检测stx、hly、E... 详细信息

目的　研究志贺毒素阴性的大肠埃希菌O15 7血清群菌株可能携带的毒力因子 ,以确定其致病群类型。方法　对 8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O15 7血清群菌株及分离自美国和我国江苏的EHECO15 7菌株 ,应用PCR技术检测stx、hly、EPEC和EHEC共有的eaeA、EHEC特异的eaeA ,ELISA检测ETEC的耐热和不耐热肠毒素 ,HEP 2细胞粘附试验测定细菌与上皮细胞的粘附能力 ,并进行菌株质粒图谱分析。结果　 8株志贺毒素阴性的大肠埃希菌O15 7菌株均未检出stx、hly、EHEC特异的eaeA以及ETEC的耐热和不耐热肠毒素 ,仅其中 2株菌株携有EPEC和EHEC共有的eaeA ,另 3株菌株对HEP 2细胞有集聚性粘附能力。结论　目前我国检获的大肠埃希菌O15 7菌株其致病类型表现为多样性 ,部分菌株尚不能明确其毒力因子。EHECO15 7的鉴定必须重视毒力因子的检测。

关键词：志贺毒素大肠埃希菌毒力因子 0157菌株

大白鼠转移因子的研究——Ⅱ转移因子对放射病免疫预防的实验观察

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上海免疫学杂志 1981年第4期 20-22页

作者：孙范五祝水芬浙江人民卫生实验院免疫研究室

本文应用人脾转移因子,鼠脾转移因子、照射鼠脾转移因子进行抗放试验。结果表明,对射线照射后T淋巴细胞的下降,有明显的保护和恢复作用,实验结果显示三种转移因子的防护效果无明显差异。

关键词：转移因子防护效果传递因子大白鼠家鼠属淋巴细胞白细胞脾指数免疫器官淋巴器官白细胞数小白鼠

超滤法提取正常大白鼠外周血及脾脏转移因子的研究

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动物学杂志 1982年第1期 24-26页

作者：孙范五祝水芬浙江省人民卫生实验院

早在1 940年兰兹泰纳(Landsteiner)等就首次发现了细胞免疫的转移现象。1949年劳伦斯(Lawrence)成功地以人的外周血白细胞转移了人对结核菌素的延迟超敏反应,接着1955年又继续发现了活的外周血白细胞的提取物能够转移入对结核菌素的延... 详细信息

早在1 940年兰兹泰纳(Landsteiner)等就首次发现了细胞免疫的转移现象。1949年劳伦斯(Lawrence)成功地以人的外周血白细胞转移了人对结核菌素的延迟超敏反应,接着1955年又继续发现了活的外周血白细胞的提取物能够转移入对结核菌素的延迟超敏反应,并将它命名为转移因子(Transfer Facton)。简称“TF”。在美国1973年专门进行了一次转移因子主要特性和临床应用的科学讨论,1978年底又召

关键词：大白鼠脾脏家鼠属超滤法外周血

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杭州地区汉坦病毒病毒分离株的基因型分析

中国卫生检验杂志 2009年第6期19卷 1225-1226,1258页

作者：黄志成濮小英刘涛祝水芬于新芬寇宇杭州市疾病预防控制中心杭州310006

目的:了解杭州地区啮齿类动物所携带的流行性出血热汉坦病毒的基因型别。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、核苷酸序列测定和细胞培养方法对免疫荧光抗原阳性的4份鼠肺标本进行汉坦病毒分析。结果:2/4份标本获得了阳性培养物,对... 详细信息

目的:了解杭州地区啮齿类动物所携带的流行性出血热汉坦病毒的基因型别。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、核苷酸序列测定和细胞培养方法对免疫荧光抗原阳性的4份鼠肺标本进行汉坦病毒分析。结果:2/4份标本获得了阳性培养物,对阳性标本的M基因组片段序列分析表明均为SEO型汉坦病毒;毒株核苷酸序列比较表明:与其他SEOV型毒株同源性均达85%以上,而与其他HNTV型毒株同源性为70%;毒株序列所构建的系统发生树显示,本次分离的二株为汉坦病毒属SEOV型,与B jHD01(DQ133505)同源性为99%,属SEOV型S3亚型。结论:杭州地区流行性出血热流行毒株可能是SEOV型汉坦病毒,且以S3亚型为主。

关键词：汉坦病毒核苷酸序列基因系统发生树

杆状病毒和分批补料发酵联用高效表达单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D

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中国预防医学杂志 2011年第8期12卷 653-657页

作者：刘涛董惠钧黄志成郑伟祝水芬杭州市疾病预防控制中心浙江杭州310021 临沂市鲁南制药集团股份有限公司

目的利用Bac-to-Bac表达系统和分批补料式培养技术在草地夜蛾昆虫细胞(Sf9)中高效表达重组单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D(HSV-2 gD2)。方法以HSV-2基因组DNA为模板克隆全长gD2基因,利用Bac-to-Bac表达系统构建含目的基因的重组杆状病毒。... 详细信息

目的利用Bac-to-Bac表达系统和分批补料式培养技术在草地夜蛾昆虫细胞(Sf9)中高效表达重组单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D(HSV-2 gD2)。方法以HSV-2基因组DNA为模板克隆全长gD2基因,利用Bac-to-Bac表达系统构建含目的基因的重组杆状病毒。同时采用分批补料式培养技术高密度培养Sf9细胞实现重组gD2蛋白的高效表达。构建豚鼠生殖器疱疹模型,研究重组HSV-2 gD2蛋白的免疫活性。结果在一个5 L生物反应器内,在15 mmol/L葡萄糖、0.4 g/L谷氨酰胺以及45%溶解氧的培养条件下,重组gD2蛋白的产量高达192 mg/L。此外,纯化后的重组gD2免疫能显著降低豚鼠生殖器疱疹模型的外阴皮损症状。结论重组HSV-2 gD2蛋白利用杆状病毒和分批补料发酵联用得到高效表达,并表现出良好的免疫原性,为发展HSV-2疫苗奠定了基础。

关键词：昆虫杆状病毒表达系统单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D 分批补料发酵

降落PCR扩增单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的研究

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中国卫生检验杂志 2008年第9期18卷 1735-1736页

作者：刘涛黄志成祝水芬杭州市疾病预防控制中心微生物检验科杭州310006

目的:建立一种快速、准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的方法。方法:根据已发表的gD蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gD蛋白DNA进行扩增。结果:从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且采用降落PCR能有效地降低... 详细信息

目的:建立一种快速、准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型D蛋白基因的方法。方法:根据已发表的gD蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gD蛋白DNA进行扩增。结果:从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且采用降落PCR能有效地降低或避免非特异性扩增。结论:TD-PCR能够用于快速,准确地检测gD蛋白,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

关键词： TD-PCR gD蛋白单纯疱疹病毒Ⅱ型

降落PCR扩增单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的研究

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中国预防医学杂志 2008年第11期9卷 963-965页

作者：刘涛黄志成祝水芬杭州市疾病预防控制中心微生物检验科浙江310006

目的建立一种快速,准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的方法。方法根据已发表的gG蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gG蛋白基因进行扩增。结果从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且能有效地降低或避免非特异性... 详细信息

目的建立一种快速,准确检测单纯疱疹病毒Ⅱ型G蛋白基因的方法。方法根据已发表的gG蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gG蛋白基因进行扩增。结果从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且能有效地降低或避免非特异性扩增。结论TD-PCR能够用于快速,准确地检测gG蛋白基因,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

关键词： TD-PCR SG蛋白单纯疱疹病毒Ⅱ型

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杭州市一株单纯疱疹2型病毒株的分离鉴定

国际流行病学传染病学杂志 2008年第4期35卷 233-235页

作者：刘涛黄志成祝水芬杭州市疾病预防控制中心微生物检验科 310006

目的建立一种能够对样本中的单纯疱疹病毒（HSV）进行准确鉴定分型的方法，并从生殖器疱疹（GH）患者皮损的水疱液中分离出1株HSV-2。方法从1例GH患者病变部位采集样本，样本接种Vero-E6细胞，待出现细胞病变后收获病毒感染物，提取病... 详细信息

目的建立一种能够对样本中的单纯疱疹病毒（HSV）进行准确鉴定分型的方法，并从生殖器疱疹（GH）患者皮损的水疱液中分离出1株HSV-2。方法从1例GH患者病变部位采集样本，样本接种Vero-E6细胞，待出现细胞病变后收获病毒感染物，提取病毒感染物的基因组。根据特异性PCR对分离出的病毒进行分型鉴定。结果分离的毒株引起Vero-E6典型细胞病变，病变细胞圆缩、融合。型特异性PCR反应及1％琼脂糖凝胶电泳鉴定结果表明，扩增出的片段大小约为183bp，与预期的HSV-2型特异性片段长度相符，且与数据库的比对结果显示相似性为100％。结论通过细胞分离培养和特异性PCR分型鉴定，能够实现对样本中的HSV的准确分型鉴定。

关键词：疱疹生殖器疱疹病毒2型人分离

杭州市急性出血性结膜炎的柯萨奇病毒分离鉴定及其VP1序列分析

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中国卫生检验杂志 2011年第9期21卷 2228-2231页

作者：邱晓枫黄志成祝水芬张国忠浙江省杭州市疾病预防控制中心杭州310021

目的:2010年杭州市发生了两起急性出血性结膜炎(Acute Hemorrhagic Conjunctivitis,AHC)疫情,为鉴定引起疫情的致病病原体。方法:采集了9份眼结膜拭子标本,使用实时荧光PCR或RT-PCR法分别检测临床标本中腺病毒、人肠道病毒70型(Human En... 详细信息

目的:2010年杭州市发生了两起急性出血性结膜炎(Acute Hemorrhagic Conjunctivitis,AHC)疫情,为鉴定引起疫情的致病病原体。方法:采集了9份眼结膜拭子标本,使用实时荧光PCR或RT-PCR法分别检测临床标本中腺病毒、人肠道病毒70型(Human Enterovirus 70,HEV70)和柯萨奇病毒A组24型变种(CoxsackievirusA24 variant,CVA24v)的基因。使用Hep-2细胞和RD细胞分离病毒。对分离到的CVA24v毒株进行全长VP1区扩增和核苷酸序列测定和分析。结果:实时荧光PCR或RT-PCR法检测临床标本,其中有6份检测结果为CVA24v阳性,阳性率为66.7%,而腺病毒和HEV70检测结果均为阴性。使用Hep-2细胞共分离到5株病毒,通过分子定型均鉴定为CVA24v。进化树图显示,两起疫情是由两个病毒传播链引起的。结论:本研究成功地分离到5株CVA24v毒株,为今后杭州市AHC的防治及研究奠定了一定的基础。

关键词：急性出血性结膜炎柯萨奇病毒A组24型变种分子进化分析