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两种启动子对聚γ-谷氨酸降解酶基因在地衣芽胞杆菌中的加强表达效果

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应用与环境生物学报 2012年第3期18卷 450-454页

作者：付军涛祁高富刘军冀志霞马昕陈守文华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070 武汉工业学院生物与制药工程学院武汉430023

聚γ-谷氨酸（γ-PGA）是一种应用前景良好的生物高分子材料.比较了蔗糖诱导的枯草芽胞杆菌果聚糖蔗糖酶基因（SacB）启动子和地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因启动子对γ-PGA降解酶基因ywtD在地衣芽胞杆菌中加强表达的影响.分别用SacB基因启... 详细信息

聚γ-谷氨酸（γ-PGA）是一种应用前景良好的生物高分子材料.比较了蔗糖诱导的枯草芽胞杆菌果聚糖蔗糖酶基因（SacB）启动子和地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因启动子对γ-PGA降解酶基因ywtD在地衣芽胞杆菌中加强表达的影响.分别用SacB基因启动子和α-淀粉酶启动子构建了穿梭表达载体pHY300-SYT和pHY300-PYT,通过电转化地衣芽胞杆菌WX-02获得重组子SYT和PYT.酶活测定结果显示SYT和PYT中γ-PGA降解酶基因ywtD得到加强表达,摇瓶发酵结果显示两个重组菌株的γ-PGA相对分子质量都由1 000 000~1 200 000降低为800 000~900 000,PYT的γ-PGA产量较对照菌株PLK提高了33%,由13.50 g L-1提高到17.97 g L-1,而SYT的γ-PGA产量则降低为10.85 g L-1.因此,α-淀粉酶启动子更适合于在地衣芽胞杆菌WX-02菌株中表达γ-PGA降解酶基因,从而获得高产低分子量γ-PGA的工程菌.

关键词：地衣芽胞杆菌聚γ-谷氨酸 ywtD基因 SacB启动子 amy启动子加强表达

松针褐斑病菌毒素的层析分离及紫外吸收特性研究

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南京林业大学学报（自然科学版） 2004年第2期28卷 7-11页

作者：叶建仁杨斌包宏祁高富南京林业大学江苏南京210037

以生测为导向,采用柱层析和薄层层析相结合,从松针褐斑病菌发酵液中分离出3个致毒活性组分m,p和q。经薄层层析检验可知m,q在A,C两个展开系统中Rf值一致,分别为0.57和0.75,且m,q展开后在254nm和365nm紫外光下都呈蓝色荧光,基本认为m和q... 详细信息

以生测为导向,采用柱层析和薄层层析相结合,从松针褐斑病菌发酵液中分离出3个致毒活性组分m,p和q。经薄层层析检验可知m,q在A,C两个展开系统中Rf值一致,分别为0.57和0.75,且m,q展开后在254nm和365nm紫外光下都呈蓝色荧光,基本认为m和q是同一组分;p在365nm紫外光下为黄白色荧光,在A、C两个展开系统中Rf值分别为0.46和0.66。层析分离的结果表明,松针褐斑病菌可能含两个或两个以上的毒素物质。对m和p两组分进行紫外扫描的结果显示,m,p分别在波长210nm和208nm处有最大吸收峰,在365nm和254nm紫外光下无吸收或吸收很弱。高效液相分析显示:m,p都不是纯物质,在210nm检测波长下,m有3个吸收峰,保留时间分别为2.41,3.80和16.68min,p有4个吸收峰,保留时间分别为2.46,3.75,12.00和17.25min。研究结果表明组分m和p可能含有相同或相似的化学物质,要获得纯物质还需进一步分离。

关键词：松针褐斑病菌毒素层析分离紫外吸收特性森林病害

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松针褐斑病菌的产毒培养和毒素粗提方法

南京林业大学学报（自然科学版） 2001年第5期25卷 6-10页

作者：叶建仁杨斌包宏祁高富南京林业大学江苏南京210037

松针褐斑病菌在PD和MS培养基中生长良好 ,能产生毒素。在这两种培养基中加入敏感寄主火炬松的针叶浸汁对毒素的产生和活性没有明显影响。甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿甲醇 (氯仿∶甲醇 =2∶3)混合溶剂等均能把毒素物质充分提取出来 ,苯、... 详细信息

松针褐斑病菌在PD和MS培养基中生长良好 ,能产生毒素。在这两种培养基中加入敏感寄主火炬松的针叶浸汁对毒素的产生和活性没有明显影响。甲醇、乙醇、正丁醇、氯仿甲醇 (氯仿∶甲醇 =2∶3)混合溶剂等均能把毒素物质充分提取出来 ,苯、氯仿、乙酸乙酯等极性小的溶剂不能充分提取毒素。通过生测和高效液相 (HPLC)比较分析表明 ,采用MS培养液培养病菌 ,以氯仿甲醇混合溶剂提取毒素 ,将有利于毒素的产生和毒素的分离。

关键词：松针褐斑病真菌毒素松针褐斑病菌松树病害产毒培养粗提

聚γ-谷氨酸对气相色谱-质谱检测地衣芽孢杆菌胞内代谢物的影响

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分析科学学报 2013年第2期29卷 187-190页

作者：龙丹李欣冀志霞李俊辉祁高富陈守文华中农业大学农业微生物学国家重点实验室湖北武汉430070 华中农业大学浦城绿康生物工程研究所湖北武汉430070 绿康生化股份有限公司福建浦城353400

通过添加外源聚γ-谷氨酸(γ-PGA),利用气相色谱-质谱法(GC-MS)评估了γ-PGA对地衣芽孢杆菌胞内代谢物检测的影响。结果表明:终浓度为10g/L的γ-PGA会使除谷氨酸外的氨基酸、有机酸和糖类标准品的检测峰面积明显降低;另外,终浓度为10g/... 详细信息

通过添加外源聚γ-谷氨酸(γ-PGA),利用气相色谱-质谱法(GC-MS)评估了γ-PGA对地衣芽孢杆菌胞内代谢物检测的影响。结果表明:终浓度为10g/L的γ-PGA会使除谷氨酸外的氨基酸、有机酸和糖类标准品的检测峰面积明显降低;另外,终浓度为10g/L的γ-PGA对分析地衣芽孢杆菌胞内代谢物中的谷氨酸、葡萄糖和6-磷酸葡萄糖(G6P)的影响较为显著。因此,在利用GC-MS定量分析地衣芽孢杆菌的胞内代谢物前,应将γ-PGA和细胞分离。

关键词：聚γ-谷氨酸气相色谱-质谱地衣芽孢杆菌代谢物样品预处理

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大豆肽减肥降血脂作用的研究

食品科技 2011年第11期36卷 65-68页

作者：褚斌杰祁高富梁运祥华中农业大学农业微生物学国家重点实验室武汉430070

采用大豆肽对Wistar大鼠进行实验,研究大豆肽的减肥降血脂作用。大豆肽减肥作用实验中,低剂量300 mg/***灌胃Wistar大鼠,其脂体比下降了34.85%。大豆肽降血脂作用实验中,低剂量300 mg/***灌胃Wistar大鼠,其血清总胆固醇下降了20.74%,同... 详细信息

采用大豆肽对Wistar大鼠进行实验,研究大豆肽的减肥降血脂作用。大豆肽减肥作用实验中,低剂量300 mg/***灌胃Wistar大鼠,其脂体比下降了34.85%。大豆肽降血脂作用实验中,低剂量300 mg/***灌胃Wistar大鼠,其血清总胆固醇下降了20.74%,同时其低密度脂蛋白下降了14.05%;中剂量600 mg/***灌胃Wistar大鼠,其高密度脂蛋白增加了9.03%,中剂量600 mg/***和高剂量1200 mg/***灌胃Wistar大鼠,其甘油三酯分别下降了45.10%和51.20%。研究结果表明大豆肽具有一定的减肥降血脂保健作用。

关键词：大豆肽血脂脂体比

松针褐斑病菌毒素对寄主细胞质膜伤害机理的研究

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林业科学 2000年第2期36卷 82-86页

作者：叶建仁祁高富包宏封维忠南京林业大学南京210037

用毒素粗提液处理寄主愈伤组织 2d后 ,可于光学显微镜下观察到严重的细胞原生质泡囊化现象 ,这是寄主受到毒素作用后于细胞水平所表现出的伤害症状。经毒素诱导后用ESR仪检测 ,寄主愈伤组织于 2h内即可产生比对照高得多的超氧阴离子自由... 详细信息

用毒素粗提液处理寄主愈伤组织 2d后 ,可于光学显微镜下观察到严重的细胞原生质泡囊化现象 ,这是寄主受到毒素作用后于细胞水平所表现出的伤害症状。经毒素诱导后用ESR仪检测 ,寄主愈伤组织于 2h内即可产生比对照高得多的超氧阴离子自由基 ,继而诱发膜脂脂过氧化反应 ;随着毒素作用时间的延长 ,寄主细胞膜脂脂肪酸组成发生变化 ,总的变化趋势为不饱和脂肪酸含量减少 ,饱和脂肪酸含量增加 ;毒素作用后于 4h以内即可产生大量的MDA ,6h内则可检测到严重的离子渗漏 ,造成膜的破坏。

关键词：松针褐斑病菌毒素致病机理细胞膜

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油菜内生真菌的分离鉴定及抑菌作用

华中农业大学学报 2011年第3期30卷 270-275页

作者：兰楠祁高富喻子牛赵秀云华中农业大学生命科学技术学院/农业微生物学国家重点实验室武汉430070

从油菜幼苗中通过PDA培养基分离出9株内生真菌,通过形态观察和18S rRNA基因序列分析,其中6株鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata),1株鉴定为球毛壳菌(Chaetomium globosum),1株属于镰刀菌属(Fusarium),1株属于炭角菌目(Xylariales)。... 详细信息

从油菜幼苗中通过PDA培养基分离出9株内生真菌,通过形态观察和18S rRNA基因序列分析,其中6株鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata),1株鉴定为球毛壳菌(Chaetomium globosum),1株属于镰刀菌属(Fusarium),1株属于炭角菌目(Xylariales)。从鉴定出的油菜内生真菌中,筛选出1株有抑菌活性的生防真菌——球毛壳菌(Chaetomium globosum)YY-11,此菌株对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、油菜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、小麦赤霉菌(Fusarium graminearum)等有不同程度的抑制作用。球毛壳菌YY-11对立枯丝核菌的玻片对峙镜检结果显示:在对立枯丝核菌的抑制过程中,球毛壳的拮抗机理主要是重寄生作用。

关键词：内生真菌 18S rRNA球毛壳菌抑菌作用

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植物病原真菌毒素研究进展

南京林业大学学报（自然科学版） 2000年第2期24卷 66-70页

作者：祁高富杨斌叶建仁南京林业大学森林资源与环境学院南京210037

综述了近年来有关植物病原真菌毒素的研究进展 ,对产毒真菌的种类和毒素的化学类别 ,病原真菌的产毒培养条件、毒素的提取纯化以及结构鉴定方法 ,毒素的 3种检测途径与致病机理。

关键词：植物病原真菌毒素产毒真菌种类致病机理应用

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松针褐斑病毒素的确定及其基本性质

安徽农业科学 1999年第5期27卷 466-469页

作者：祁高富叶建仁包宏南京林业大学南京210000

以ＭＳ液体培养基培养２０ｄ左右至菌丝大量生长并紧密交织成团时病菌即可大量产毒，病菌是否产孢对产毒量大小无显著影响。毒素原液中仅非蛋白部分具致病活性，经高温高压灭菌１５ｍｉｎ后活性仍不丧失，且有所加强。该毒素经冷冻或... 详细信息

以ＭＳ液体培养基培养２０ｄ左右至菌丝大量生长并紧密交织成团时病菌即可大量产毒，病菌是否产孢对产毒量大小无显著影响。毒素原液中仅非蛋白部分具致病活性，经高温高压灭菌１５ｍｉｎ后活性仍不丧失，且有所加强。该毒素经冷冻或灭菌后于室温下可保存２个月以上而不失活。毒素粗提液中活性成分为一类极性较大的物质，易溶于水、甲醇、乙醇，可溶于正丁醇，微溶于乙酸乙酯，不溶于苯，可被活性炭吸附并为甲醇所洗脱。试验表明，毒素粗提液的ｐＨ值和渗透势分别为６．０和１．２２巴，毒素原液的毒性非ｐＨ值或渗透势所致，从而确定了病菌人工培养滤液中存在有具致病活性的毒素物质。

关键词：松树病害松针褐斑病菌真菌毒素