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水稻二化螟病原线虫N-Yz1的分离鉴定及其感染特性

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中国水稻科学 2022年第6期36卷 639-646页

作者：刘琴夏杨韩光杰李传明陆玉荣黄立鑫祁建杭徐健扬州绿源生物化工有限公司扬州225008 江苏里下河地区农业科学研究所/国家农业微生物扬州观测实验站扬州225007

【目的】二化螟是危害水稻的重要害虫,其钻蛀为害,防治困难,严重威胁水稻生产。本研究对感染二化螟昆虫病原线虫的分离筛选和感染特性进行研究,期望为水稻钻蛀害虫危害的防治提供新的途径和方法。【方法】自越冬代二化螟幼虫体内通过组... 详细信息

【目的】二化螟是危害水稻的重要害虫,其钻蛀为害,防治困难,严重威胁水稻生产。本研究对感染二化螟昆虫病原线虫的分离筛选和感染特性进行研究,期望为水稻钻蛀害虫危害的防治提供新的途径和方法。【方法】自越冬代二化螟幼虫体内通过组织分离筛选,获得野外感染二化螟的昆虫病原线虫,室内接种实验分析分离昆虫病原线虫对二化螟的感染活性和作用特性。【结果】自然罹死二化螟幼虫体内分离获得野外感染的昆虫病原线虫N-Yz1,接种4龄二化螟幼虫导致感染并死亡,后期虫体内产生大量形态一致的侵染期线虫(IJ)。形态学观察结合rDNA-ITS序列分析,鉴定分离昆虫病原线虫隶属于斯氏线虫属,与已鉴定种小卷蛾斯氏线虫同源性达99.87%。昆虫病原线虫N-Yz1对不同龄期二化螟幼虫都有较高感染致死作用,40头(IJ)的线虫接种剂量,对低龄(2~3龄)二化螟致死速度快、致死率高,接种24 h就出现感染致死个体,48 h后幼虫全部死亡。高龄幼虫(4~6龄)感染致死速度较慢,死亡高峰发生在接种线虫后的48 h。N-Yz1接种剂量与二化螟死亡率呈显著正相关,剂量超过30 IJs/头时,4龄二化螟感染死亡率达90%以上。N-Yz1对二化螟幼虫具有明显搜索能力,在距离寄主害虫0-30 cm的范围内,通过迁移扩散,感染二化螟并导致其死亡。【结论】分离昆虫病原线虫N-Yz1具有较强的感染致死能力,表现出防治水稻钻蛀害虫二化螟的潜在应用价值。

关键词：二化螟斯氏线虫分离鉴定感染特性

印度梨形孢对盐胁迫下水稻幼苗生长及抗氧化系统的影响

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中国水稻科学 2023年第5期37卷 543-552页

作者：夏杨李传明刘琴韩光杰徐彬黄立鑫祁建杭陆玉荣徐健江苏里下河地区农业科学研究所/国家农业微生物扬州观测实验站江苏扬州225007 扬州绿源生物化工有限公司江苏扬州225008

【目的】探究印度梨形孢(Piriformospora indica)PI-020对盐胁迫下水稻幼苗生长、抗氧化相关酶活性及基因表达水平的影响。【方法】以不同浓度的PI-020菌丝体悬液接种南粳9108水培苗,显微镜观察及qPCR技术分析PI-020在水稻秧苗根系的定... 详细信息

【目的】探究印度梨形孢(Piriformospora indica)PI-020对盐胁迫下水稻幼苗生长、抗氧化相关酶活性及基因表达水平的影响。【方法】以不同浓度的PI-020菌丝体悬液接种南粳9108水培苗,显微镜观察及qPCR技术分析PI-020在水稻秧苗根系的定殖能力,并测定水稻叶片丙二醛(MDA)含量,分析水稻秧苗的表型参数、光合色素含量、抗氧化相关酶活性及基因表达的变化。【结果】与对照相比,盐胁迫条件下(100 mmol/L NaCl),PI-020定殖后,水稻叶片MDA含量显著降低。200倍菌丝体稀释液处理的效果最好,MDA含量减少了67.2%。PI-020定殖后,水稻株高、根长、叶面积、鲜质量和干质量分别增加了34.67%、23.62%、58.04%、59.53%和67.25%,与对照相比均差异显著;同时PI-020定殖还显著提高了叶片光合色素含量,抗氧化酶CAT、APX、POD活性及抗氧化相关基因OsCAT、OsAPX2、OsSOD的表达水平。【结论】印度梨形孢PI-020通过提高水稻幼苗抗氧化能力减少盐胁迫引起的氧化损伤,从而降低MDA含量,同时缓解光合色素的降解,保护了水稻光合系统,进而提高水稻耐盐性。

关键词：印度梨形孢水稻盐胁迫抗氧化酶抗氧化基因

印度梨形孢的荧光定量PCR检测及其在水稻根系的定殖测定

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江苏农业科学 2023年第2期51卷 231-235页

作者：夏杨徐彬李传明刘琴韩光杰黄立鑫祁建杭陆玉荣徐健江苏里下河地区农业科学研究所/国家农业微生物扬州观测实验站江苏扬州225007 扬州绿源生物化工有限公司江苏扬州225008

印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种促进作物生长、增强植株抗逆性的多功能根系内生真菌。传统染色镜检和PCR方法检测存在干扰误差大、灵敏度不高、难以定量等问题。基于P.indica转录延伸因子EF1α基因建立P.indica的实时荧光定量... 详细信息

印度梨形孢(Piriformospora indica)是一种促进作物生长、增强植株抗逆性的多功能根系内生真菌。传统染色镜检和PCR方法检测存在干扰误差大、灵敏度不高、难以定量等问题。基于P.indica转录延伸因子EF1α基因建立P.indica的实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并通过对水稻苗根系P.indica的定殖检测,比较与染色法、常规PCR法检测结果的差异。结果表明,利用EF1α基因序列引物扩增获得84 bp特异性产物,以特异性产物构建重组质粒pCE2-Pi作为qPCR扩增的标准品模板,建立的标准曲线线性关系良好且灵敏度高,qPCR检测下限为2.03×10^(2)copies/μL,较常规PCR敏感度提高1000倍,实现P.indica的快速、准确、定量检测。对水稻苗根系P.indica的定殖检测进一步表明,染色法检测受取样部位影响大,仅在定殖7 d的部分根系中检出,而PCR法灵敏度较低,也只在定殖7 d的根系中扩增出产物。采用qPCR方法在3~13 d的定殖周期根系中都检测到了P.indica的有效定殖,定殖7 d扩增产物最高,为1.51×10^(4)copies/μL。

关键词：印度梨形孢实时荧光定量PCR 水稻定殖检测

小卷蛾斯氏线虫N-Yz1对草地贪夜蛾的致毒作用和感染特性

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中国生物防治学报 2023年第3期39卷 542-549页

作者：刘琴黄立鑫陆玉荣韩光杰李传明夏杨祁建杭徐健江苏里下河地区农业科学研究所/国家农业微生物扬州观测实验站扬州225007 扬州绿源生物化工有限公司扬州225008

草地贪夜蛾是为害作物的重大入侵害虫,近年来迁入我国并快速扩张,严重威胁农业安全生产。昆虫病原线虫是昆虫的专化性天敌,作为防治草地贪夜蛾的生物因子具有重要应用潜力。自小卷蛾斯氏线虫N-Yz1体内分离的肠道共生菌鉴定为嗜线虫致病... 详细信息

草地贪夜蛾是为害作物的重大入侵害虫,近年来迁入我国并快速扩张,严重威胁农业安全生产。昆虫病原线虫是昆虫的专化性天敌,作为防治草地贪夜蛾的生物因子具有重要应用潜力。自小卷蛾斯氏线虫N-Yz1体内分离的肠道共生菌鉴定为嗜线虫致病杆菌,是草地贪夜蛾的主要致病因子,幼虫血腔注射100~200 cfu/头则引起害虫快速死亡。N-Yz1对低龄(2、3龄)草地贪夜蛾幼虫致死速度快、致死率高,30 IJs/头的线虫剂量接种,害虫24 h出现初始感染,48 h死亡率分别为97.0%和81.94%。高龄幼虫(4、5龄)致死速度相对较慢,48 h害虫开始感染死亡,72 h死亡率分别为81.94%和76.39%。线虫接种剂量与草地贪夜蛾幼虫死亡率呈正相关,60 IJs/头剂量接种4龄幼虫48 h感染死亡率达100%。N-Yz1对草地贪夜蛾蛹也具有感染致死作用,50、100 IJs/头剂量的线虫对1日龄蛹感染死亡率分别为53.57%和55.38%。温度对N-Yz1的感染具有明显影响,35℃线虫失去侵染活性,15℃线虫致死高峰延迟到120 h。研究结果表明,N-Yz1对草地贪夜蛾具有较强的感染致死能力,表现出防治草地贪夜蛾幼虫和蛹的潜在价值。

关键词：草地贪夜蛾小卷蛾斯氏线虫嗜线虫致病杆菌

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新型生物农药病毒增强Bt的研制与应用效果

江苏农业科学 2006年第3期34卷 72-75页

作者：徐健刘琴殷向东祁建杭秦启联扬州大学江苏扬州225009 江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007 中国科学院动物研究所北京100080

粘虫颗粒体病毒(PuGV)对苏云金杆菌(B t)具有增效作用。研制的病毒增强B t———3.0×109OB/gPuGV.1010活芽孢/gB t可湿性粉剂共毒系数达162.57。田间应用结果表明,对小菜蛾、水稻纵卷叶螟都有较好防效。

关键词：粘虫颗粒体病毒苏云金杆菌增效作用防效

KNO_(3)提高苏云金芽胞杆菌Bt-8发酵液杀虫活性的作用分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2022年第5期43卷 136-141页

作者：祁建杭刘琴刘雪梅夏杨蔡扬生李传明徐健韩光杰江苏里下河地区农业科学研究所/国家农业微生物扬州观测实验站江苏扬州225007 扬州绿源生物化工有限公司江苏扬州225008

为明确KNO_(3)对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt-8发酵液杀虫活性的增强作用,试验设计不同无机氮源和钾素的发酵配方,测定其发酵液杀虫活性并定量分析毒素蛋白含量。结果表明:添加0.1%KNO_(3)培养的Bt-8发酵液对小菜蛾3... 详细信息

为明确KNO_(3)对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt-8发酵液杀虫活性的增强作用,试验设计不同无机氮源和钾素的发酵配方,测定其发酵液杀虫活性并定量分析毒素蛋白含量。结果表明:添加0.1%KNO_(3)培养的Bt-8发酵液对小菜蛾3龄幼虫48 h的校正死亡率较对照提高16.7%(P=0.0402)。添加0.1%不同无机氮培养的Bt-8发酵液对小菜蛾的致死中量LD50与对照无显著差异,且NH_(4)^(+)的添加显著降低Bt-8发酵液杀虫活性。而添加0.1%KCl或KH_(2)PO_(4)后,Bt-8发酵液杀虫活性显著上升,LD_(50)分别为0.756和0.732 mL·L^(-1)。在对照配方中添加不同比例的KH_(2)PO_(4),其发酵液杀虫活性随钾素浓度的增加而增大,0.4%KH_(2)PO_(4)培养的Bt-8发酵稀释液对小菜蛾的校正死亡率为100%。进一步分析发酵液中毒素蛋白Cry1Ac含量发现,毒素蛋白产量与发酵液杀虫活性呈正相关。综上,KNO_(3)中钾素可提高苏云金芽胞杆菌Bt-8发酵液毒素蛋白产量并增强其杀虫活性,这为苏云金芽胞杆菌Bt-8菌株工业化发酵提供了理论参考。

关键词：苏云金芽胞杆菌发酵培养钾离子毒素蛋白杀虫活性

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苏云金杆菌毒力活性影响因子研究

江苏农业科学 2003年第3期31卷 41-42,43页

作者：徐健殷向东朱锦磊祁建杭王艳江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225002

以小菜蛾 (PlutellaxylostellaL .)为试虫 ,测定了生物、化学等多种物质对苏云金杆菌毒力活性的影响。结果表明 ,抑太保、杀虫单等杀虫剂对苏云金杆菌有显著增效作用 ;化学试剂硼酸对苏云金杆菌增效显著 ;粘虫颗粒体病毒同样可以提高苏... 详细信息

以小菜蛾 (PlutellaxylostellaL .)为试虫 ,测定了生物、化学等多种物质对苏云金杆菌毒力活性的影响。结果表明 ,抑太保、杀虫单等杀虫剂对苏云金杆菌有显著增效作用 ;化学试剂硼酸对苏云金杆菌增效显著 ;粘虫颗粒体病毒同样可以提高苏云金杆菌的毒力 ,而枯草杆菌对Bt、不同苏云金杆菌菌株间呈相加作用。

关键词：苏云金杆菌毒力活性影响因子生物防治生物农药

苏云金杆菌以色列亚种生物杀蚊幼颗粒剂及其作用特性

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中国血吸虫病防治杂志 2013年第1期25卷 52-55页

作者：徐健赵松刘琴祁建杭李传明王艳孙俊韩光杰马谈斌江苏里下河地区农业科学研究所扬州225007 江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的研制苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringrensis var.israelesis,Bti)颗粒剂新剂型并测定其杀灭蚊幼虫效果。方法分离筛选Bti菌株,采用载体湿法包衣试制成Bti颗粒剂。通过模拟现场试验、持效性试验和外环境试验分别测定该制剂对... 详细信息

目的研制苏云金杆菌以色列亚种(Bacillus thuringrensis var.israelesis,Bti)颗粒剂新剂型并测定其杀灭蚊幼虫效果。方法分离筛选Bti菌株,采用载体湿法包衣试制成Bti颗粒剂。通过模拟现场试验、持效性试验和外环境试验分别测定该制剂对蚊幼虫杀灭效果、持效期及在外环境的稳定性。结果野外分离的Bti菌株对库蚊、伊蚊幼虫的LC50分别为0.461 0μl/L和1.713 3μl/L。试制的216 ITU/mg Bti颗粒剂1～3 g/m2施药后淡色库蚊幼虫死亡率为83.3%～100%,3～5g/m2埃及伊蚊幼虫死亡率达72.7%～100%。0.5 g/m2颗粒剂处理的水体13 d后接种3龄淡色库蚊幼虫死亡率仍高达55.3%。外环境试验中,216 ITU/mg Bti颗粒剂2～4 g/m2对蚊幼虫1～3 d防治效果达92.4%～100%,20 d达51.6%～75.7%。结论采用分离菌株研制的Bti颗粒剂具有较好的杀灭蚊幼虫效果,在外环境中试用持效期长且稳定性好。

关键词：疟疾蚊幼虫苏云金杆菌以色列亚种颗粒剂

苏云金杆菌与EpNPV混用对茶毛虫的增效作用

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江苏农业科学 2010年第5期38卷 165-167页

作者：刘琴徐健唐美君祁建杭施建德马谈斌江苏里下河地区农业科学研究所江苏扬州225007 中国农业科学院茶叶研究所浙江杭州310008

采用生物测定方法,测定茶毛虫核型多角体病毒（Euproctis pseudoconspersa nucleopolyhedogsis virus,EpNPV）和苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）的联合作用。5组不同配比对茶毛虫2龄幼虫的共毒系数在177.3~221.7之间,表明Bt与EpNPV混用对茶毛虫具有显著增效作用。其中以1.0万PIB/μL EpNPV与2 000 IU/μL Bt混用增效作用最明显,LC50为984.215μg/mL,共毒系数为221.7。多点田间药效试验表明,EpNPV.Bt制剂用1 500 mL/hm2,药后7 d对茶毛虫的防效为79.80%~92.84%,药后14 d对茶毛虫的防效为94.99%~95.80%。

关键词：苏云金杆菌茶毛虫核型多角体病毒茶毛虫增效作用