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CD25siRNA纳米粒抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥的实验研究

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解放军医学杂志 2015年第4期40卷 297-302页

作者：石韵洁秦琴赵敏重庆医科大学附属第一医院眼科重庆400016

目的探讨EntransterTM-CD25siRNA纳米粒对大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应的抑制及延长角膜植片存活时间的作用。方法以SD大鼠为受体(n=96),Wistar大鼠为供体(n=48)。受体右眼碱烧伤后14d行穿透性角膜移植手术。术后将大鼠随机分为阴... 详细信息

目的探讨EntransterTM-CD25siRNA纳米粒对大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应的抑制及延长角膜植片存活时间的作用。方法以SD大鼠为受体(n=96),Wistar大鼠为供体(n=48)。受体右眼碱烧伤后14d行穿透性角膜移植手术。术后将大鼠随机分为阴性对照组(A组)、对照siRNA治疗组(B组)、治疗1组(C组,术后2h给予EntransterTMCD25siRNA复合物点眼)、治疗2组(D组,术后2h和术后第7天给予EntransterTM-CD25siRNA复合物点眼),每组24只。裂隙灯下观察大鼠角膜情况并对其排斥反应进行评分,HE染色检测角膜组织病理学变化,透射电镜观察植片超微结构改变,免疫组化和荧光定量PCR法检测角膜CD25的表达。结果与A、B组比较,C、D两组角膜植片存活时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色显示A、B组角膜植片增厚、水肿,胶原纤维排列紊乱,大量炎性细胞浸润;C、D组植片排斥程度较A、B组明显减轻。免疫组化染色显示各组角膜上皮层、基质层、内皮层均有CD25表达,且在A、B组中的表达明显多于C、D组。透射电镜观察显示C、D组角膜植片基质层成纤维细胞凋亡及坏死较A、B组减轻,超微结构改变具有明显差异。荧光定量PCR检测显示A、B两组角膜植片中CD25 mRNA的表达明显高于C、D组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD25siRNA纳米粒可减轻角膜移植术后的免疫排斥反应并有效延长角膜植片存活时间。

关键词：角膜移植移植物排斥纳米结构白细胞介素2受体α亚单位

CD25siRNA纳米粒抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥的实验研究

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CD25siRNA纳米粒抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥的实验研究

作者：石韵洁重庆医科大学

学位级别：硕士

目的探讨EntransterTM-CD25siRNA纳米粒抑制大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应及延长角膜植片存活时间的作用。本实验分为两部分：实验一：探讨非病毒载体EntransterTM-CD25siRNA、脂质体-CD25siRNA对正常SD大鼠角膜转染率和转染毒性,... 详细信息

目的探讨EntransterTM-CD25siRNA纳米粒抑制大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应及延长角膜植片存活时间的作用。本实验分为两部分：实验一：探讨非病毒载体EntransterTM-CD25siRNA、脂质体-CD25siRNA对正常SD大鼠角膜转染率和转染毒性,筛选最佳转染试剂实验二：通过纳米载体介导CD25siRNA来干预高危角膜移植术后的大鼠角膜,探讨CD25siRNA在角膜移植排斥中的作用方法实验一：制备EntransterTM-CD25siRNA复合物(EntransterTM组)、脂质体-CD25siRNA复合物(脂质体组)、CD25siRNA (siRNA组)和生理盐水(对照组)。将80只正常成年SD大鼠随机法分为四组,均选右眼为实验眼,在裂隙灯下刮除SD大鼠角膜上皮,分别将上述四种转染试剂按照相同剂量点眼于所有模型大鼠眼表,于点眼后12h,24h,3d,7d在裂隙灯下观察大鼠眼球情况,行荧光显微镜检测四种转染试剂的转染率,行HE染色、TUNEL染色检测转染试剂对角膜的毒性,行CD11b抗体检测角膜对转染试剂的免疫应答。实验二：以96只SD大鼠为受体,48只Wistar大鼠为供体。受体右眼碱烧伤后14天行穿透性角膜移植手术。术后将大鼠随机分为4组：A组为阴性对照组;B组为EntransterTM-control CD25siRNA治疗组;C组为EntransterTM-CD25siRNA治疗组;D组为二次治疗组,除了术后给予EntransterTM-CD25siRNA点眼外,术后第7天再次点眼。自术后第1d起每日在裂隙灯下观察大鼠角膜情况并对其排斥情况进行评分。行HE染色检测角膜组织病理情况、透射电镜观察植片超微结构、免疫组化和荧光定量PCR法检测角膜CD25的表达。结果实验一：由荧光显微镜检测结果显示,对照组实验模型无阳性结果,EntransterTM组荧光表达数量及强度高于脂质体组,siRNA组荧光表达早但至24h已完全衰减。HE染色、TUNEL染色、CDllb抗体检测结果显示脂质体转染试剂引起的角膜炎性反应、角膜细胞凋亡和免疫应答明显强于其余三组。实验二：C、D两组角膜植片存活时间相比A、B两组明显延长,差异具有统计学意义(p<0.05)。HE显示A、B组角膜植片增厚、水肿,胶原纤维排列紊乱,大量炎性细胞浸润;C、D组植片排斥程度较A、B组明显减轻。免疫组化显示CD25分子在各组角膜上皮层、基质层、内皮层均有表达,A、B组中的表达明显多于C、D组。透射电镜结果显示实验组角膜植片基质层成纤维细胞凋亡与坏死较对照组减轻,超微结构改变具有明显差异。A、B两组角膜植片中CD25 mRNA的表达明显高于C、D两组,差异具有统计学意义。结论1.选用非病毒纳米EntransterTM作为载体,转染CD25siRNA于正常SD大鼠角膜,具有转染效率高、低毒性、不引起角膜免疫反应的特点,为角膜疾病基因治疗选择合适的载体提供了基础。2. CD25siRNA纳米粒可减轻角膜移植术后免疫排斥反应,有效延长角膜植片存活时间。

关键词：角膜移植移植物排斥纳米结构白细胞介素2受体α亚单位

CD25siRNA基因转染可提高大鼠穿透性角膜移植片的存活率

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第三军医大学学报 2015年第15期37卷 1543-1549页

作者：秦琴石韵洁赵青青陈元吴静赵敏重庆医科大学附属第一医院眼科重庆市眼科学重点实验室重庆400016

目的探讨CD25siRNA基因转染对大鼠穿透性角膜移植排斥反应的作用,及术后植片中IL-10和FOXP3的含量变化。方法配制50μL EntransterTM-反义CD25siRNA和50μL EntransterTMCD25siRNA点眼纳米转染试剂,50μL生理盐水为对照。建立Wistar-SD... 详细信息

目的探讨CD25siRNA基因转染对大鼠穿透性角膜移植排斥反应的作用,及术后植片中IL-10和FOXP3的含量变化。方法配制50μL EntransterTM-反义CD25siRNA和50μL EntransterTMCD25siRNA点眼纳米转染试剂,50μL生理盐水为对照。建立Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型,右眼为术眼,采用单纯随机抽样方法,分为对照组(A组)、EntransterTM-反义CD25siRNA转染组(B组)和EntransterTM-CD25siRNA转染组(C组),每组28只。术后每日对植片行临床评分并分别于3、7、14、21 d行HE染色、免疫组化、Western blot和qRT-PCR检测。结果角膜植片生存曲线显示CD25siRNA转染组角膜植片的生存率显著优于其余2组(P0.05)。结论 CD25siRNA转染通过上调抗炎性细胞因子IL-10表达,抑制炎症反应,进而延长角膜植片生存时间,提高植片生存率。

关键词： CD25siRNA 移植排斥反应纳米转染试剂 IL-10 FOXP3

小牛血去蛋白提取物滴眼液治疗中重度干眼的临床研究

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中国实用眼科杂志 2015年第5期33卷 502-506页

作者：陈元赵敏石韵洁秦琴张琪重庆医科大学附属第一医院眼科 400016

目的观察小牛血去蛋白提取物滴眼液治疗中重度干眼的效果。方法采用随机双盲交叉设计研究。对2013年9月至2014年4月于重庆医科大学附属第一医院眼表门诊确诊为中重度干眼的患者40例（80只眼），按检查的先后顺序随机分为A组（20例40只... 详细信息

目的观察小牛血去蛋白提取物滴眼液治疗中重度干眼的效果。方法采用随机双盲交叉设计研究。对2013年9月至2014年4月于重庆医科大学附属第一医院眼表门诊确诊为中重度干眼的患者40例（80只眼），按检查的先后顺序随机分为A组（20例40只眼）和B组（20例40只眼）。治疗第一阶段A组接受自体血清治疗，B组接受小牛血去蛋白提取物治疗；第一阶段结束后停药2周，作为洗脱期；第二阶段两组用药交换。分别在两个阶段的治疗前，治疗后2周、1个月各时间点检测并评定患者主客观表现评分。结果眼部症状视疲劳、干涩感、异物感、烧灼感、畏光、疼痛、眼表疾病指数（OSDI）评分、眼红、视力在A组和B组两种药物治疗后均较治疗前明显好转，差异有统计学意义（P〈0．05）。客观体征荧光素钠染色评分、BUT、Sit在A、B两组治疗前后亦有明显改善，差异有统计学意义（P〈0．05）。通过交叉设计方差分析比较以上主客观症状在两种药物间和两种给药顺序间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论小牛血去蛋白提取物滴眼液在治疗中重度干眼（尤其是中度干眼），对缓解眼部症状，促进角膜上皮修复，延长泪膜破裂时间均有明显疗效，其效果与自体血清相当。

关键词：小牛血去蛋白提取物滴眼液自体血清中重度干眼治疗效果

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶和玻璃酸钠滴眼液对翼状胬肉术后眼表修复观察

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中医眼耳鼻喉杂志 2017年第3期7卷 144-145,154页

作者：石韵洁杜慧斌肖旗彬乐山市人民医院眼科四川乐山614000

目的探讨并对比小牛血去蛋白提取物眼用凝胶和玻璃酸钠滴眼液在翼状胬肉切除术后眼表修复的临床疗效。方法选择单侧原发性翼状胬肉患者60例行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术，术后随机分为两组，分别应用小牛血去蛋白提取物眼... 详细信息

目的探讨并对比小牛血去蛋白提取物眼用凝胶和玻璃酸钠滴眼液在翼状胬肉切除术后眼表修复的临床疗效。方法选择单侧原发性翼状胬肉患者60例行翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植术，术后随机分为两组，分别应用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶（A组）及玻璃酸钠眼液（B组）点眼。术后随访3个月，观察两种滴眼液在翼状胬肉术后角膜修复中的治疗效果。结果A组患者术后3d时畏光、流泪症状开始减轻，4d时异物感明显减轻；B组术后4d时畏光、流泪症状减轻，6d时仍有轻度异物感。角膜上皮平均修复时间A组（2．6±1．0d）较B组（3．6±1．1d）缩短，差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗前A组与B组BUT、Sit差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗后3月A组BUT、Sit较B组明显增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论小牛血去蛋白提取物眼用凝胶对翼状胬肉术后眼表修复的作用较玻璃酸钠滴眼液显著。

关键词：翼状胬肉眼表小牛血去蛋白提取物眼用凝胶玻璃酸钠滴眼液

混合联肢PEC墙结构基于合理失效模式的性能化设计方法研究

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振动与冲击 2024年第7期43卷 266-277,289页

作者：周巧玲赵仕兴苏明周石韵四川省建筑设计研究院有限公司成都610041 西安建筑科技大学土木工程学院西安710055 西安石油大学土木工程学院西安710065

基于性能化设计理念,提出了混合联肢PEC墙结构基于合理失效模式的性能化设计方法:以结构达目标位移时实现合理失效模式作为性能目标,基于能量平衡原理确定结构设计基底剪力,并给出符合失效模式的侧向力分布;依据给定目标塑性耦连比分别... 详细信息

基于性能化设计理念,提出了混合联肢PEC墙结构基于合理失效模式的性能化设计方法:以结构达目标位移时实现合理失效模式作为性能目标,基于能量平衡原理确定结构设计基底剪力,并给出符合失效模式的侧向力分布;依据给定目标塑性耦连比分别求解钢连梁和PEC墙肢底部加强区内力需求;采用塑性设计方法设计钢连梁和PEC墙肢底部加强区截面,采用弹性设计方法设计PEC墙肢非加强区截面,保证结构实现预期性能目标。依据提出的基于合理失效模式的性能化设计方法,设计了12层混合联肢PEC墙算例结构,对其进行Pushover分析和弹塑性动力时程分析,验证了该方法的可行性。基于合理失效模式的性能化设计方法设计的混合联肢PEC墙结构抗震性能良好,地震作用下,各层钢连梁首先剪切屈服耗散能量,然后PEC墙肢底部形成弯曲塑性铰,塑性铰分布及发展过程符合预期,实现了“两阶段耗能体系”设计目标。

关键词：混合联肢墙抗震性能目标位移合理失效模式性能化设计方法

混合联肢PEC墙结构简化力学分析模型及承载力计算

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天津大学学报（自然科学与工程技术版） 2024年第2期57卷 186-200页

作者：周巧玲赵仕兴苏明周石韵周婷西安建筑科技大学土木工程学院西安710055 四川省建筑设计研究院有限公司成都610095 西安石油大学土木工程学院西安710065 天津大学建筑学院天津300072

为克服钢筋混凝土墙肢底部易发生脆性破坏的缺点,提高联肢剪力墙结构的抗震性能,采用PEC剪力墙肢代替混合联肢剪力墙结构中的钢筋混凝土剪力墙肢,形成新型混合联肢PEC墙结构.通过改变钢连梁截面尺寸、PEC墙肢宽厚比以及楼层数形成3个系... 详细信息

为克服钢筋混凝土墙肢底部易发生脆性破坏的缺点,提高联肢剪力墙结构的抗震性能,采用PEC剪力墙肢代替混合联肢剪力墙结构中的钢筋混凝土剪力墙肢,形成新型混合联肢PEC墙结构.通过改变钢连梁截面尺寸、PEC墙肢宽厚比以及楼层数形成3个系列共8个模型,研究了弹性耦连比和改变弹性耦连比的方式对混合联肢PEC墙结构滞回性能和应力分布的影响.结果表明:各个系列模型滞回曲线均饱满而稳定,未出现明显捏缩现象,证明混合联肢PEC墙结构抗震性能好、耗能能力强,适用于高烈度抗震设防地区;与已有联肢墙结构研究成果一致,弹性耦连比是影响混合联肢PEC墙结构整体性能的主要因素,并不会因为实现方式不同而影响结构应力分布规律;为保证结构达极限承载能力状态时各层钢连梁均发生剪切屈服并充分发展塑性,同时避免受拉侧墙肢发生延性较差的小偏心受拉破坏,应控制弹性耦连比小于等于70%;基于有限元模型分析结果,探讨了混合联肢PEC墙结构受力机理,建立了结构简化力学分析模型,给出了极限承载力计算公式;试验及有限元模型分析结果与理论计算结果误差在15%以内,且均为理论值偏低,证明本文提出的混合联肢PEC墙结构极限承载力计算公式精度较高且偏于安全,可用于计算结构极限承载力.

关键词： PEC剪力墙钢连梁弹性耦连比简化力学分析模型极限承载力

原发性开角型青光眼患者视网膜神经纤维层厚度和视盘参数变化及其相关性分析

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实用心脑肺血管病杂志 2017年第B12期25卷 7-9页

作者：王丹万奇肖旗彬杜慧斌毕娟卢建群石韵洁四川省乐山市人民医院眼科 614000

目的观察原发性开角型青光眼患者视网膜神经纤维层厚度和视盘参数变化,并分析其相关性。方法选取2015年7月—2016年12月在乐山市人民医院就诊的原发性开角型青光眼患者93例,共174只眼,根据Hart和Becker视野分期法分为早期组41例(49只眼... 详细信息

目的观察原发性开角型青光眼患者视网膜神经纤维层厚度和视盘参数变化,并分析其相关性。方法选取2015年7月—2016年12月在乐山市人民医院就诊的原发性开角型青光眼患者93例,共174只眼,根据Hart和Becker视野分期法分为早期组41例(49只眼)、中期组55例(69只眼)、晚期组38例(56只眼),如双眼视野损伤不一致则按照视野损伤程度分别列入不同组。使用光学相干断层成像术(OCT)检测患者视网膜神经纤维层(RNFI)厚度及视盘参数,并分析视盘参数与RNFI厚度的相关性。结果中期组和晚期组患者均值RNFL厚度、鼻侧RNFL厚度、上方RNFL厚度、颞侧RNFL厚度、下方RNFL厚度小于早期组,晚期组患者均值RNFL厚度、鼻侧RNFL厚度、上方RNFL厚度、颞侧RNFL厚度、下方RNFL厚度小于中期组(P0.05)。Pearson相关性分析结果显示,盘沿面积与RNFL厚度呈正相关(P<0.05);杯盘比和垂直杯盘比与RNFL厚度呈负相关(P<0.05);除鼻侧RNFL厚度外,视杯容积与其他RNFL厚度呈负相关(P<0.05)。结论原发性开角型青光眼随病程发展RNFL厚度逐渐变薄、盘沿面积逐渐减少、杯盘面积比逐渐扩大,且RNFL厚度与视盘参数变化有关。

关键词：原发性开角型青光眼光学相干断层成像术视网膜神经纤维层视盘参数

基于单元统整视域下的童话教学——巧用方法促读写

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考试周刊 2024年第17期 14-17页

作者：石韵欣福州市仓山区第八中心小学

学生们从婴幼儿时期最先接触的文章体裁便是童话，童话丰富的故事情节和深入人心的人物形象陪伴着孩子的成长，有的人物形象成为孩子们成长的榜样，而有的反面人物成为孩子们引以为戒的例子。阅读童话成为学生所喜爱的事情，带着思考的... 详细信息

学生们从婴幼儿时期最先接触的文章体裁便是童话，童话丰富的故事情节和深入人心的人物形象陪伴着孩子的成长，有的人物形象成为孩子们成长的榜样，而有的反面人物成为孩子们引以为戒的例子。阅读童话成为学生所喜爱的事情，带着思考的阅读却并不是一件容易的事情。

关键词：单元统整童话语文要素读写结合