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2018~2020年江南大学附属医院血流感染病原菌分布及耐药率分析

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中国现代医生 2022年第16期60卷 120-123,131页

作者：朱岚申卫红刘敏江南大学附属医院检验科江苏无锡214041

目的探讨2018~2020年江南大学附属医院细菌室血培养检出的阳性菌株的分布及其相关药敏的数据,为医院科室挑选抗微生物用药提供理论数据。方法收集2018~2020年江南大学附属医院收治的住院患者血培养阳性菌株,采用仪器法或手工法进行药... 详细信息

目的探讨2018~2020年江南大学附属医院细菌室血培养检出的阳性菌株的分布及其相关药敏的数据,为医院科室挑选抗微生物用药提供理论数据。方法收集2018~2020年江南大学附属医院收治的住院患者血培养阳性菌株,采用仪器法或手工法进行药敏试验,从而得出2018~2020年血培养分离出临床病原菌的分布情况及耐药性。结果 3年间检验科微生物室共分离出血培养病原菌1816株,其中革兰阴性杆菌1058株,占58.26%,革兰阳性球菌682株,占37.56%,真菌76株,占4.18%。其中前几位主要为肺炎克雷伯菌(461株,25.38%)、凝固酶阴性葡球菌(301株,16.58%)、大肠埃希菌(335株,18.44%)、金黄色葡萄球菌(205株,11.29%)和肠球菌属(118株,6.48%)。药物敏感试验发现:革兰阴性杆菌对哌拉西林、头孢唑啉以及氨苄西林的耐药率高于其他抗菌药物;G-细菌对阿米卡星以及多黏菌素B、碳青酶烯类敏感度较高。另外,革兰阳性球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的耐药率分别为40.63%和65.32%。革兰阳性球菌对大部分青霉素相关药物、环丙沙星、四环素等抗菌药物的耐药性逐渐上升,对万古霉素、利奈唑胺均敏感。结论 2018~2020年江南大学附属医院住院患者血培养阳性细菌大部分为G-细菌,其中肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌这三种细菌的耐药率逐渐上升。因此,临床细菌室和必须定期监测阳性细菌的耐药率,从而为临床合理用药提供理论依据。

关键词：血培养血流感染耐药性抗菌药物病原菌

外周血滤泡调节性T细胞/滤泡辅助性T细胞及相关细胞因子在尘螨变应性哮喘患儿中的变化及意义

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中华实用儿科临床杂志 2022年第23期37卷 1793-1796页

作者：童晓龚芳管超姣蒋昱岑张冰洁周雪梅季拓申卫红江南大学附属医院儿科无锡214000 江南大学附属医院检验科无锡214000 湖州市第一人民医院儿科湖州313000 江南大学医学院无锡214122

目的探讨尘螨变应性哮喘患儿外周血滤泡调节性T(T_(FR))细胞/滤泡辅助性T(T_(FH))细胞及相关细胞因子变化,并探讨其临床意义。方法回顾性研究。选取2021年1月至12月江南大学附属医院25例急性发作期尘螨变应性哮喘患儿(哮喘组)和同期16... 详细信息

目的探讨尘螨变应性哮喘患儿外周血滤泡调节性T(T_(FR))细胞/滤泡辅助性T(T_(FH))细胞及相关细胞因子变化,并探讨其临床意义。方法回顾性研究。选取2021年1月至12月江南大学附属医院25例急性发作期尘螨变应性哮喘患儿(哮喘组)和同期16例性别和年龄相匹配的健康体检儿童(健康对照组)作为研究对象。采用流式细胞法检测2组外周血TFR细胞、TFH细胞比例;流式细胞微球芯片捕获法检测2组细胞因子[白细胞介素(IL)-10、IL-21]水平;荧光酶免疫技术检测2组尘螨特异性IgE(sIgE)水平;血细胞分析仪检测外周血嗜酸性粒细胞比例。采用t检验进行组间分析,指标间相关性采用Spearman秩相关分析。结果哮喘组TFR细胞/TFH细胞免疫失衡。与健康对照组比较,哮喘组TFR细胞比例较低[(0.11±0.03)%比(0.13±0.03)%],T_(FH)细胞比例较高[(5.07±1.75)%比(3.80±1.60)%],T_(FR)细胞/TFH细胞比值较低(0.02±0.01比0.05±0.03),差异均有统计学意义(t=2.29、2.30、3.71,均P<0.05)。与健康对照组比较,哮喘组IL-21水平较高[(547.85±195.13)ng/L比(404.94±110.41)ng/L],IL-10水平较低[(10.18±3.49)ng/L比(14.79±5.65)ng/L],差异均有统计学意义(t=2.60、3.15,均P<0.05)。哮喘组T_(FR)细胞/T_(FH)细胞比值与sIgE呈负相关(r=-0.4442,P=0.0261),与嗜酸性粒细胞百分比无相关性(r=-0.1352,P=0.5193)。结论尘螨变应性哮喘患儿存在T_(FR)细胞/T_(FH)细胞亚群失衡,失衡的T_(FR)细胞、T_(FH)细胞及其相关细胞因子IL-10、IL-21可能参与调控哮喘sIgE的生成。

关键词：滤泡调节性T细胞滤泡辅助性T细胞尘螨变应性哮喘白细胞介素-10 白细胞介素-21

灵芝皇胶囊及其组方药材多糖酸水解柱前衍生-HPLC指纹图谱的共性研究

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灵芝皇胶囊及其组方药材多糖酸水解柱前衍生-HPLC指纹图谱的共性...

作者：申卫红广州中医药大学

学位级别：硕士

中药多糖是大分子物质,主要具有免疫调节活性及抗肿瘤作用。多采用苯酚-浓硫酸比色法测定总多糖的含量,关于指纹图谱的研究较少。中药指纹图谱技术是国内外公认最有效的中药质控方法。本研究选择含有多糖成分的中药复方灵芝皇胶囊(由灵... 详细信息

中药多糖是大分子物质,主要具有免疫调节活性及抗肿瘤作用。多采用苯酚-浓硫酸比色法测定总多糖的含量,关于指纹图谱的研究较少。中药指纹图谱技术是国内外公认最有效的中药质控方法。本研究选择含有多糖成分的中药复方灵芝皇胶囊(由灵芝、黄精、枸杞子、麦冬、白术、茯苓、五味子等药材组成)及其含有较多多糖成分的组方药材灵芝、黄精、枸杞子、麦冬为研究对象,采用中药指纹图谱技术,建立多糖酸水解指纹图谱的方法,及初步鉴别各多糖结构组成,以期得到多糖酸水解指纹图谱的共性方法。目的:1、探讨灵芝皇胶囊及其组方药材灵芝、黄精、麦冬、枸杞子酸水解柱前衍生-HPLC图谱方法的可行性。2.筛选灵芝皇胶囊及其组方药材灵芝、黄精、麦冬、枸杞子供试品溶液的制备方法,及评价多糖的稳定性。3、比较建立的灵芝、黄精、枸杞子、麦冬指纹图谱共有模式的差异及共性。方法:1、采用中药HPLC特征图谱技术,建立灵芝皇胶囊及其组方药材灵芝、黄精、麦冬、枸杞子多糖的HPLC图谱分析方法,各分析10批样品,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)进行相似度分析,生成特征图谱共有模式。2、筛选样品多糖提取方法,采用在温度为110℃,0.4mol/L三氟乙酸(TFA)水解,以0.5 mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为衍生化试剂,筛选水解时间和衍生时间。3、建立灵芝皇胶囊、灵芝、黄精、枸杞子、麦冬多糖酸水柱前衍生-HPLC指纹图谱分析方法,分别生成指纹图谱共有模式,并进行相似度评价,并探讨灵芝皇胶囊主要特征峰与单位药材的峰位归属。4、采用单糖对照品保留时间定性,分别鉴别以上样品多糖的单糖构成。5、对灵芝、黄精、枸杞子、麦冬多糖酸水解柱前衍生生成的指纹图谱共有模式进行比较,探讨其共性与差异。成果:1、建立的灵芝皇胶囊多糖酸水解柱前衍生-HPLC指纹图谱的方法具有可行性,并基本明确峰位归属。(1)确定了灵芝皇胶囊多糖溶液浓度为0.18g/mL,乙醇醇沉浓度为80%,进样量为10 μL。确定了灵芝皇胶囊多糖溶液的最佳水解时间为6 h,衍生时间为60 min。(2)10批样品共标示出14个共有特征峰,相似度为0.976-0.997。鉴别了 8个特征峰,分别为D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、L-岩藻糖。其中,峰10(D-葡萄糖)是最强峰,占总峰面积的85.0%以上。(3)主要归属灵芝、麦冬、白术、茯苓;其次为峰11(D-半乳糖),主要归属灵芝、黄精、麦冬、茯苓;峰1(D-甘露糖)主要归属药材麦冬、茯苓、五味子;峰14(L岩藻糖)主要归属灵芝、白术、茯苓。2、建立可行的灵芝、黄精、麦冬和枸杞子多糖酸水解柱前衍生-HPLC指纹图谱的方法,方法学符合中药指纹图谱技术要求。(1)确定了灵芝、黄精、枸杞子和麦冬多糖溶液生药浓度分别为0.20g/mL、0.25 g/mL、0.30g/mL、0.25g/mL;乙醇醇沉浓度均为80%;供试品溶液浓度分别为0.04 g/mL、0.025 g/mL、0.06 g/mL、0.025 g/mL;进样量分别为 30 μL、20μL、30μL、30μL;确定了其多糖溶液的最佳水解时间分别为6h、7h、6h、6h,衍生时间为100min、40 min、60 min、60 min。(2)10批灵芝多糖样品共标示出12个共有峰,相似度达到0.973-0.992。鉴别出七个色谱峰,分别为D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、L岩藻糖等组成的,其中主要由D-葡萄糖(70%)组成,其次为D-半乳糖、D-甘露糖、L-岩藻糖。(3)10批黄精多糖标示出10个共有峰,相似度非常高(均大于0.99)。鉴别出7个色谱峰,分别为D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。以D-半乳糖(55%)为主,其次为D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-甘露糖。(4)10批枸杞子共标出12个共有峰,相似度非常高(均大于0.99)。鉴别出8个色谱峰,分别为D-甘露糖、L-鼠李糖、D-葡萄糖醛酸、D半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖。阿拉伯糖(45%))最高,其次为D-半乳糖、D-木糖、D-半乳糖醛酸。(5)10批麦冬标示出9个共有峰,相似度较高,大于0.98。鉴别出8个色谱峰,分别为D-甘露糖L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、L-岩藻糖。以D-半乳糖(50.0%)最高,其次为D-甘露糖、D-葡萄糖、D-阿拉伯糖。3、灵芝、黄精、枸杞子及麦冬多糖酸水解-HPLC指纹图谱的方法的共性及差异。(1)供试品溶液制备方法的共性①一般采用80%乙醇,超声1-2次,可去除脂溶性成分。②采用水提1-2次,多糖即可提取完全,粗多糖浓度为0.4g/mL-0.6g/mL;乙醇醇沉浓度为80%;

关键词：灵芝皇胶囊多糖酸水解柱前衍生指纹图谱

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航空航天装备的轻量化:挑战与未来

航空学报 2024年第5期45卷 1-7页

作者：张卫红唐长红西北工业大学陕西省空天结构技术重点实验室西安710072 航空工业第一飞机设计研究院西安710089

轻量化是航空航天装备研发领域永恒的主题,它对装备的综合性能和服役效能具有决定性影响。在过去的数十年里,一系列高性能优化设计方法、新材料和制造工艺技术的研发和应用,不断推动航空航天装备轻量化水平的提升。然而,随着新一代装备... 详细信息

轻量化是航空航天装备研发领域永恒的主题,它对装备的综合性能和服役效能具有决定性影响。在过去的数十年里,一系列高性能优化设计方法、新材料和制造工艺技术的研发和应用,不断推动航空航天装备轻量化水平的提升。然而,随着新一代装备对综合性能和多功能需求的不断增加,现有的轻量化设计制造技术正面临着日益严峻的挑战。因此,本文重点探讨了航空航天装备研发的总体设计、机电系统设计、材料与结构、高性能制造与装配等主要环节,并分析了轻量化技术在未来的发展趋势。

关键词：航空航天装备轻量化设计与制造装备总体技术材料与结构技术高性能制造与装配

小鼠Foxp3-△PRD/△FKH基因克隆及其功能的研究

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小鼠Foxp3-△PRD/△FKH基因克隆及其功能的研究

作者：申卫红江苏大学

学位级别：硕士

目的:克隆小鼠Foxp3-△PRD(N末端富含脯氨酸区域缺失的Foxp3片段)和Foxp3-△FKH(C末端FKH区域缺失的Foxp3片段)基因,构建带穿膜序列PTD(protein transduction domain)的原核表达载体,表达、纯化并复性PTD-△PRD、PTD-△FKH、PTD-eGFP-△PRD、PTD-eGFP-△FKH融合蛋白,并初步探讨其生物学功能,为进一步研究Foxp3的免疫抑制机制奠定基础。方法:(1)利用PCR技术扩增获得小鼠△PRD和△FKH基因,将其克隆至pMD18-T载体,进行单、双酶切鉴定及序列分析。(2)将测序正确的△PRD和△FKH基因克隆到带穿膜序列的pET28a-PTD和pET28a-PTD-eGFP原核表达载体中,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中表达,获得带有His标签的融合蛋白,利用Bio-Rad公司的镍柱纯化融合蛋白,并进行蛋白复性。(3)利用Western-blot技术检测融合蛋白表达的正确性,流式细胞术和Western-blot检测融合蛋白穿膜进入小鼠T淋巴细胞瘤株EL-4细胞中的能力,并通过混合淋巴细胞反应初步分析融合蛋白对T细胞活化增殖能力的调节。结果:成功构建了具有穿膜功能的原核表达载体,表达、纯化并复性了带His标签的融合蛋白,Western-blot证实了融合蛋白表达的准确性,流式细胞术和Western-blot证实PTD能携带Foxp3相关蛋白有效的进入细胞内,同时经混合淋巴细胞反应证明PTD-△PRD融合蛋白抑制T细胞活化增殖的能力高于PTD-△FKH融合蛋白,说明C末端的FKH区域在Foxp3的抑制功能中起重要的作用,而N末端的富含脯氨酸区域也具有一定的抑制功能。结论:成功表达具有生物学活性的带穿膜序列的Foxp3相关融合蛋白,Western-blot和流式细胞术证实融合蛋白能有效地进入细胞并定位于细胞核内,为进一步研究Foxp3的其它功能片段及其免疫抑制机制奠定了基础。

关键词： PTD Foxp3 △PRD △FKH 免疫抑制

FOXP3在急性丙型肝炎患者中的表达及其临床意义

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南京医科大学学报（自然科学版） 2010年第2期30卷 242-244页

作者：申卫红朱岚张晴菊无锡市第三人民医院检验科江苏无锡214041

目的:通过研究急性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者外周血中FOXP3的表达,初步探讨其在急性丙型肝炎发病机制中的临床意义。方法:选择急性丙型肝炎患者与健康人各21例,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T细胞的数量;ELISA试剂盒检测患者和正常... 详细信息

目的:通过研究急性丙型肝炎病毒(HCV)感染患者外周血中FOXP3的表达,初步探讨其在急性丙型肝炎发病机制中的临床意义。方法:选择急性丙型肝炎患者与健康人各21例,用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T细胞的数量;ELISA试剂盒检测患者和正常对照组外周血培养上清中Th2型细胞因子(IL-10)和Th1型细胞因子(IL-2)的表达;RT-PCR检测FOXP3的mRNA表达。结果:在急性HCV患者外周血中CD4+CD25+T细胞约占CD4+T细胞(28.2±2.1)%,显著高于正常人外周血中CD4+CD25+T细胞(2.7±0.7)%(P=0.032);急性HCV组外周血CD4+CD25+T细胞高表达FOXP3;急性HCV组外周血单个核细胞(PBMC)培养上清主要分泌IL-10,而IL-2分泌无显著变化。结论:急性HCV感染者Th1免疫抑制可能与外周血CD4+CD25+T细胞高表达FOXP3有关。

关键词： FOXP3 丙型肝炎急性

犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其重组蛋白的抗原性研究

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犬瘟热病毒N蛋白基因的克隆、原核表达及其重组蛋白的抗原性研究

作者：申卫红新疆农业大学

学位级别：硕士

犬瘟热是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）感染犬或其它食肉目动物引起的高传染性、致死性疾病,以双相热、红疹、结膜炎、白细胞减少及中枢神经系统损害为主要特征,为危害特种养殖业发展的一类重要疾病。因该病没有特效药物... 详细信息

犬瘟热是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）感染犬或其它食肉目动物引起的高传染性、致死性疾病,以双相热、红疹、结膜炎、白细胞减少及中枢神经系统损害为主要特征,为危害特种养殖业发展的一类重要疾病。因该病没有特效药物进行治疗,所以对本病的预防和早期诊断就尤为重要。本研究主要包括以下三部分: 1犬瘟热N蛋白基因的克隆及序列分析参考GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列,用oligo6.0软件设计一对特异性引物,从患犬瘟热的犬全血样品中提取总RNA,经RT-PCR扩增得到1 572bp的基因片段,将其插入pMD18-T克隆载体中构建了pMD18-CDV N重组质粒,并将其转入到大肠杆菌DH5α中,进行鉴定、测序。序列分析表明克隆的CDV N蛋白基因从起始密码子ATG开始到终止密码子TAA结束全长为1 572个核苷酸,与GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列相比同源率达到93.9%-99.1%。 2犬瘟热N蛋白基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究将CDV N蛋白基因与原核表达载体pGEX-4T-2连接构建了pGEX-4T-2-CDV N重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,进行鉴定、测序、IPTG诱导表达。Western blot分析显示表达产物为84kDa的重组蛋白,可被犬瘟热抗血清所识别,具有良好的反应原性。 3犬瘟热N蛋白基因原核表达条件的优化、重组蛋白纯化及免疫原性研究为了提高GST-CDV N重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性的表达量,对GST-CDV N重组蛋白在大肠杆菌中的多种表达条件进行了研究,选择最佳条件进行高效表达,用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-CDV N重组蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性重组蛋白。通过免疫小鼠证明了GST-CDV N重组蛋白具有良好的免疫原性。本研究成功克隆、表达了犬瘟热N蛋白基因,纯化得到了具有很强抗原性的重组蛋白,为建立犬瘟热ELISA诊断试剂盒提供了可能,为亚单位疫苗的研制提供了依据。基础

关键词：犬瘟热病毒 N蛋白基因克隆原核表达抗原性

水稻OsNramp1基因的亚细胞定位及功能预测

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水稻OsNramp1基因的亚细胞定位及功能预测

作者：申卫红首都师范大学

学位级别：硕士

铁元素在土壤中的难溶性使得植物可利用的铁离子随之降低,致使铁缺乏成为世界上最普遍的人类营养问题。植物需要金属转运体来执行许多基本功能,其中包括金属的吸收、细胞内转运和长距离转运以及储存。Nramp作为一个超级金属转运体膜整... 详细信息

铁元素在土壤中的难溶性使得植物可利用的铁离子随之降低,致使铁缺乏成为世界上最普遍的人类营养问题。植物需要金属转运体来执行许多基本功能,其中包括金属的吸收、细胞内转运和长距离转运以及储存。Nramp作为一个超级金属转运体膜整合蛋白家族,在金属离子的吸收转运及稳态平衡方面起重要作用。本实验室通过Real-time RT-PCR分析表明OsNramp1基因的表达受缺铁胁迫而明显上调表达(14倍),这暗示着OsNrampl可能参与铁离子的吸收及转运过程。利用叶盘法获得纯合的转基因烟草,在此基础上,本论文完成了以下几方面的工作: 1.通过对转基因烟草植株的表型观察、光合作用指标测定证明OsNRAMP1对植物生长没有明显作用。测定转基因植株和种子的铁含量发现,缺铁条件下OsNRAMP1对于金属离子在植株和种子中的积累有促进。 2.利用非损伤检测转基因烟草悬浮细胞(BY-2)证明OsNRAMP1在不同铁盐(EDTA-Fe)浓度处理条件下(不加铁、0.1uM常铁和0.5uM过铁)对Ca、Cd、H没有发现明显转运信号。 3.在利用生物信息学方法预测OsNRAMP1是一个可能定位在细胞质膜上的膜蛋白后,又利用报告基因GFP、膜染料FM4-64及内质网特异性染料Blue-White,观察发现该蛋白主要定位在内质网和质膜上。同时在细胞质中发现了特别的膜泡结构,在质膜上发现了特殊的斑点状集聚区域,可能是蛋白表达后从内质网向质膜上转运,从而发挥功能。 4.在细菌中过量表达检测到显著的杂交信号。利用His标签进行蛋白纯化的优化,为之后的抗体制备提供基础。

关键词： OsNramp1 金属转运缺铁胁迫非损伤检测亚细胞定位 Blue-White

FOXP3在儿童I型糖尿病患者中的表达及临床意义

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南京医科大学学报（自然科学版） 2013年第6期33卷 852-853页

作者：陈艳申卫红朱岚南京医科大学附属无锡市人民医院检验科江苏无锡214023 无锡市第三人民医院检验科江苏无锡214041

目的:通过研究儿童Ⅰ型糖尿病患者中转录因子FOXP3的表达,探讨其在儿童Ⅰ型糖尿病发病的临床意义。方法:选择患儿与正常人各30例,用电化学发光法检测血清中C肽的含量;全自动生化分析仪检测空腹血糖;流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性... 详细信息

目的:通过研究儿童Ⅰ型糖尿病患者中转录因子FOXP3的表达,探讨其在儿童Ⅰ型糖尿病发病的临床意义。方法:选择患儿与正常人各30例,用电化学发光法检测血清中C肽的含量;全自动生化分析仪检测空腹血糖;流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的数量;实时定量PCR(RT-PCR)检测FOXP3的mRNA表达。结果:Ⅰ型糖尿病患儿组中血清C肽含量(0.71±0.06)ng/ml明显低于正常对照组(2.45±0.28)ng/ml;血糖含量(7.51±5.06)mmol/L明显高于正常对照组(4.85±0.68)mmol/L;外周血中CD4+CD25+Treg约占CD4+T细胞(1.57±0.15)%,低于正常对照组(3.13±0.29)%(P<0.05);Ⅰ型糖尿病患儿组外周血CD4+CD25+Treg细胞低表达FOXP3。结论:儿童Ⅰ型糖尿病患者外周血FOXP3表达降低,导致机体不能抑制效应性CD4+T细胞的增殖对胰岛的破坏,从而参与了Ⅰ型糖尿病的发生。

关键词： FOXP3 C肽 Ⅰ型糖尿病