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中国药理通讯 2006年第4期23卷 29-29页

作者：周培岚由振东徐波颜慧宫泽辉军事医学科学院毒物药物研究所

目的：MOR细胞内的磷酸化位点主要位于C-末端，本研究筛选细胞内与MOR的C末端有直接相互作用的蛋白，以研究其对MOR磷酸化、内吞、脱敏及复敏等过程的影响。方法：BaeterioMateh 细菌双杂交，为新发展起来研究蛋白与蛋白之间相互作用有... 详细信息

目的：MOR细胞内的磷酸化位点主要位于C-末端，本研究筛选细胞内与MOR的C末端有直接相互作用的蛋白，以研究其对MOR磷酸化、内吞、脱敏及复敏等过程的影响。方法：BaeterioMateh 细菌双杂交，为新发展起来研究蛋白与蛋白之间相互作用有效方法。PCR法扩增目的片断，双酶切后与载体连接。Western Blot验证蛋白表达。结果：以大鼠MOR（rMOR）cDNA为模板，PCR扩增C末端（末端340—398氨基酸）作为诱饵融合于pBT载体的入阻遏蛋白（λcI）上，命名pBT—C。Western Blot证明该诱饵蛋白表达正确。大鼠脑cDNA文库融合到pTRG载体的RNA多聚酶的α亚单位的N末端。两种重组质粒共同转入Screening Reporter报告菌后接种于选择性筛选培养基。共筛选得到154个克隆，通过双选筛选平板进一步确证为124个克隆。将双选得到的克隆与诱饵质粒分离，诱饵与阳性克隆两两共转在选择性培养基上再筛选以验证此克隆确实依赖于蛋白间的相互作用，排除自身激活作用。二次筛选确证19个阳性克隆，部分测序结果显示阳性克隆包括代谢相关氧化还原酶、肌动微管微丝形成相关蛋白、参与蛋白磷酸化的蛋白、热休克蛋白以及保守的跨膜受体等。结论：MOR的C-末端除了与蛋白激酶相互作用外，还与细胞内其他蛋白有相互作用。这就提示依赖与耐受的形成过程中可能有其他蛋白参与。

关键词： MOR细胞 μ阿片受体 C末端蛋白质相互作用筛选功能

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长期喉返神经损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子的表达

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第二军医大学学报 2000年第12期21卷 1120-1123页

作者：郑宏良由振东周水淼李兆基路长林严进王成海单晋杰第二军医大学长海医院耳鼻咽喉科上海200433 基础医学部神经生物学教研室

目的 :研究长期喉返神经损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子 (CNTF)的表达及分布。方法 :以犬单侧喉返神经损伤为实验模型 ,采用原位杂交及免疫组织化学技术 ,结合图像分析技术测定疑核 CNTF m RNA及其蛋白表达呈阳性反应的神经元胞... 详细信息

目的 :研究长期喉返神经损伤后疑核运动神经元睫状神经营养因子 (CNTF)的表达及分布。方法 :以犬单侧喉返神经损伤为实验模型 ,采用原位杂交及免疫组织化学技术 ,结合图像分析技术测定疑核 CNTF m RNA及其蛋白表达呈阳性反应的神经元胞体灰度、体积及数量。结果 :疑核运动神经元能自分泌 CNTF,神经损伤 3周内神经元 CNTF基因表达强度及反应的胞体数明显下降 ,而 CNTF蛋白表达增强 ,但表达的胞体数无改变。 4周后基因表达强度和反应的胞体数迅速增高 ,而CNTF表达强度恢复正常 ,反应的胞体数无变化。 6周后基因及其蛋白表达和神经元胞体数及体积均始终低于健侧。 12周后CNTF及其蛋白表达、神经元胞体数及体积趋向稳定。结论 :长期喉返神经损伤疑核运动神经元仍保持较高水平的 CNTF表达。

关键词：喉返神经损伤凝核运动神经元睫状神经营养因子

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吗啡依赖及戒断大鼠下丘脑前阿黑皮素原mRNA的变化

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中国药物依赖性杂志 2000年第4期9卷 259-261页

作者：崔一杰王新华由振东石学银李家乐第二军医大学长征医院麻醉科上海200003 第二军医大学神经生物教研室上海200003

目的··:观察大鼠吗啡依赖和戒断状态下脑内前阿黑皮素原 (POMC )mRNA的变化。方法·· :采用腹腔注射法 ,按剂量递增原则建立大鼠吗啡依赖动物模型 ,同时建立生理盐水对照组。吗啡依赖大鼠随机分为依赖组和戒断组。对照组和依赖组动... 详细信息

目的··:观察大鼠吗啡依赖和戒断状态下脑内前阿黑皮素原 (POMC )mRNA的变化。方法·· :采用腹腔注射法 ,按剂量递增原则建立大鼠吗啡依赖动物模型 ,同时建立生理盐水对照组。吗啡依赖大鼠随机分为依赖组和戒断组。对照组和依赖组动物于末次注射后3h ,戒断组大鼠于末次注射后72h迅速断头处死取脑 ,收集各个脑区组织总RNA标本。以POMC反义RNA探针对得到的RNA标本进行NorthernBlot印迹杂交 ,用电子计算机图像处理系统对所得结果进行分析。结果·· :吗啡依赖大鼠下丘脑POMCmRNA的表达仅为生理盐水对照组的69.56%±s4.7 % ,戒断72h状态下的吗啡依赖大鼠下丘脑POMCmRNA的表达恢复至生理盐水对照组的78.26 %±s5.3 % ;海马、纹状体和垂体POMCmRNA表达均为阴性。结论··:吗啡依赖大鼠下丘脑POMCmRNA的表达较生理盐水对照组有显著下降 ,戒断72h状态下的吗啡依赖大鼠其下丘脑POMCmRNA的表达较依赖组大鼠有显著回升 ,但仍显著低于正常组水平。

关键词：吗啡依赖吗啡戒断前阿黑皮素原 mRNA 下丘脑

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可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠吗啡依赖和复发的作用

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中国药理通讯 2006年第4期23卷 48-48页

作者：张晓冬艾恒郑杰民陈梅玉王强由振东黄矛第二军医大学基础部新药评价中心第二军医大学基础部神经生物学教研室

目的：研究可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠吗啡依赖和复发的作用。方法：制备和纯化两种不同形式的CART，观察对吗啡诱导小鼠条件性位置偏爱的影响以及对身体依赖和自发活动的影响。结果：两种不同形式的CART蛋白对Mor诱导的身体依赖和... 详细信息

目的：研究可卡因-苯丙胺调节转录肽对小鼠吗啡依赖和复发的作用。方法：制备和纯化两种不同形式的CART，观察对吗啡诱导小鼠条件性位置偏爱的影响以及对身体依赖和自发活动的影响。结果：两种不同形式的CART蛋白对Mor诱导的身体依赖和CPP形成无显著影响，且无自身精神依赖性。复性的CART增强已形成的Mor诱导的CPP，使消退的Mor诱导的CPP再现，并且显著增加小鼠活动的总路程。还原的CART可以部分拮抗已形成Mor CPP和复发。复性的CART诱导的CPP再现，可以被还原的CART、Ru38486和氟哌啶醇拮抗。还原的CART的具有部分拮抗小剂量Mor和拈抗Hyd诱导复发的作用以及Mor诱导的自发活动的增加。结论：CART影响小鼠条件性位置偏爱的形成与复发以及小鼠的自发活动，是一种具有介导或调节精神活性物质作用，在阿片类药物依赖和复发中发挥关键作用的肽类递质，并且其结构与活性密切相关。其精神活性作用可能与多巴胺系统和皮质激素系统有关。

关键词：小鼠吗啡依赖复发可卡因-苯丙胺调节转录肽条件性位置偏爱

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