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利用免疫抑制小鼠模型检测真菌病毒对黄曲霉菌致病力影响

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微生物学报 2022年第5期62卷 1784-1794页

作者：杨碧刘翔田询禹文峰齐晓岚江银辉贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004

【目的】构建用于比较黄曲霉(Aspergillus flavus,***)菌株之间致病力差异的小鼠感染模型,并利用该模型评价真菌病毒AfPV1对宿主***致病力的影响。【方法】用不同浓度环磷酰胺腹腔注射Institute of Cancer Research(ICR)小鼠,根据白细... 详细信息

【目的】构建用于比较黄曲霉(Aspergillus flavus,***)菌株之间致病力差异的小鼠感染模型,并利用该模型评价真菌病毒AfPV1对宿主***致病力的影响。【方法】用不同浓度环磷酰胺腹腔注射Institute of Cancer Research(ICR)小鼠,根据白细胞的数量判断小鼠免疫抑制程度;通过滴鼻和尾静脉两种感染方法接种不同浓度的***孢子量,统计14 d以内小鼠的死亡率,确定***最佳的孢子接种量;通过小鼠组织的菌落负荷量以及肺部组织的病理观察,确定***感染是否成功;最后利用该小鼠模型评价真菌病毒AfPV1对寄主***致病力的影响。【结果】腹腔注射环磷酰胺的浓度为250 mg/kg时,能够达到免疫抑制水平;小鼠组织真菌负荷和病理组织切片观察显示***成功感染接种的ICR小鼠组织;在滴鼻接种模型中,***的孢子接种量为40μL(1×10^(6) CFU/mL)时比较合适评价***菌株之间的差异;在尾静脉接种的模型中,***的孢子接种量在50μL(1×10^(6) CFU/mL)比较合适评价***菌株之间的差异;病毒AfPV1能够引起***的致病力下降,但是不影响***在小鼠肺部的定殖量。【结论】本研究构建的小鼠感染模型能够评价***菌株之间致病力的差异;真菌病毒AfPV1的感染降低了宿主***的致病力。

关键词： Aspergillus flavus 真菌病毒免疫抑制小鼠感染模型尾静脉注射滴鼻接种

不同曲霉感染大蜡螟幼虫模型的构建及曲霉毒力评价

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贵州医科大学学报 2021年第11期46卷 1271-1276页

作者：杨碧刘翔张明山田询江银辉贵州医科大学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学

目的探讨不同曲霉感染大蜡螟幼虫模型的构建及曲霉毒力的鉴定。方法取烟曲霉ygy和黄曲霉LD-F菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),30℃培养5 d,分别收集曲霉孢子并配制1×10^(8) CFU/L(低剂量)、1×10^(9) CFU/L(中剂量)及1×10^(10)... 详细信息

目的探讨不同曲霉感染大蜡螟幼虫模型的构建及曲霉毒力的鉴定。方法取烟曲霉ygy和黄曲霉LD-F菌株接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA),30℃培养5 d,分别收集曲霉孢子并配制1×10^(8) CFU/L(低剂量)、1×10^(9) CFU/L(中剂量)及1×10^(10) CFU/L(高剂量)孢子悬液;取大蜡螟幼虫60条随机均分为6组,分别注射上述2种曲霉孢子悬液高、中、低剂量各10μL,同时再取大蜡螟60条幼虫随机均分为6组,对应2种曲霉各设置3种形式对照,即空白对照(UTC)组(不做任何处理)、穿刺(PC)组[微量注射器穿刺但不注射磷酸盐缓冲液(PBS)]及PBS组(注射接种PBS 10μL),各组大蜡螟幼虫于37℃黑暗环境培养5 d,每日监测各组大蜡螟幼虫的体表颜色、应对刺激反馈及存活情况,采用生存曲线评价2种曲霉的毒力强弱;取2种曲霉孢子悬液高剂量组大蜡螟幼虫感染48 h后死亡幼虫和同时点的UTC组大蜡螟幼虫,采用苏木精和曙红(HE)染色检测幼虫虫体组织的病理学特征,采用六铵银染色检测幼虫体腔内菌丝形成情况,二者结合判断幼虫感染曲霉是否成功。结果烟曲霉和黄曲霉感染幼虫后,幼虫黑化,其黑化程度与感染孢子悬液质量浓度无相关性,但其毒力有质量浓度依赖性(P<0.0001);组织病理检查可见幼虫体腔结构破坏,真菌菌丝在幼虫体内定植,表明曲霉感染模型构建成功。结论成功构建曲霉感染的大蜡螟幼虫模型,烟曲霉毒力高于黄曲霉,相同曲霉菌株毒力有质量浓度依赖性。

关键词：曲霉菌,烟曲霉菌,黄曲霉大蜡螟感染模型毒力检测致病力

基于颜色语义先验的色彩提取与分层压缩系统设计与实现

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作者：常询北京邮电大学

学位级别：硕士

横向并购能提高企业创新效率吗——基于员工激励的视角

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宏观经济研究 2024年第9期 106-124页

作者：范立夫廖询宋庆波东北财经大学金融学院山东光润控股有限公司

本文采取准自然实验的方法实证检验横向并购对企业创新效率的影响。研究发现，横向并购后企业创新效率下降，且该效应主要发生在人力资本水平较高的公司以及行业集聚程度较低的地区，但并购后对技术人员的股权激励能抑制横向并购后创新... 详细信息

本文采取准自然实验的方法实证检验横向并购对企业创新效率的影响。研究发现，横向并购后企业创新效率下降，且该效应主要发生在人力资本水平较高的公司以及行业集聚程度较低的地区，但并购后对技术人员的股权激励能抑制横向并购后创新效率下降。上述结果表明，对同类型员工的整合困难及由此导致的员工内在激励不足是阻碍横向并购实现创新效率提升的重要原因。因此，实施横向并购的公司除了加强物质资产的整合外，也要关注人力资本的整合，有效强化员工激励。

关键词：横向并购创新效率员工激励人力资本整合

AGO和RDRP基因参与黄曲霉压力应激反应

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1442-1449页

作者：刘翔杨碧田询周建鸿廖永慧刘玲玲禹文峰齐晓岚江银辉贵州医科大学分子生物学重点实验室贵阳550004 贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室贵阳550004

目的探究RNA干扰(RNAi)机制中Argonaute(Ago)基因和RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因在黄曲霉生长发育中的作用。方法利用同源重组的方法构建黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因突变菌株,接种10^(6)CFU/mL孢子悬液3μl至马铃薯葡萄糖琼脂... 详细信息

目的探究RNA干扰(RNAi)机制中Argonaute(Ago)基因和RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)基因在黄曲霉生长发育中的作用。方法利用同源重组的方法构建黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因突变菌株,接种10^(6)CFU/mL孢子悬液3μl至马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基上观察突变菌株的生长发育现象。在小量酵母提取物葡萄糖(YGM)培养基中加入200、400μg细胞壁压力试剂刚果红(CR),0.8 mol/L、1.6 mol/L渗透压药物氯化钠(NaCl),氧化压力试剂2 mmol/L、4 mmol/L过氧化氢(H_(2)O_(2)),基因组损伤剂0.01%、0.02%甲磺酸甲酯(MMS)试剂分析突变菌株的压力应激反应。结果成功构建黄曲霉突变菌株ΔAgo1、ΔAgo2、ΔRDRP1、ΔRDRP3且生长发育正常。ΔAgo1、ΔAgo2菌株相比对照可降低对细胞壁和渗透压的胁迫影响。Ago1基因缺失可降低H_(2)O_(2)的影响,相反RDRP3基因缺失,H_(2)O_(2)的抑制作用增加。ΔAgo2、ΔRDRP1菌株能降低对基因损伤剂的作用。此外,ΔRDRP1增加渗透压胁迫作用。结论黄曲霉Ago1、Ago2、RDRP1、RDRP3基因不参与生长速率和无性繁殖调控,可以参与调节宿主菌对环境的应激反应。

关键词：黄曲霉 RNAi 应激反应

真菌病毒AfPV1对寄主黄曲霉抗压力耐受的影响

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贵州医科大学学报 2022年第10期47卷 1147-1152页

作者：江银辉杨碧刘翔田询禹文峰齐晓岚吴昌学贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨真菌病毒Af PV1感染后对寄主黄曲霉抗渗透压、氧化、细胞壁压力、紫外照射、巨噬细胞杀灭以及对细胞黏附的影响。方法将脱病毒菌株(LD-F1)及Af PV1感染菌株(LD-F1-b)黄曲霉孢子接种到含有细胞壁胁迫应激试剂、渗透压胁迫试剂和... 详细信息

目的探讨真菌病毒Af PV1感染后对寄主黄曲霉抗渗透压、氧化、细胞壁压力、紫外照射、巨噬细胞杀灭以及对细胞黏附的影响。方法将脱病毒菌株(LD-F1)及Af PV1感染菌株(LD-F1-b)黄曲霉孢子接种到含有细胞壁胁迫应激试剂、渗透压胁迫试剂和氧化试剂的YGM培养基、30℃黑暗培养5 d、检测病毒Af PV1对黄曲霉抗压力的影响;通过紫外线照射SDA培养基上的黄曲霉孢子,30℃黑暗培养48 h检测病毒Af PV1对黄曲霉抗紫外照射的影响;黄曲霉孢子与巨噬细胞(RAW264.7)和人肺上皮细胞(A549)共培养,比较黄曲霉孢子死亡率和黏附水平;通过黄曲霉孢子与巨噬细胞(RAW264.7)共培养后收集上清液检测白介素-10(IL-10)、IL-6、IL-1β、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平。结果真菌病毒Af PV1减弱了黄曲霉对渗透、氧化和紫外线的抵抗压力,但对细胞壁抗压能力无影响;真菌病毒Af PV1的感染能够降低黄曲霉对人肺上皮细胞A549的黏附能力,同时降低黄曲霉抵抗巨噬细胞杀灭能力;黄曲霉感染后,巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α,真菌病毒Af PV1感染黄曲霉会导致巨噬细胞有增加肿瘤坏死因子-α的产生趋势,但结果不显著。结论真菌病毒Af PV1感染能够降低寄主黄曲霉抗压能力。

关键词：黄曲霉真菌病毒压力耐受巨噬细胞细胞黏附细胞因子

黄曲霉基因敲除体系的构建及其RNA依赖的RNA聚合酶1基因在生长发育中的作用

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贵州医科大学学报 2023年第11期48卷 1282-1291页

作者：刘翔杨碧田询周建鸿禹文峰齐晓岚江银辉贵州医科大学、地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的探讨黄曲霉(***)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在***生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overl... 详细信息

目的探讨黄曲霉(***)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在***生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overlap PCR)法融合RDRP1基因上下游片段和嘧啶磺胺抗性基因(ptrA);采用聚乙二醇(PEG)介导方法将该融合片段导入***的原生质体中获得RDRP1阳性转化子(ptrA抗性),采用Sourthern blot鉴定筛选RDRP1基因突变菌株;对RDRP1基因突变菌株,采用十字交叉法测定生长速率、血细胞计数板统计产孢量,手动计数Wickerham Medium(WKM)+尿嘧啶尿苷(UU)培养基上产生的菌核数量。结果获得ptrA抗性转化子13个;Sourthern blot鉴定4个为RDRP1基因缺失菌株,效率30.8%;与CA14相比,RDRP1基因突变菌株在表型、生长率、产孢量及菌核发育上差异无统计学意义(P>0.05)。结论overlap PCR结合PEG介导转化的方式可短时间内获得***基因敲除突变菌株,RDRP1基因不参与***表型、生长率、产孢量及菌核发育的调控作用。

关键词：基因敲除技术原生质体黄曲霉重叠延伸聚合酶链式反应聚乙二醇 RNA依赖的RNA聚合酶1

随机模拟半偏减法集对势的区域水资源承载力评价方法

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水电能源科学 2024年第7期42卷 40-43,5页

作者：葛瑞敏周戎星刘凌石询询王平袁康合肥工业大学土木与水利工程学院安徽合肥230009 陕西省水利电力勘测设计研究院陕西西安710001

为准确评价区域水资源承载力状态,探讨以联系数和集对势为理论基础构建评价模型,分析普通半偏减法集对势的整体结构及物理意义,为进一步挖掘联系数半偏减法集对势的不确定信息,建立了联系数差异度系数与半偏减法集对势差异度系数的关系... 详细信息

为准确评价区域水资源承载力状态,探讨以联系数和集对势为理论基础构建评价模型,分析普通半偏减法集对势的整体结构及物理意义,为进一步挖掘联系数半偏减法集对势的不确定信息,建立了联系数差异度系数与半偏减法集对势差异度系数的关系,提出了半偏减法集对势差异度系数的三角模糊数随机模拟方法,建立了随机模拟半偏减法集对势差异度系数的区域水资源承载力评价方法。将评价方法应用于安徽省蚌埠市水资源承载力评价中,发现态势变化呈现由偏反势过渡到均势再到偏反势;评价等级值整体处于2~3级之间,说明蚌埠市整体水资源承载状态较差,但有好转趋势。评价模型应用结果与实际情况吻合,为保障区域水资源高质量发展提供了新的评价方法。

关键词：集对分析差异度系数集对势三角模糊数水资源承载力随机模拟

基于RNA-Seq技术的真菌病毒AfPV1感染对寄主黄曲霉基因表达的影响

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贵州医科大学学报 2022年第12期47卷 1377-1384页

作者：江银辉杨碧刘翔田询禹文峰齐晓岚吴昌学贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵州贵阳550004

目的基于转录组测序(RNA-Seq)技术探讨真菌病毒黄曲霉(***)partitivirus 1(AfPV1)感染对寄主***基因表达的影响。方法分别提取无病毒感染的***菌株LD-F1和真菌病毒AfPV1感染的***菌株LD-F1-b的RNA进行文库构建和RNA-Seq;以***菌株NRRL 3... 详细信息

目的基于转录组测序(RNA-Seq)技术探讨真菌病毒黄曲霉(***)partitivirus 1(AfPV1)感染对寄主***基因表达的影响。方法分别提取无病毒感染的***菌株LD-F1和真菌病毒AfPV1感染的***菌株LD-F1-b的RNA进行文库构建和RNA-Seq;以***菌株NRRL 3357(GCA_009017415.1)的基因组为参考,分析RNA-Seq测序结果中有差异表达的基因(DEGs),并对DEGs进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集分析;随机选取12个DEGs,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对转录组进行验证。结果样品RNA完整无污染,测序结果可靠,错误率0.02%,测序的结果能够成功比对到***的基因组序列(>56%);获得真菌病毒AfPV1感染的***的DEGs有4127个;GO富集分析显示,DEGs涉及***的氧化还原过程、单生物过程、单生物代谢过程、跨膜转运、谷氨酰胺家族氨基酸代谢过程、谷氨酰胺家族氨基酸生物合成过程、二羟酸代谢过程及血红素结合等;KEGG富集分析显示,DEGs参与***代谢通路中的戊糖与葡萄糖醛酸互相转换、非同源重组末端连接、氮代谢、错配修复、同源重组、DNA复制、次级代谢产物的生物合成及碱基切除修复等;qRT-PCR的结果与转录组测序结果趋势一致。结论真菌病毒AfPV1感染***能够引起基因表达差异,DEGs涉及***生命过程中多个基因和多个信号通路。

关键词：真菌病毒转录组黄曲霉差异表达基因基因功能注释富集分析