检索结果-南通市图书馆

生物大分子药物代谢消除途径及体外代谢研究方法进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药学与临床研究 2018年第4期26卷 273-277页

作者：许娜田浤姚文兵中国药科大学江苏省生物药物成药性研究重点实验室南京210009

由于理化及生物学性质的差异,生物大分子药物与传统小分子药物相比,药代动力学机制更加复杂,在体内表现出不同的吸收、分布、代谢、排泄过程。大分子药物一般不经CYP 450酶代谢,其体内消除途径主要有肾小球滤过、酶水解、受体介导的胞... 详细信息

由于理化及生物学性质的差异,生物大分子药物与传统小分子药物相比,药代动力学机制更加复杂,在体内表现出不同的吸收、分布、代谢、排泄过程。大分子药物一般不经CYP 450酶代谢,其体内消除途径主要有肾小球滤过、酶水解、受体介导的胞吞消除和抗药物抗体介导的消除。近年来,除了常用的免疫分析法、放射性同位素示踪法、LC-MS/MS等分析方法外,还有计算机模型被开发用于模拟预测大分子药物药代动力学性质的研究并发挥越加重要的作用。本文主要综述了大分子药物主要代谢消除途径及体外研究模型TMDD、PBPK的应用和发展。

关键词：生物大分子药物药物代谢代谢体外预测模型 TMDD PBPK

新疆塔里木马鹿鹿茸干鲜品活性多肽的对比研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生化药物杂志 2011年第3期32卷 176-179页

作者：洪勇田浤陈雪梅智开宁尚靖高向东中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 中国药科大学新药筛选中心江苏南京210009

目的通过对新疆塔里木马鹿鹿茸干鲜品为原料制备的多肽的提取方式、含量和在体外对小鼠前成骨细胞（MC3T3-E1细胞）增殖作用的比较,探讨新疆塔里木马鹿鹿茸的深加工和相关产品的开发原料选择的技术依据。方法通过酸性缓冲液抽提和超滤... 详细信息

目的通过对新疆塔里木马鹿鹿茸干鲜品为原料制备的多肽的提取方式、含量和在体外对小鼠前成骨细胞（MC3T3-E1细胞）增殖作用的比较,探讨新疆塔里木马鹿鹿茸的深加工和相关产品的开发原料选择的技术依据。方法通过酸性缓冲液抽提和超滤等方法制备得到马鹿鹿茸干鲜品多肽,以Folin-酚比色法测定其浓度,Tricine-SDS-PAGE电泳检测其相对分子质量（Mr）分布,MTT法检测其体外对MC3T3-E1细胞的增殖作用。结果马鹿鹿茸鲜品多肽主要由Mr为14 400,9 500,6 500和4 100的多肽组成;而马鹿鹿茸干品多肽在Mr14 400和4 100-6 500之间的多肽含量较低。体外活性分析结果显示,鲜品多肽能显著促进MC3T3-E1细胞增殖;而干品多肽促进MC3T3-E1细胞增殖效果不显著。结论马鹿鹿茸鲜品多肽具有更高的促进成骨细胞增殖的作用。

关键词：马鹿鹿茸多肽成骨细胞

弱化NPT筛选标记建立高表达CHO细胞株筛选方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

弱化NPT筛选标记建立高表达CHO细胞株筛选方法

新型聚多肽与FGF21融合表达显著提高半衰期并改善生物学功能

全国第二届海洋与陆地多糖多肽及天然创新药物研发学术会议

作者：刘苏田浤王驰童玥高向东姚文兵中国药科大学生命科学与技术学院

近年来治疗性抗体药物飞速发展,作为表达外源基因的最佳真核宿主之一,高表达CHO工程细胞株的获得显得极为迫切。本研究目的在于优化CHO表达体系,建立高表达CHO细胞株筛选方法。将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶(... 详细信息

近年来治疗性抗体药物飞速发展,作为表达外源基因的最佳真核宿主之一,高表达CHO工程细胞株的获得显得极为迫切。本研究目的在于优化CHO表达体系,建立高表达CHO细胞株筛选方法。将外源基因表达载体上抗性筛选基因表达的新霉素磷酸转移酶(neomycin-phosphotransferase,NPT)的261位氨基酸天冬氨酸突变成甘氨酸,突变型NPT酶活力仅为野生型的3%,只有外源基因整合在转录热点或(和)拷贝数高的少量细胞能够表达足够的NPT而在G418加压筛选过程中存活,大大增加获得高表达CHO细胞株的几率。同时将EGFP作为报告基因,与抗体IgG1的Fc结构域融合表达。在相同浓度G418加压筛选后NPT氨基酸的突变使外源蛋白表达量增加,从而筛选出高表达的CHO单克隆细胞株,并对该融合蛋白进行鉴定。结果表明转染含突变型NPT表达载体的细胞克隆率降低但是EGFP的表达量高于转染含野生型NPT表达载体的细胞,这表明其具有筛选出高表达单克隆细胞株的潜力。进一步对此多克隆细胞进行单克隆化筛选,获得的16株单克隆细胞中筛选得到1株EGFP表达量较高的细胞株。本研究证明了通过弱化NPT筛选标记获得高表达CHO细胞株的方法是提高真核药物蛋白表达量的一条有效途径,为建立高表达CHO细胞株提供了新的思路。

关键词：中国仓鼠卵巢细胞新霉素磷酸转移酶增强型绿色荧光蛋白高表达系统

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

新型聚多肽与FGF21融合表达显著提高半衰期并改善生物学功能

中国药学会生化与生物技术药物专业委员会2015年学术年会暨抗体药物研发高峰论坛

作者：尹骏包立晨田浤高向东姚文兵中国药科大学生命科学与技术学院

聚多肽融合技术是近年来开发的长效化技术,通过设计的特异性氨基酸链可采用重组DNA技术与蛋白质药物融合表达,明显延长蛋白质药物血浆半衰期的原理与PEG修饰相同,都是显著增大药用蛋白的流体动力学体积。我们将一种新型的完全模拟PEG修...

聚多肽融合技术是近年来开发的长效化技术,通过设计的特异性氨基酸链可采用重组DNA技术与蛋白质药物融合表达,明显延长蛋白质药物血浆半衰期的原理与PEG修饰相同,都是显著增大药用蛋白的流体动力学体积。我们将一种新型的完全模拟PEG修饰的不带电荷的、亲水的、柔性的聚多肽与人成纤维细胞生长因子21(FGF21)融合表达,进行理化性质,免疫原性、药代动力学和生物学活性研究。将筛选得到的各种长度的新型聚多肽与FGF21在大肠杆菌中融合表达,对融合蛋白的理化性质,用Western blotting、圆二色谱、MALDI-TOF、等电点、生物可降解性等方法进行检测,以证实融合蛋白是否与理论设计相符;然后检测聚多肽的免疫原性和用ELISA的方法测定各融合蛋白在小鼠中的血浆半衰期;最后通过饮食诱导的肥胖小鼠(DIO)模型进行体内活性研究。我们筛选得到满足要求的各种长度的聚多肽链,与FGF21融合后在大肠杆菌中都为可溶表达,通过镍亲和层析柱和强阴离子交换柱两步纯化得到各融合蛋白;圆二色谱检测随着聚多肽链长度的增加,198nm处的负值显著增加,表明无规卷曲的含量也逐渐显著增加;聚多肽融合FGF21的等电点与原型FGF21无变化,pI都约在5.4,可以说明聚多肽本身不带电荷的性质,与蛋白融合并不会改变其等电点;融合蛋白在小鼠血浆中48小时后才开始显示出有降解的迹象,说明融合蛋白对血清蛋白酶引起的降解有抗性,这是聚多肽能显著增强药代动力学性质的一个因素,而在肾均浆中快速降解说明了聚多肽分子显著区别于PEG分子的特性,可以克服PEG分子在肾细胞中不易被降解从而易引起肾空泡现象的问题;融合蛋白在小鼠体内的免疫原性也明显下降,不加佐剂组并没有检测到相应抗体,表明聚多肽分子在小鼠体内可以显著降低免疫原性;原型人FGF21在小鼠中的血浆半衰期只有0.34h,对于融合了聚多肽的蛋白,当聚多肽长度达到200个氨基酸时,半衰期达到5.67h,聚多肽长度从200到400个残基增加了200个残基使半衰期增加到8.8h。并且聚多肽长度增加到600使半衰期延长到12.93h,这些结果显示聚多肽长度具有惊人的阈值,它导致体内半衰期高于比例的延长。原型FGF21和聚多肽融合的FGF21对于高脂饮食诱导的肥胖小鼠都有显著的减肥和降糖效果。在该模型小鼠中,持续15天给药后,聚多肽融合的FGF21的降低体重效果以剂量依赖的方式增强,与FGF21原型等摩尔质量的聚多肽融合的FGF21的中剂量组的降低效果已经显著优于原型FGF21。并且在HFD小鼠进行口服糖耐量实验(OGTT),聚多肽融合的FGF21的降低血糖效果也呈以剂量依赖的方式增加。综合来说,PsTag融合的FGF21很好的保留了全部的生物活性,并且因为其能显著延长半衰期的原因,在体内的疗效会显著优于未融合的FGF21。本实验成功构建了人工设计的由Ala、G1y、Pro、Ser、Thr这五种氨基酸组成的无结构的、不带电荷、无免疫原性的聚多肽分子,与FGF21融合表达,显著改善其理化性质及体内活性并解决半衰期短等问题。

关键词：

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

治疗自身免疫性疾病的抗细胞因子疫苗

药学进展 2014年第6期38卷 426-431页

作者：陈超蔡棣田浤高向东中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

抗细胞因子疫苗是针对疾病相关细胞因子而设计与构建的一类能激发体液免疫应答的主动免疫治疗性疫苗,是用于自身免疫性疾病的一种极具潜力的新型疗法。目前研究与开发的抗细胞因子疫苗主要有2种类型,一种是通过偶联载体或直接修饰为细... 详细信息

抗细胞因子疫苗是针对疾病相关细胞因子而设计与构建的一类能激发体液免疫应答的主动免疫治疗性疫苗,是用于自身免疫性疾病的一种极具潜力的新型疗法。目前研究与开发的抗细胞因子疫苗主要有2种类型,一种是通过偶联载体或直接修饰为细胞因子引入外源表位而构建的蛋白疫苗,另一种则是可表达细胞因子免疫原的核酸疫苗。这两类疫苗在临床前及临床研究中,对各种自身免疫性疾病均显现出治疗活性。简介各类抗细胞因子疫苗及其作用机制,综述用于治疗类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮等各种自身免疫性疾病的抗细胞因子疫苗研究进展。

关键词：细胞因子外源表位主动免疫疫苗自身免疫性疾病

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

口服多肽和蛋白质药物的研究进展

药学进展 2021年第6期45卷 452-459页

作者：柳梦媛徐晨姚文兵田浤中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京211198 北京三元基因药业股份有限公司北京102600

多肽和蛋白质药物由于其特异性高、安全性高的特点已广泛应用于各种疾病的临床治疗,但其主要给药途径是注射给药,降低了患者的依从性。口服作为一种安全性高、依从性强的给药途径逐渐成为研究焦点,但胃肠道的结构组织和生理功能使得多... 详细信息

多肽和蛋白质药物由于其特异性高、安全性高的特点已广泛应用于各种疾病的临床治疗,但其主要给药途径是注射给药,降低了患者的依从性。口服作为一种安全性高、依从性强的给药途径逐渐成为研究焦点,但胃肠道的结构组织和生理功能使得多肽和蛋白质药物口服后生物利用度低、半衰期短。口服后多肽和蛋白质药物的吸收成为此类药物口服给药途径开发的瓶颈,但随着技术的发展,近年来对促进多肽和蛋白质药物口服吸收的研究在临床前和临床试验方面均取得较大进展。综述多肽和蛋白质药物口服吸收途径、影响因素、提高多肽和蛋白质药物口服吸收的方法以及相关临床试验的研究进展。

关键词：多肽和蛋白质药物口服给药途径胃肠道吸收临床试验

利用反式翻译机制设计ssrA-X标签提高蛋白质定点非天然氨基酸引入质量

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

药物生物技术 2021年第4期28卷 331-335页

作者：王伯豪刘利许峰源杨光田浤高向东宋潇达中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京211198

基于遗传密码扩增技术实现向蛋白质中终止密码子处定点引入非天然氨基酸会不可避免地造成截短型蛋白堆积以及产率降低。通过利用细菌天然存在反式翻译机制,即tmRNA介导的蛋白降解机制,作者设计了ssrA-X标签。将ssrA-X插入目标蛋白,利用... 详细信息

基于遗传密码扩增技术实现向蛋白质中终止密码子处定点引入非天然氨基酸会不可避免地造成截短型蛋白堆积以及产率降低。通过利用细菌天然存在反式翻译机制,即tmRNA介导的蛋白降解机制,作者设计了ssrA-X标签。将ssrA-X插入目标蛋白,利用截短型蛋白的C端暴露出ssrA标签能够被Ssp B识别,进而被clpX降解的特性,完全消除了截短型蛋白,同时增加了含非天然氨基酸的蛋白产量。通过荧光蛋白Cp Venus,融合蛋白GFP-Spycatcher,膜展示蛋白Omp A-Darpins分别验证了ssrA-X标签的可行性。

关键词：非天然氨基酸遗传密码扩展反式翻译基因工程蛋白表达 ssrA

聚乙二醇对干扰素α-2b的初步化学修饰研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药科大学学报 2000年第1期31卷 74-77页

作者：田浤姚文兵吴梧桐沈子龙中国药科大学生物制药学院南京210009

以几种不同方法活化的聚乙二醇 5 0 0 0对干扰素进行化学修饰 ,并对修饰条件、修饰后干扰素生物活性进行了初步比较。相同反应条件下 ,单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯 (SC mPEG)的选择性较单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯 (SS mP... 详细信息

以几种不同方法活化的聚乙二醇 5 0 0 0对干扰素进行化学修饰 ,并对修饰条件、修饰后干扰素生物活性进行了初步比较。相同反应条件下 ,单甲氧基聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯 (SC mPEG)的选择性较单甲氧基聚乙二醇琥珀酸琥珀酰亚胺酯 (SS mPEG)高 ,聚乙二醇甲酸琥珀酰亚胺酯 (BSC PEG)由于有两个活性基团 ,选择性与SS mPEG相近。以聚乙二醇活化的修饰剂会使干扰素分子见形成交联 ,修饰后生物活性损失较大 ,而单甲氧基聚乙二醇活化的修饰剂修饰干扰素 ,修饰率保持在 30

关键词：聚乙二醇干扰素 rhuIFNα-2b

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术药物治疗系统性红斑狼疮的研究进展

药学与临床研究 2014年第3期22卷 251-256页

作者：周立偲田浤高向东何书英中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

系统性红斑狼疮是一种侵犯身体多脏器的典型的自体免疫疾病,对人体危害极大。严重肾脏受累的系统性红斑狼疮患者如果不给予适当治疗会进展到末期肾病,甚至死亡。系统性红斑狼疮的治疗是现今研究关注的热点。现有的激素治疗由于副作用以... 详细信息

系统性红斑狼疮是一种侵犯身体多脏器的典型的自体免疫疾病,对人体危害极大。严重肾脏受累的系统性红斑狼疮患者如果不给予适当治疗会进展到末期肾病,甚至死亡。系统性红斑狼疮的治疗是现今研究关注的热点。现有的激素治疗由于副作用以及对病程恶化无显著改善而限制了其临床应用。生物技术药物因其良好的靶向性为治疗系统性红斑狼疮提供了新的思路,其安全性和有效性已在临床试验中证明。本文对生物技术药物用于治疗系统性红斑狼疮的研究作一综述。

关键词：系统性红斑狼疮生物技术药物 B细胞活化因子耐受原疫苗