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肿瘤坏死因子受体1 PLAD结构域工程菌表达条件的优化

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药物生物技术 2012年第4期19卷 287-291页

作者：孟芳曹进田浤戴宛润高向东中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009

为提高可溶性GST-PLAD蛋白的表达量,对含有GST-PLAD基因的*** BL21(DE3)工程菌的发酵条件进行优化。采用单因素实验和正交实验,对影响大肠杆菌生长及融合蛋白表达的培养基组分、培养条件进行了优化。结果显示最优培养基配比(%)为:蔗糖0.... 详细信息

为提高可溶性GST-PLAD蛋白的表达量,对含有GST-PLAD基因的*** BL21(DE3)工程菌的发酵条件进行优化。采用单因素实验和正交实验,对影响大肠杆菌生长及融合蛋白表达的培养基组分、培养条件进行了优化。结果显示最优培养基配比(%)为:蔗糖0.5、蛋白胨1、酵母提取物1.5、硫酸铵0.4、氯化钠1、硫酸镁0.03;最佳表达条件为:诱导剂IPTG浓度为0.4 mmol/L,37℃培养5.5 h,诱导9 h,摇瓶装瓶量为100 mL/500 mL。表达条件优化后菌体生长密度是优化前的1.89倍,GST-PLAD表达量是优化前的2.05倍。

关键词：肿瘤坏死因子受体1 前配体装配域培养基组分

PD-L1疫苗中引入不同免疫原性氨基酸对T细胞亚群分化的影响

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中国药科大学学报 2020年第3期51卷 349-356页

作者：陈红梅康彦良刘利姚文兵田浤中国药科大学生命科学与技术学院江苏省生物药物成药性研究重点实验室南京210009

为了比较内源性的3-硝基酪氨酸与非天然的4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入对T细胞亚群分化的影响,利用遗传密码扩充技术,将这两种免疫原性氨基酸分别引入到PD-L1疫苗的相同位点,获得具有3-硝基酪氨酸以及4-硝基苯丙氨酸的两种PD-L1... 详细信息

为了比较内源性的3-硝基酪氨酸与非天然的4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入对T细胞亚群分化的影响,利用遗传密码扩充技术,将这两种免疫原性氨基酸分别引入到PD-L1疫苗的相同位点,获得具有3-硝基酪氨酸以及4-硝基苯丙氨酸的两种PD-L1突变体。用这两种突变体免疫小鼠,分析对小鼠脾脏T细胞亚群分化的影响。流式细胞术检测结果显示,4-硝基苯丙氨酸在PD-L1疫苗中的引入可促进Th1细胞的极化,同时降低Treg细胞的比例,3-硝基酪氨酸的引入对Th1细胞的极化无影响,同时能显著提高Treg和Th17细胞的比例。二者在PD-L1疫苗中的引入均能促进脾脏CD8+T细胞的应答,其中含有4-硝基苯丙氨酸的PD-L1突变体应答效果更强。实验结果表明,与内源性的3-硝基酪氨酸在PD-L1疫苗中的引入相比,非天然的4-硝基苯丙氨酸更适合用于肿瘤疫苗的设计。

关键词： PD-L1 疫苗 3-硝基酪氨酸 4-硝基苯丙氨酸 T细胞亚群

免疫原性HER2突变体蛋白对小鼠T细胞亚群分化的影响

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中国药科大学学报 2018年第1期49卷 102-108页

作者：宁宏宇江涛张瑞何羽姚文兵田浤中国药科大学江苏省生物药物成药性研究重点实验室南京210009 中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

为了考察蛋白质中定点引入对硝基苯丙氨酸后对T细胞分化的影响,以人表皮生长因子受体2(HER2)胞外区为模型分子,利用实验室前期构建的工程菌表达了定点引入对硝基苯丙氨酸的HER2突变体。用含对硝基苯丙氨酸的HER2突变体免疫小鼠,分析其... 详细信息

为了考察蛋白质中定点引入对硝基苯丙氨酸后对T细胞分化的影响,以人表皮生长因子受体2(HER2)胞外区为模型分子,利用实验室前期构建的工程菌表达了定点引入对硝基苯丙氨酸的HER2突变体。用含对硝基苯丙氨酸的HER2突变体免疫小鼠,分析其对小鼠T细胞亚群分化的影响。研究结果显示,对硝基苯丙氨酸的引入显著增强了HER2的免疫原性,免疫5周后,突变体免疫组的小鼠体内抗HER2抗体滴度明显高于PBS组和原型免疫组的小鼠;流式细胞术检测结果显示,小鼠淋巴结内Tfh细胞比例从4%上升至8%,而Treg细胞比例从5%下降至1%;QT-PCR分析结果显示,Tfh细胞关键转录因子Bcl-6的mRNA水平提高了2倍,而Treg细胞关键转录因子FOXP3的mRNA水平明显降低;ELISA法检测血清中Tfh细胞效应因子IL-21的含量从4 pg/m L上升至28 pg/m L。上述研究结果证实,含有对硝基苯丙氨酸的HER2突变体可以通过激活Tfh细胞分化而引起高效免疫应答。

关键词：免疫原性氨基酸 HER2 滤泡辅助性T细胞调节型T细胞细胞分化

泛染色体开放元件对CHO细胞株中抗体表达量的影响

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中国药科大学学报 2017年第1期48卷 96-101页

作者：王驰田浤高向东姚文兵中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

泛染色体开放元件(UCOE)来自于人类看家基因启动子基因序列,能阻止基因转录沉默,使转录的目的基因不受"位置效应"的影响,从而使目的蛋白在细胞中高表达。本研究考察了不同片段大小的UCOE元件对稳转细胞株中抗体表达量的影响。将UCOE元... 详细信息

泛染色体开放元件(UCOE)来自于人类看家基因启动子基因序列,能阻止基因转录沉默,使转录的目的基因不受"位置效应"的影响,从而使目的蛋白在细胞中高表达。本研究考察了不同片段大小的UCOE元件对稳转细胞株中抗体表达量的影响。将UCOE元件中来自于CBX3基因的1.5 kb片段和来自于HNRPA2B1基因的2.5 kb片段及完整UCOE 4.0 kb片段分别插入到含有抗体轻、重链的质粒载体中,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,加压筛选获得4组单克隆细胞株。比较不同组的单克隆细胞株抗体表达量,结果显示,转染UCOE 1.5 kb、2.5 kb的单克隆细胞株抗体表达量是对照组的1.5~2倍,转染UCOE 4.0 kb的单克隆细胞株抗体表达量是对照组的3~4倍;两个看家基因启动子基因序列对目的基因表达的增强作用可相互叠加。

关键词：泛染色体开放元件中国仓鼠卵巢细胞抗体表达看家基因

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肿瘤联合免疫治疗研究进展

中国药科大学学报 2018年第4期49卷 383-391页

作者：张瑞江涛曾添筑姚文兵高向东田浤中国药科大学江苏省生物药物成药性研究重点实验室生命科学与技术学院南京210009

免疫检查点是免疫系统中抑制性的信号通路,通过与共刺激分子保持平衡,维持对自身组织的耐受,避免自身免疫反应。肿瘤的发生伴随着共抑制分子与相关配体的上调,引起T细胞功能衰退或耗竭,从而发生肿瘤细胞的免疫逃逸。针对抑制性受体与配... 详细信息

免疫检查点是免疫系统中抑制性的信号通路,通过与共刺激分子保持平衡,维持对自身组织的耐受,避免自身免疫反应。肿瘤的发生伴随着共抑制分子与相关配体的上调,引起T细胞功能衰退或耗竭,从而发生肿瘤细胞的免疫逃逸。针对抑制性受体与配体开发单抗药物,调节T细胞活性提高抗肿瘤免疫反应,已经取得较好的临床效果。对免疫调节信号通路采取联合治疗也体现出一定的协同作用。本文对肿瘤联合免疫治疗方案与协同作用评价进行综述,并对联合免疫治疗的可行性及免疫方案的选择进行展望。

关键词：免疫治疗免疫检查点联合治疗协同作用

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聚乙二醇化蛋白质阳离子树脂色谱行为的研究

药物生物技术 2010年第2期17卷 136-139页

作者：仲恺田浤童玥马辰姚文兵高向东中国药科大学江苏南京210009

以溶菌酶(LYS)作为模式蛋白,对聚乙二醇化蛋白质在不同阳离子交换填料中色谱行为进行了比较研究。考察了不同分子质量的聚乙二醇化溶菌酶(PEG-LYS)在4种阳离子树脂中的动态载样量的差异,同时比较了不同上样量对纯度和洗脱盐浓度的影响... 详细信息

以溶菌酶(LYS)作为模式蛋白,对聚乙二醇化蛋白质在不同阳离子交换填料中色谱行为进行了比较研究。考察了不同分子质量的聚乙二醇化溶菌酶(PEG-LYS)在4种阳离子树脂中的动态载样量的差异,同时比较了不同上样量对纯度和洗脱盐浓度的影响。研究结果显示PEG修饰能降低蛋白质和离子交换树脂的结合力,且随着PEG的分子质量的增加,PEG-LYS动态载样量降低。对相同分子质量的PEG-LYS,产物纯度以及PEG-LYS的洗脱盐浓度随着上样量的增加而降低,研究结果显示,PEG分子质量和上样量对纯化工艺的研究有重要意义。

关键词：聚乙二醇修饰蛋白阳离子交换动态载样量纯化

聚乙二醇化Exendin-4类似物受体亲和力测定方法的建立

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中国药科大学学报 2016年第2期47卷 222-227页

作者：郭林峰胡晓静印蕾田浤姚文兵中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

基于荧光素酶报告基因法和本实验室前期构建的CHO-GLP-1R-CRE-Luc＋检测模型细胞株,建立并优化了长效降糖多肽——聚乙二醇化Exendin-4类似物PE与GLP-1受体的亲和力测定方法,并对其进行了方法学验证。结果表明,当药物作用4 h,化学发光... 详细信息

基于荧光素酶报告基因法和本实验室前期构建的CHO-GLP-1R-CRE-Luc＋检测模型细胞株,建立并优化了长效降糖多肽——聚乙二醇化Exendin-4类似物PE与GLP-1受体的亲和力测定方法,并对其进行了方法学验证。结果表明,当药物作用4 h,化学发光底物作用15 min,检测药物在5.7×10-3-1.5×103nmol/L浓度区间内时,该检测方法的专属性和耐用性良好、准确度和精密度较高,符合《生物制品质量控制分析方法验证技术一般原则》的相关要求。本研究为该类GLP-1受体激动剂药物的快速评价与筛选奠定了基础。

关键词： Exendin-4 聚乙二醇化受体亲和力测定荧光素酶报告基因法

评价肿瘤疫苗免疫原性的新型人免疫系统小鼠模型

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中国药科大学学报 2019年第6期50卷 734-742页

作者：江亮亮江涛罗建华姚文兵田浤中国药科大学生命科学与技术学院江苏省生物药物成药性研究重点实验室南京210009

人免疫系统(human immune system,HIS)小鼠大都用于评价肿瘤疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)效应的能力,却不能准确反映肿瘤疫苗诱导体液免疫应答的能力。本研究利用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,与体外... 详细信息

人免疫系统(human immune system,HIS)小鼠大都用于评价肿瘤疫苗诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)效应的能力,却不能准确反映肿瘤疫苗诱导体液免疫应答的能力。本研究利用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,与体外诱导分化的同源树突状细胞(dendritic cells,DCs)共移植到NCG小鼠中从而建立DC-HIS小鼠模型。在DC-HIS小鼠中,共移植的抗原递呈细胞(HLA-DR^+CD11c^+)能定植于模型小鼠脾脏;DCs共移植也显著提高了激活的人CD4^+ T/CD8^+ T细胞和人B细胞的比例,提示DCs-HIS小鼠能较好的模拟人体的免疫应答情况。利用所构建的DCs-HIS小鼠评价靶向HER2蛋白疫苗(NitraTh-HER2)的免疫原性,结果显示,NitraTh-HER2疫苗能够诱导HER2特异性人IgG抗体的产生,并具有显著的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC),靶细胞SK-BR-3的裂解率达到47.1%;NitraTh-HER2疫苗能够产生抗原特异性的CTL效应,靶细胞SK-BR-3的裂解率达到14.6%。研究结果提示,DC-HIS小鼠模型为预测人类肿瘤疫苗的免疫原性提供了有效的方法。

关键词：人免疫系统小鼠模型肿瘤疫苗同源树突状细胞免疫原性

细胞程序性死亡配体1表位肽疫苗的设计及抗肿瘤活性

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中国药科大学学报 2023年第2期54卷 245-254页

作者：邵世帅段树康田浤姚文兵高向东中国药科大学生命科学与技术学院江苏省生物药物成药性研究重点实验室南京211198

目前已有多款细胞程序性死亡受体1(PD-1)和其配体(PD-L1)免疫检查点阻断抗体用于临床治疗,但只有部分患者表现出临床反应,因此需要一种替代的肿瘤免疫治疗策略。以PD-L1为靶点的治疗性肿瘤疫苗是一种有意义的尝试。本研究设计了以PD-L1... 详细信息

目前已有多款细胞程序性死亡受体1(PD-1)和其配体(PD-L1)免疫检查点阻断抗体用于临床治疗,但只有部分患者表现出临床反应,因此需要一种替代的肿瘤免疫治疗策略。以PD-L1为靶点的治疗性肿瘤疫苗是一种有意义的尝试。本研究设计了以PD-L1为靶点的表位肽疫苗,然后基于人源化免疫系统(HIS)小鼠模型筛选,具有免疫原性的PD-L1表位肽,进一步研究其抗肿瘤活性。结果显示,设计并筛选得到的PD-L1-B1表位肽疫苗不仅成功诱导了PD-L1特异性的体液免疫和细胞免疫,还表现出抗肿瘤活性。此外,免疫治疗还增加了肿瘤的T淋巴细胞浸润,重塑了肿瘤免疫抑制微环境。综上所述,PD-L1-B1表位肽疫苗表现出强效的抗肿瘤活性,对PD-1/PD-L1阻断不敏感的患者可能是一种有效的替代免疫治疗策略。

关键词：肿瘤免疫免疫检查点 PD-L1 表位肽疫苗

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