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大黄素止咳祛痰作用的实验研究

国际呼吸杂志 2024年第4期44卷 453-458页

作者：李宏光田广原李媛那顺布和高笑宇孙德俊内蒙古科技大学包头医学院包头014000 内蒙古自治区人民医院、国家卫健委慢阻肺诊治重点实验室、内蒙古自治区呼吸疾病重点实验室呼和浩特010017 内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021

目的探究中药单体大黄素的止咳祛痰作用。方法本研究为实验研究,采用随机数字表法分为模型组(5只,生理盐水灌胃)、磷酸可待因治疗组(6只,0.03 g·kg^(-1)·d^(-1))、大黄素止咳组(5只,0.2 g·kg^(-1)·d^(-1)),用浓氨水处理小鼠,制备咳... 详细信息

目的探究中药单体大黄素的止咳祛痰作用。方法本研究为实验研究,采用随机数字表法分为模型组(5只,生理盐水灌胃)、磷酸可待因治疗组(6只,0.03 g·kg^(-1)·d^(-1))、大黄素止咳组(5只,0.2 g·kg^(-1)·d^(-1)),用浓氨水处理小鼠,制备咳嗽模型,观察大黄素对小鼠的止咳作用;通过酶联免疫吸附试验检测空白对照组(5只,不吸入浓氨水,不灌胃)及浓氨水引咳实验中模型组和大黄素止咳组小鼠血清中白细胞介素6水平。将小鼠分为阴性对照组(5只,生理盐水灌胃)、氯化铵治疗组(6只,1 g·kg^(-1)·d^(-1))、大黄素祛痰组(5只,0.2 g·kg^(-1)·d^(-1)),采用气管酚红法和肺组织糖原染色评估大黄素的祛痰作用,通过实时荧光定量聚合酶链反应法检测阴性对照组、氯化铵治疗组、大黄素祛痰组小鼠肺组织中黏蛋白5AC(MUC5AC)mRNA的表达水平。结果使用浓氨水处理模型组、磷酸可待因治疗组和大黄素止咳组小鼠,与模型组相比,大黄素可延长小鼠咳嗽潜伏期[(1.8±0.8)s比(53.2±1.9)s,P原染色观察阴性对照组、氯化铵治疗组和大黄素祛痰组小鼠的肺组织发现,大黄素能减少小鼠肺组织中杯状细胞的数量。结论大黄素有一定的止咳祛痰的作用。

关键词：大黄素止咳祛痰浓氨水引咳法气管酚红排泄法

绵羊肺炎支原体P60基因与鼠源IgG Fc基因的融合表达及其免疫原性研究

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绵羊肺炎支原体P60基因与鼠源IgG Fc基因的融合表达及其免疫原性...

作者：田广原内蒙古农业大学

学位级别：硕士

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是引起绵羊间质性肺炎的重要条件性病原菌之一,其引发的肺炎病死率虽不高,但流行的范围较广且发病期长,尤其对于羔羊危害性较大。本研究通过原核表达Mo主要保护性抗原P60蛋白,以此建立了一... 详细信息

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是引起绵羊间质性肺炎的重要条件性病原菌之一,其引发的肺炎病死率虽不高,但流行的范围较广且发病期长,尤其对于羔羊危害性较大。本研究通过原核表达Mo主要保护性抗原P60蛋白,以此建立了一种检测Mo抗体水平的间接ELISA方法,并将P60基因与鼠源IgG Fc片段融合,通过原核表达获得融合蛋白,对蛋白的免疫保护效果进行了研究。主要研究结果有:1、分别对Mo NM2010株的P60基因和小鼠IgG Fc基因进行扩增,并通过SOE-PCR方法将P60基因与小鼠IgG Fc基因融合,最终通过原核表达获得了P60蛋白和P60-Fc融合蛋白。2、将P60蛋白作为诊断抗原,建立了检测绵羊肺炎支原体的间接ELISA方法,包被抗原浓度为0.5μg/m L,孵育条件为37℃、1.5 h,该方法与间接血凝法的总符合率为88.0%,建立的间接ELISA方法为Mo的诊断及流行病学调查提供了较为可靠的方法。3、分别以P60和P60-Fc蛋白为免疫原,通过对小鼠血清特异性IgG和呼吸道黏膜局部s Ig A含量的测定,以及攻毒后小鼠的肺部载菌量和病理切片观察,对其在不同接种途径下的免疫效果进行了评价。结果显示,P60-Fc蛋白配伍SI-301佐剂,首免和二免分别采用肌肉注射和滴鼻方式,免疫效果最佳,既可诱导机体产生良好的全身性免疫反应,又能利用Fc Rn介导P60-Fc蛋白跨越呼吸道黏膜层进入机体并在局部形成有效的黏膜免疫反应,使小鼠抵抗Mo的侵袭。

关键词：绵羊肺炎支原体 P60蛋白间接ELISA 小鼠IgG Fc 融合表达免疫评价

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社区游学:模式特点与未来展望

终身教育研究 2022年第4期33卷 48-54页

作者：孙玫璐田广原石桂荣华东师范大学职业教育与成人教育研究所

社区游学是以游学方式开展的社区教育实践活动。基于对其主要的教育性要素特点的分析,社区游学具有寓学于游的游憩性、高度选择的自主性、同道相和的分众性、非制度化的灵活性、变熟为生的创新性等主要模式特征。针对当前社区游学项目... 详细信息

社区游学是以游学方式开展的社区教育实践活动。基于对其主要的教育性要素特点的分析,社区游学具有寓学于游的游憩性、高度选择的自主性、同道相和的分众性、非制度化的灵活性、变熟为生的创新性等主要模式特征。针对当前社区游学项目开发和实施中存在的问题,未来社区游学的发展方向和举措建议是:供给上从一元包揽到多元集成,受众上从示范意义到普惠参与,设计上走向专业化,内容上注重针对性、层次性、梯度性、整体性,评价上体现过程性和全面性。

关键词：社区游学模式特点社区教育终身学习

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中国奶牛牛支原体流行病学调查分析

中国农业大学学报 2022年第3期27卷 75-82页

作者：温靖李丹郭婷武春霞周雅坪田广原罗玉霞郝永清内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 内蒙古自治区生态与农业气象中心呼和浩特010052 阿拉善左旗农牧区生态管理综合行政执法局内蒙古巴彦浩特753000

为调查中国奶牛养殖地区牛支原体(Mycoplasma bovis)的流行情况,从2013—2019年,在中国6个奶牛养殖区域集约化牧场,通过随机采样收集犊牛鼻拭子1878份,对样品进行***分离鉴定,并分析***阳性率时间分布,空间分布以及犊牛日龄与***阳性率... 详细信息

为调查中国奶牛养殖地区牛支原体(Mycoplasma bovis)的流行情况,从2013—2019年,在中国6个奶牛养殖区域集约化牧场,通过随机采样收集犊牛鼻拭子1878份,对样品进行***分离鉴定,并分析***阳性率时间分布,空间分布以及犊牛日龄与***阳性率的关系。结果表明:1)空间上,中国不同奶牛养殖地区,***阳性率是不同的。其中西北区(38.7%)高于华东区(35.6%)、华北区(33.6%)、华中区(30.8%)、华南区(29.9%)和西南区(27.1%)。2)时间上,2013—2015年***阳性率平均值为47.9%,三年间***阳性率差异不显著(P>0.05)。2016—2019年,***阳性率平均值为21.1%,四年间***阳性率无显著性差异。2013—2015年***阳性率显著高于2016—2019年***阳性率(P0.05)。4)通过线性回归分析,表明***阳性率与犊牛日龄呈正相关。综上,2013—2019年,中国奶牛养殖地区***阳性率平均值为32.6%,***在中国呈长期流行趋势。季节并不影响***在犊牛中的流行。***阳性率与犊牛日龄呈线性正相关。本研究丰富了中国奶牛养殖地区牛支原体流行情况数据,从病原学角度为预防和临床用药提供重要的数据支撑。

关键词：犊牛牛支原体流行病学调查

工商管理中国本土化路径探析--基于人类学视域下的再思考

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青海民族研究 2024年第2期35卷 108-117页

作者：田广怀化学院湖南怀化418000 河北大学河北保定071000

分析工商管理与人类学的相关性,梳理工商人类学发展与应用的历程,厘清中国本土化管理的思路,对中国工商管理学科和人类学学科发展,具有重要意义。工商管理既是一种经济和社会现象,也是一种组织和文化现象,工商管理不仅要关注对现象的研... 详细信息

分析工商管理与人类学的相关性,梳理工商人类学发展与应用的历程,厘清中国本土化管理的思路,对中国工商管理学科和人类学学科发展,具有重要意义。工商管理既是一种经济和社会现象,也是一种组织和文化现象,工商管理不仅要关注对现象的研究,而且要更关注对企业文化和人文关怀的研究。人类学对文化具有深刻且独特的研究特质,同属行为科学与社会科学,能够对工商管理实践给与理论指导,而民族志的研究方法,更可被广泛应用于工商管理的实践之中。

关键词：工商管理工商人类学中国本土化民族志

绵羊肺炎支原体P60_(58aa-928aa)蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

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中国畜牧兽医 2022年第5期49卷 1960-1969页

作者：田广原王宇琛周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕卞宇晨于佳梁周雨霞内蒙古农业大学兽医微生物学与免疫学实验室呼和浩特010018

【目的】建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)... 详细信息

【目的】建立基于绵羊肺炎支原体表面脂蛋白P60的间接ELISA方法。【方法】利用生物信息学软件对P60蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性最佳的区域,扩增目的基因后构建重组表达载体并进行基因测序,将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导抗原性最佳蛋白表达并进行诱导时间优化;利用SDS-PAGE分析该蛋白分子质量大小及其表达形式。以重组蛋白作为抗原,绵羊肺炎支原体阳性血清作为抗体,通过Western blotting方法分析其反应原性。以重组蛋白为包被抗原,建立抗原性最佳蛋白的间接ELISA抗体检测方法,用该方法对20份阴性血清进行检测,计算阴阳临界值;检测该方法的特异性、敏感性和重复性,并用建立的间接ELISA方法与间接血凝法对92份绵羊临床血清样本进行检测。【结果】经DNAStar分析,P60蛋白第58-928位氨基酸区域的平均抗原指数在0.8~1.7之间,亲水指数为0~2.0,证明该区域(P60_(58aa-928aa))抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到P60_(58aa-928aa)基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导浓度为1 mmol/L,诱导10 h时蛋白表达量较高,蛋白分子质量为42 ku,在大肠杆菌中以包涵体的形式表达;Western blotting结果表明,构建的重组蛋白具有良好的反应原性。对ELISA各条件进行优化结果显示:抗原包被浓度为0.5μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶100,最佳孵育时间为1.5 h,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4000,判定阴阳性血清的临界值为0.36。对口蹄疫病毒(FMDV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、牛支原体(Mb)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)的标准阳性血清的检测均为阴性,证明该方法特异性较强;敏感性试验结果表明,血清稀释度为1∶2048时仍为阳性;批内重复试验和批间重复试验的变异系数均原体的疫苗免疫效果评价和疾病诊断提供了较为可靠的方法。

关键词：绵羊肺炎支原体 P60_(58aa-928aa)蛋白原核表达间接ELISA

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牛病毒性腹泻病毒对新西兰白兔致病性分析及E2蛋白免疫效果的评价

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中国畜牧兽医 2022年第9期49卷 3549-3558页

作者：赵逢淼郭婷周雅坪赵红梅王宇琛田广原孙雅婕卞宇晨于佳梁郝永清内蒙古农业大学兽医微生物学与免疫学实验室呼和浩特010018

【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中,将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组,... 详细信息

【目的】研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染对新西兰白兔的致病性以及BVDV E2重组蛋白的免疫效果。【方法】将实验室培养保存的BVDV病毒纯化并按照Reed-Muench法测定其病毒滴度。在致病性试验中,将10只新西兰白兔随机分为感染组和对照组,每组5只。感染组用1 mL纯化的BVDV病毒攻毒(滴鼻500μL、耳缘静脉注射500μL),对照组用等体积的生理盐水处理,连续3 d,每天1次,每天观察各组兔的临床症状并测量体温;分别于接种病毒后第6、9、12、15、17天通过耳缘静脉采集血液检测血常规;感染病毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定,采集后剖杀并采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织,制备病理切片观察病理变化。在免疫效果评价试验中,将10只新西兰白兔随机分为免疫组和对照组,每组5只,免疫组用E2重组蛋白(1 mg/只)与佐剂混合后经肌内多点注射免疫新西兰白兔,对照组接种等体积生理盐水;共免疫2次,2次免疫间隔为14 d。在一免后0、7、14、21、28 d采集血清,通过间接ELISA方法检测血清中抗重组蛋白特异性抗体水平;在一免后第28天按致病性试验中方法攻毒,在攻毒第17天采集鼻拭子进行RT-PCR鉴定,采集气管、肺脏、脾脏和小肠组织制备病理切片观察病理变化及免疫组织化学检测。【结果】纯化后BVDV的病毒滴度为4.16×10~6 TCID/mL。与对照组相比,感染组部分新西兰白兔6 d内活动减少,采食略微减少,6 d后逐渐恢复正常,在感染第13天出现腹泻症状,从第5天开始体温略微升高,但均在正常范围内波动。与对照组相比,在攻毒第6和9天,感染组白细胞和血小板分别显著和极显著降低(P<0.05;P<0.01);在攻毒第12、15和17天,感染组白细胞、血小板和淋巴细胞均极显著降低(P<0.01)。鼻拭子RT-PCR检测为阳性,气管、肺脏、脾脏及小肠组织表现出轻度至重度的组织病理学变化。间接ELISA检测结果表明,在一免后7 d时,血清抗体滴度为1∶16~1∶32;在一免后28 d时,血清抗体滴度为1∶256~1∶512;免疫攻毒组新西兰白兔鼻拭子经RT-PCR检测为阴性;组织病理学观察显示,免疫攻毒组气管及肺脏表现出轻微的组织病理学变化。免疫组化检测结果显示,免疫组结果均呈阴性,对照组结果均为阳性。【结论】通过滴鼻及耳缘静脉注射BVDV的方式可以构建新西兰白兔致病模型,BVDV E2亚单位疫苗能够刺激机体产生特异性抗体,起到免疫防御的作用。

关键词：牛病毒性腹泻病毒新西兰白兔免疫组化亚单位疫苗

牛传染性鼻气管炎病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸的研制

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中国兽医学报 2023年第11期43卷 2221-2227,2250页

作者：卞宇晨田广原王宇琛于佳梁周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕周雨霞内蒙古农业大学兽医学院兽医微生物学与免疫学实验室内蒙古呼和浩特010018

将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体... 详细信息

将gD蛋白用胶体金标记并包被于结合垫作为检测探针,未标记的gD蛋白包被NC膜作为检测线,以金标记鼠IgG与羊抗鼠IgG作为独立质控系统,利用双抗原夹心法建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)抗体的胶体金免疫层析试纸,并对该试纸进行了性能评价。结果显示,该试纸在检测副结核分枝杆菌(MAP)、赤羽病病毒(AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛支原体(***)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;该试纸在检测IBRV标准阳性血清时敏感性为1∶16;将该试纸与进口商品化ELISA试剂盒共同检测60份待检牛血清,两者的阳性符合率为93.3%,阴性符合率为100%,总符合率为96.7%。结果表明,本试验建立的胶体金免疫层析试纸可在10~15 min完成检测,具有快速、准确、简便等特点,为临床定性检测及现场诊断牛传染性鼻气管炎提供了有效工具。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒抗体 gD蛋白 gE蛋白胶体金免疫层析试纸

抗体检测胶体金免疫层析技术中不同拦截模式的初步比较研究

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基因组学与应用生物学 2023年第4期42卷 427-439页

作者：卞宇晨田广原王宇琛于佳梁周雅坪郭婷赵红梅赵逢淼孙雅婕周雨霞内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018

胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应中的一种新型快速检测技术,目前国内外对于抗体检测胶体金免疫层析技术中不同拦截模式的比较研究较少。本研究将牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheiti... 详细信息

胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应中的一种新型快速检测技术,目前国内外对于抗体检测胶体金免疫层析技术中不同拦截模式的比较研究较少。本研究将牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)的gD基因进行了原核表达,以纯化的IBRV gD-pAb作为检测靶标,将胶体金标记的g D蛋白、金黄色葡萄球菌蛋白A(staphylococcal protein A,SPA)、链球菌蛋白G(streptococcal protein G,SPG)、羊抗兔IgG分别包被于金垫,将未标记的上述4种蛋白分别包被于NC膜的检测线处,将金垫和NC膜进行组合,制备出7种抗体拦截模式的胶体金免疫层析试纸,通过比较其灵敏度、显色效果及批内重复性来评价不同拦截模式的实际性能。结果显示,标记抗原-SPG、标记抗原-SPA、标记抗原-二抗拦截模式(间接法)的灵敏度约为标记抗原-抗原拦截模式(双抗原夹心法)的200倍;间接法中标记抗原-SPG、标记抗原-SPA与标记SPG-抗原、标记二抗-抗原拦截模式的灵敏度相近,而标记抗原-二抗拦截模式及标记SPA-抗原拦截模式由于IgG结合蛋白的特性而导致试纸的灵敏度降低、显色效果及批内重复性变差;7种抗体拦截模式试纸在检测副结核分枝杆菌(Mycobacterium avium ***,MAP)、赤羽病病毒(akabane virus,AKAV)、牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛支原体(Mycoplasma bovis)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)、布氏杆菌(Brucella)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的标准阳性血清时均为阴性反应;IgG结合蛋白的实际性能排序为SPG>SPA>二抗。本研究为其他疫病抗体检测的胶体金免疫层析试纸的制备提供参考。

关键词：胶体金免疫层析技术间接法双抗原夹心法金黄色葡萄球菌蛋白A 链球菌蛋白G