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不同种子细胞复合壳聚糖水凝胶构建可注射组织工程髓核的比较研究

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中国修复重建外科杂志 2010年第7期24卷 806-810页

作者：王建刘杰田华科李长青周跃第三军医大学新桥医院骨科重庆400037

目的比较兔髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)和BMSCs在温敏性壳聚糖水凝胶支架中的生长及细胞外基质合成,筛选用于构建可注射组织工程髓核的种子细胞。方法取3周龄新西兰乳兔,体重150～200g,雌雄不限,分离培养兔NPCs;取1月龄新西... 详细信息

目的比较兔髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)和BMSCs在温敏性壳聚糖水凝胶支架中的生长及细胞外基质合成,筛选用于构建可注射组织工程髓核的种子细胞。方法取3周龄新西兰乳兔,体重150～200g,雌雄不限,分离培养兔NPCs;取1月龄新西兰白兔,体重1.0～1.5kg,雌雄不限,穿刺抽取骨髓分离培养BMSCs。以壳聚糖、β甘油磷酸钠水溶液和羟乙基纤维素溶液为原料制备壳聚糖水凝胶支架。取第2代NPCs和第3代BMSCs分别与壳聚糖水凝胶混匀,构建可注射组织工程髓核。复合培养2d,观察NPCs和BMSCs在壳聚糖水凝胶中的存活情况;复合培养1周,扫描电镜观察两种细胞在支架中的生长分布;复合培养3周,行组织学、免疫组织化学检查,并用RT-PCR检测组织工程髓核中聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果温敏性壳聚糖水凝胶室温呈液态,37℃放置15min发生交联反应成为半固态凝胶。吖啶橙/碘化丙啶染色示壳聚糖水凝胶中多数NPCs和BMSCs存活,少数死亡,细胞存活率均>90%。扫描电镜示NPCs和BMSCs分布于网状支架中,细胞表面有分泌的细胞外基质。HE染色、番红O染色及免疫组织化学染色显示细胞具有分泌细胞外基质的功能。RT-PCR检测示NPCs在壳聚糖水凝胶支架中复合培养3周,Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达量分别为0.564±0.071、0.725±0.046,BMSCs复合培养物分别为0.713±0.058、0.852±0.076,两种细胞比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论温敏性壳聚糖水凝胶具有良好的细胞相容性,与NPCs比较,BMSCs复合壳聚糖水凝胶培养保持了更好的形态、增殖及细胞外基质合成功能。

关键词：组织工程髓核髓核细胞 BMSCs 温敏性壳聚糖水凝胶兔

基于温敏性壳聚糖水凝胶的可注射性组织工程髓核的初步实验研究

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基于温敏性壳聚糖水凝胶的可注射性组织工程髓核的初步实验研究

作者：田华科第三军医大学

学位级别：硕士

目的验证自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶作为髓核细胞支架材料构建组织工程髓核的可行性。方法 1.温敏性壳聚糖水凝胶的制备及生物学评价以壳聚糖、β-甘油磷酸钠水溶液和羟乙基纤维素溶液为原料制备壳聚糖水凝胶支架,观察其物理性状... 详细信息

目的验证自行制备的温敏性壳聚糖水凝胶作为髓核细胞支架材料构建组织工程髓核的可行性。方法 1.温敏性壳聚糖水凝胶的制备及生物学评价以壳聚糖、β-甘油磷酸钠水溶液和羟乙基纤维素溶液为原料制备壳聚糖水凝胶支架,观察其物理性状,并进行全身毒性、细胞毒性和组织相容性等生物学评价。 2.体外构建可注射性组织工程髓核及相关检测将壳聚糖水凝胶支架与兔髓核细胞复合构建组织工程髓核。复合培养2 d,观察髓核细胞在支架中的存活情况;复合培养1周,扫描电镜观察髓核细胞在支架上的生长情况;复合培养3周后,行组织学、免疫组织化学检测,并用RT-PCR方法检测其分泌的聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原mRNA表达。 3.可注射性组织工程髓核修复退变椎间盘的研究 18只新西兰大白兔手术建立腰椎间盘退行性变模型,随机分为3组:对照组、空白组和治疗组。在手术建立椎间盘退行性变模型结束时,在治疗组椎间隙,注射温敏性壳聚糖水凝胶与髓核细胞复合物,对照组注射壳聚糖水凝胶,空白组不予任何干预。观察椎间盘手术前后高度变化;术后12周取材大体观察椎间盘组织结构;免疫组织化学检测Ⅱ型胶原含量,分光光度法测量GAG含量,观察椎间盘退行性变修复效果。结果 1.制备的温敏性壳聚糖水凝胶室温呈液态,37℃放置15min可发生交联反应成为固态凝胶。生物学评价证实温敏性壳聚糖水凝胶材料无全身毒性反应,具有良好的细胞相容性和组织相容性,在生物体内一定时间后可以降解。 2.吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)染色示壳聚糖水凝胶中大多数髓核细胞存活,少数死亡,细胞存活率> 90%;扫描电镜示髓核细胞分布于网状支架中,细胞表面有分泌的ECM;HE、番红O染色及免疫组织化学染色结果显示髓核细胞具有分泌ECM的功能;RT-PCR检测示髓核细胞在壳聚糖水凝胶支架中立体培养3周后Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖基因表达水平较单纯培养高。 3.术后12周治疗组测量椎间隙高度与空白组和对照组比较差异有高度统计学意义 (P < 0.01)。取材大体观察,空白组椎间盘髓核与纤维环不清,中央区域的髓核为纤维组织所替代,对照组的椎间盘中度退行性变,组织结构尚可分清。治疗组的的椎间盘轻度退行性变,组织结构清晰,周围未发现炎症反应,壳聚糖材料完全降解。治疗组Ⅱ型胶原、GAG含量高于空白组和对照组(P < 0.05)。结论温敏性壳聚糖水凝胶材料具有良好生物相容性与安全性,髓核细胞与其复合培养后可保持正常形态及分泌功能,动物实验证实温敏性壳聚糖水凝胶复合髓核细胞具有修复退变椎间盘的能力,有望成为髓核细胞载体应用于组织工程髓核。

关键词：组织工程髓核温敏性壳聚糖水凝胶支架材料

单侧入路经皮椎体后凸成形术治疗重度骨质疏松椎体压缩性骨折

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中国修复重建外科杂志 2009年第1期23卷 68-71页

作者：王建张年春刘杰田华科陈超第三军医大学新桥医院骨科重庆400037

目的探讨单侧入路经皮椎体后凸成形术(percutaneous kyphoplasty,PKP)治疗重度骨质疏松椎体压缩性骨折(osteoporotic vertebral compression fracture,OVCF)的有效性,评价临床疗效。方法2006年5月-2007年10月,使用国产经皮椎体成形(percutaneous vertebroplasty,PVP)和PKP工具包治疗12例椎体重度OVCF,男3例,女9例;年龄56～82岁。病程1～49个月,平均4.2个月。重度OVCF位于胸椎11个,腰椎4个,其中3个胸椎为极度压缩骨折;非重度OVCF位于胸椎4个,腰椎3个。单椎体4例,双椎体6例,三椎体2例。在C臂X线机透视监视下,胸椎经后外侧入路,腰椎经椎弓根入路完成单侧PKP和PVP。PKP治疗8个胸椎和4个腰椎重度OVCF,PVP治疗7个非重度OVCF。结果12例19个椎体手术过程顺利,3个胸椎极度压缩骨折不能完成PKP治疗。术中球囊最大扩张压力为(1068±296)kPa,球囊扩张容积为(3.1±1.2)mL;每个椎体手术时间PKP为(44.9±10.6)min,PVP为(36.5±6.8)min;骨水泥填充量胸椎(2.5±0.6)mL,腰椎(3.6±1.2)mL。术后住院时间(3.7±1.6)d。12例均获随访,随访时间5～18个月,平均8.6个月。术后2d及末次随访时视觉疼痛模拟评分法评分分别为(2.35±0.61)分和(2.89±1.07)分,与术前(8.27±1.36)分比较差异均有统计学意义(P0.05)。6例9个椎体术中发生骨水泥外漏至椎旁软组织和/或椎间盘,无明显临床症状。结论单侧入路PKP是治疗重度OVCF安全有效的方法,能够有效缓解疼痛。

关键词：经皮椎体后凸成形术压缩性骨折胸椎腰椎

以Rho／ROCK为靶点治疗创伤性脊髓损伤的研究进展

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中华创伤杂志 2014年第4期30卷 376-379页

作者：田华科官正华宁亚蕾杨星华解放军第三二四医院创伤显微外科重庆400020 第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

创伤性脊髓损伤指机械外力作用而非肿瘤、结核、发育等因素造成的脊髓损害，包括原发性和继发性损伤，前者由机械力直接导致，不可逆转；而后者是由原发损伤造成的炎症、水肿、兴奋性毒性、氧化应激等系列级联反应，是决定损伤程度和预... 详细信息

创伤性脊髓损伤指机械外力作用而非肿瘤、结核、发育等因素造成的脊髓损害，包括原发性和继发性损伤，前者由机械力直接导致，不可逆转；而后者是由原发损伤造成的炎症、水肿、兴奋性毒性、氧化应激等系列级联反应，是决定损伤程度和预后的关键，且可以预防和逆转。目前，脊髓损伤治疗药物主要是针对各类继发性损伤，在这些药物中，针对小G蛋白Rho及其激酶ROCK的药物显示出良好的临床应用前景。笔者拟综述Rho／ROCK信号通路在创伤性脊髓损伤中的作用机制及以其为靶点的治疗研究进展。

关键词：创伤性脊髓损伤靶点治疗 Rho 继发性损伤治疗药物兴奋性毒性脊髓损害级联反应

单侧椎弓根外入路经皮椎体成形和后凸成形术治疗高位胸椎转移性肿瘤

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中国矫形外科杂志 2010年第1期18卷 34-37页

作者：王建周跃陈超刘杰田华科第三军医大学新桥医院骨科重庆400037

[目的]探讨单侧椎弓根外入路经皮椎体成形（percutaneousv ertebroplasly，PVP）和后凸成形术（percutaneous kyphoplasty，PKP）治疗高位胸椎转移性肿瘤柞体破坏的可行性和安全性，评价临床疗效。[方法]2008年3月，1例T1～3肺癌转移，... 详细信息

[目的]探讨单侧椎弓根外入路经皮椎体成形（percutaneousv ertebroplasly，PVP）和后凸成形术（percutaneous kyphoplasty，PKP）治疗高位胸椎转移性肿瘤柞体破坏的可行性和安全性，评价临床疗效。[方法]2008年3月，1例T1～3肺癌转移，男性，59岁，诊断肺瘾8个月，上胸椎及左侧肩部剧烈疼痛6个月，药物镇痛效果不佳，无手术可能，使用国产PVP和PKP工具包，采用局部麻醉，在透视引导下单侧椎弓根外入路完成T2和T3椎体强化。随访观察治疗效果。[结果]手术过程顺利，T3和T2椎体分别进行PKP和PVP治疗，T1椎体因患者不能继续耐受而放弃。T3椎体PKP时间57min，骨水泥填充量1．9ml，T2椎体PVP时间49min，骨水泥填充量1．5ml。T2椎体左侧椎弓根破坏骨水泥外漏但无临床症状，无其它并发症发生、患者术后5d出院。术前、术后2d和3个月随访时VAS评分分别为10分、3分和6分．使用镇痛药物可控制疼痛．[结论]单侧椎弓根外入路PVP和PKP是治疗高位胸椎转移件肿瘤的安全有效方法，能够有效缓解疼痛。

关键词：经皮椎体后凸成形术经皮椎体成形术胸椎肿瘤转移

新型组合式腰椎间融合器的研制和生物力学评价

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中国临床解剖学杂志 2009年第5期27卷 588-591页

作者：丁金勇钱莘吴小程田华科刘涛周跃第三军医大学附属新桥医院骨科重庆400037 武警广东总队医院肿瘤科广州510507

目的:介绍新型组合式腰椎间融合器的设计原理和构型,并对其进行生物力学评价。方法:采用聚醚醚酮材料研制一种具有组合式构型的腰椎椎间融合器,在新鲜小牛脊柱功能节段标本上测试正常组(完整状态)、椎间盘摘除组(不稳组)、自体植骨融合... 详细信息

目的:介绍新型组合式腰椎间融合器的设计原理和构型,并对其进行生物力学评价。方法:采用聚醚醚酮材料研制一种具有组合式构型的腰椎椎间融合器,在新鲜小牛脊柱功能节段标本上测试正常组(完整状态)、椎间盘摘除组(不稳组)、自体植骨融合组、传统PEEK融合器组(与新型融合器材料大小形状相同)、新型PEEK融合器组合组(融合器在组合状态)、新型PEEK融合器分开组(融合器在分开状态)在前屈、后伸、左、右侧屈、左右旋转状态下的活动角度值(Range of Motion,ROM)和压缩载荷和拔出力(分别在装载植骨、未装载植骨时)。结果:(1)新型分开组与正常组、不稳组和植骨组在前屈、后伸、左右侧弯4种状态比较,P0.05,无统计学差异;(3)新型分开组左、右旋转状态与正常组和植骨组相比,P>0.05,无显著统计学意义,但与传统融合组、新型组合组相比,ROM数值增大,P<0.05,有统计学差异。(4)新型融合器分开组在未植骨和植骨时的压缩载荷值大于传统融合器组、新型融合器组合组,但无统计学差异;(5)新型融合器分开组拔出力在植骨和未植骨时均低于传统融合器组和新型融合器组合组,但无统计学差异。结论:新型组合式腰椎间融合器体外生物力学实验显示具有良好的植入运动稳定性和抗压缩载荷、抗拔出性能,能满足临床植入的生物力学要求,尤其是微创脊柱外科手术中。

关键词：椎间融合器腰椎功能节段生物力学

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认知增强药物和补充剂的军事应用研究进展

军事医学 2019年第5期43卷 380-385页

作者：宁亚蕾田华科周元国陆军军医大学大坪医院陆军特殊职业疾病防控研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 解放军958医院创伤显微外科重庆400020

现代战争模式下,极端军事环境、高强度军事作业以及高新武器和作战形式的应用对军人的认知和执行能力提出了更高要求。如何维持和提升军人认知和作战能力已成为军事认知神经科学领域的研究热点。该文综述了认知增强药物和补充剂的分类... 详细信息

现代战争模式下,极端军事环境、高强度军事作业以及高新武器和作战形式的应用对军人的认知和执行能力提出了更高要求。如何维持和提升军人认知和作战能力已成为军事认知神经科学领域的研究热点。该文综述了认知增强药物和补充剂的分类、作用机制及在军事领域中的应用进展。

关键词：认知增强军事认知促智药

压力控制下椎间盘造影在诊断椎间盘源性疼痛中的应用

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中国脊柱脊髓杂志 2009年第6期19卷 408-411页

作者：王建周跃李长青张正丰陈超刘杰田华科第三军医大学新桥医院骨科重庆市400037

目的：评价压力控制下椎间盘造影诊断椎间盘源性疼痛的临床价值。方法：2007年3月－2008年5月，对69例慢性腰痛患者的156个MRI“黑椎间盘”进行压力控制下造影。男26例，女43例；年龄29-48岁，平均39．7岁；病程6-120个月，平均36．1个... 详细信息

目的：评价压力控制下椎间盘造影诊断椎间盘源性疼痛的临床价值。方法：2007年3月－2008年5月，对69例慢性腰痛患者的156个MRI“黑椎间盘”进行压力控制下造影。男26例，女43例；年龄29-48岁，平均39．7岁；病程6-120个月，平均36．1个月。采用椎间盘后外侧入路穿刺，穿刺针针尖到达椎间盘中央后连接压力泵，注射造影剂并连续观察压力变化和患者疼痛反应，记录注射压力和诱发疼痛情况。结果：69例患者156个“黑椎间盘”均完成在压力控制下的造影，同时对73个MRI信号正常的椎间盘造影作为对照。在不设定注射压力限制值情况下，58例（84．06％）共131个（83．97％）“黑椎间盘”造影时出现与平时一致性疼痛，22个出现非一致性疼痛，3个未出现疼痛；4个正常椎间盘出现疼痛。当注射压力≤30psi时，46例（66，67％）共105个（67．31％）“黑椎间盘”有一致性疼痛，未出现非一致疼痛和正常椎间盘疼痛。结论：椎间盘造影是诊断慢性腰痛患者椎间盘源性疼痛的有效方法，但应在较低压下注射和判断阳性结果。

关键词：慢性腰痛椎间盘造影一致性疼痛椎间盘源性疼痛压力控制下

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美军轻度颅脑战创伤诊治进展及启示

军事医学 2017年第2期41卷 150-152,F0003页

作者：宁亚蕾田华科周元国第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心国家创伤、烧伤与复合伤重点实验室脑科学协同创新中心重庆400042 解放军324医院创伤显微外科重庆400020

在近年的阿富汗和伊拉克战争中,创伤性脑损伤已成为"现代战争的特征性损伤",其中大部分为轻度伤,因发病隐匿、误诊漏诊而造成美军战后出现大量神经精神后遗症患者,给个人、家庭和社会带来深远的影响。该文综述了美军对创伤性脑损伤研究... 详细信息

在近年的阿富汗和伊拉克战争中,创伤性脑损伤已成为"现代战争的特征性损伤",其中大部分为轻度伤,因发病隐匿、误诊漏诊而造成美军战后出现大量神经精神后遗症患者,给个人、家庭和社会带来深远的影响。该文综述了美军对创伤性脑损伤研究和防治的投入情况及战场中轻度创伤性脑损伤诊断、处理和治疗的进展,并提出了对我军的启示。

关键词：创伤性脑损伤脑震荡美军救治