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温度刺激和鳗弧菌感染对牙鲆Hsp90基因表达的影响

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温度刺激和鳗弧菌感染对牙鲆Hsp90基因表达的影响

作者：生安志扬州大学

学位级别：硕士

牙鲆Paralichthys olivaceus)是我国的重要海水养殖鱼类,病害频繁发生影响该养殖品种的可持续发展。热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是一类在有机体受到高温等逆境刺激后大量表达的伴侣蛋白,在环境胁迫和免疫反应中发挥重要作用,了... 详细信息

牙鲆Paralichthys olivaceus)是我国的重要海水养殖鱼类,病害频繁发生影响该养殖品种的可持续发展。热激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是一类在有机体受到高温等逆境刺激后大量表达的伴侣蛋白,在环境胁迫和免疫反应中发挥重要作用,了解牙鲆热激蛋白的作用机制对疾病防治有重要的意义。本研究开展了牙鲆Hsp90α和Hsp90β基因在温度刺激和病原菌感染下表达变化,旨在为牙鲆疾病控制提供理论指导。主要研究内容和结果如下：1. Hsp90基因在不同发育期牙鲆的表达分布：利用实时荧光定量PCR,检测Hsp90α和Hsp90β基因mRNA在不同发育期牙鲆(20g-lKg)的表达分布,结果显示,Hsp90α和Hsp90β在检测的不同发育期牙鲆的13种组织(肝脏、脾脏、头肾、后肾、心、肌肉、皮肤、胃、肠、鳃、腹鳍、脑和血液)中均有表达。在检测的不同发育期牙鲆中Hsp90β的表达水平整体高于Hsp90α;检测还发现在8月龄(200g±50g)牙鲆在肝、鳃、背皮、背肌、腹鳍的Hsp90α表达量要显著高于其他发育期同组织的表达量(P<0.05),而Hsp90β在各不同大小牙鲆的表达量也具有明显的差异。2.温度和鳗弧菌感染对牙鲆Hsp90基因表达的影响：选取8月龄牙鲆在5-32℃C刺激1h后,牙鲆肝脏、脾脏Hsp90α在高温(22-32℃)的表达量急骤升高,而Hsp90β在不同温度刺激期间表达量变化较小;在10℃、28℃连续刺激8h,Hsp90α和Hsp90β的mRNA的表现为先升后降的趋势,Hsp90α在高温时的表达量变化幅度明显高于Hsp90β。用鳗弧菌感染8月龄牙鲆,在感染72h内,牙鲆脾脏Hsp90α和Hsp90β的表达量先降后升,Hsp90β上升的幅度明显(P<0.05)。结果表明,Hsp90α对高温热应激的反应明显,Hsp90β在对病原菌感染的反应明显。3.牙鲆Hsp90α的原核表达：将Hsp90α基因克隆到pBAD/gⅢA质粒中,构建重组载体pBAD/gⅢA-Hsp90,并转入到大肠杆菌Top10感受态细胞中,经过L-阿拉伯糖诱导表达,对目的蛋白进行Western Blot检测以及做质谱表达分析验证,结果表明重组蛋白得到正确表达,为后续对Hsp90α蛋白的研究提供基础条件。

关键词： Hsp90 组织分布温度刺激病原感染原核表达

miRNA-143表达载体构建及表达活性检测

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2012年第3期33卷 9-12页

作者：姜星生安志白立景鞠辉明扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

以大白猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miRNA-143前体序列,构建重组载体pEGP-miR-143,转染猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,再利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内miRNA-143的表达,以检测外源基因的表达活... 详细信息

以大白猪基因组DNA为模板,利用PCR扩增miRNA-143前体序列,构建重组载体pEGP-miR-143,转染猪胎儿成纤维细胞,通过荧光观察转染效率和报告基因表达效率,再利用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)测定细胞内miRNA-143的表达,以检测外源基因的表达活性;对PCR产物进行测序鉴定及重组载体酶切验证。结果表明:成功构建了pEGP-miR-143载体;转染细胞后进行荧光观察,载体中GFP有较好的表达活性;QRT-PCR表明,与对照组细胞相比,试验组miRNA-143表达有显著提升,差异极显著(P<0.01)。说明已成功制备miRNA-143过表达载体,为在动物细胞和体内开展miRNA-143相应的功能研究奠定基础。

关键词：大白猪基因组 miRNA-143 microRNA 真核表达载体

牙鲆(Paralichthys olivaceus)Hsp90 mRNA在温度刺激和鳗弧菌感染下的表达特征

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渔业科学进展 2016年第5期37卷 1-8页

作者：生安志鞠辉明李贵阳李杰莫照兰扬州大学兽医学院扬州225009 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛266071 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室青岛266071

利用qPCR方法,检测Hsp90α和Hsp90βm RNA在不同月龄牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同组织的表达水平,进一步检测在不同温度刺激、鳗弧菌感染后的表达变化。结果显示,Hsp90α和Hsp90β在不同发育期的13种组织(肝脏、脾脏、头肾、后肾... 详细信息

利用qPCR方法,检测Hsp90α和Hsp90βm RNA在不同月龄牙鲆(Paralichthys olivaceus)不同组织的表达水平,进一步检测在不同温度刺激、鳗弧菌感染后的表达变化。结果显示,Hsp90α和Hsp90β在不同发育期的13种组织(肝脏、脾脏、头肾、后肾、心、肌肉、背皮、胃、肠、鳃、腹鳍、脑和血液)中均有表达。Hsp90β表达水平整体高于Hsp90α;8月龄牙鲆在肝、鳃、背皮、背肌、腹鳍的Hsp90α表达量要显著高于其他发育期(1月龄、12月龄、24月龄)同组织的表达量(P<0.05),而Hsp90β在不同月龄牙鲆的表达量也存在差异,在肝和肠的表达量较高,在鳃、背肌和腹鳍的表达量较低。将8月龄牙鲆在5–32℃刺激1 h,牙鲆肝、脾Hsp90α在高温(22–32℃)的表达量显著升高(P<0.05),而Hsp90β在低温(5–10℃)的表达量显著升高(P<0.05);在10℃、28℃连续刺激8 h,Hsp90α和Hsp90β的m RNA的表达量呈先上升后下降的趋势,Hsp90α的表达量变化幅度显著高于Hsp90β(P<0.05)。在鳗弧菌感染72 h内,牙鲆脾脏Hsp90α和Hsp90β的表达量先下降后上升,Hsp90β上升的幅度更加显著(P<0.05)。结果显示,Hsp90α和Hsp90β在不同月龄、不同组织的表达水平存在差异,Hsp90α在高温时对热应激的反应明显,Hsp90β在低温和对病原菌感染的反应明显,研究结果可为了解牙鲆Hsp90的作用机制提供参考。

关键词：牙鲆 Hsp90α和Hsp90β q PCR 温度刺激鳗弧菌感染

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基于生态系统服务流的东北地区水安全格局

水资源保护 2024年第3期40卷 11-19,27页

作者：孙才志安志英辽宁师范大学海洋可持续发展研究院辽宁大连116029 辽宁师范大学地理科学学院辽宁大连116029

基于供水服务“供流需”(供给流动需求)的研究思路构建水安全框架,采用水生态系统服务供需比测度水生态系统供需服务盈余和赤字状态,提取水生态“源”“汇”区,采用最小累计阻力模型识别“源汇”廊道和脆弱节点,进而分析东北地区水安全... 详细信息

基于供水服务“供流需”(供给流动需求)的研究思路构建水安全框架,采用水生态系统服务供需比测度水生态系统供需服务盈余和赤字状态,提取水生态“源”“汇”区,采用最小累计阻力模型识别“源汇”廊道和脆弱节点,进而分析东北地区水安全格局。结果表明:2000—2020年东北地区产水量和需水量均呈增加态势,空间上产水量大致呈东多西少分布,需水量的空间分布与人口密度、社会经济发展程度高度一致;整体而言,研究期内水生态系统供需服务主要表现为盈余状态,且盈余面积逐渐增加;水生态“源”区主要分布在东部及中部地区的耕地和林地,水生态“汇”区主要集中在西部地区的耕地、林地和未利用地;东北地区的水生态“源汇”廊道主要为松花江、绥芬河、辽河、图们江、大凌河、太子河等河流及其支流;辽宁中部、长春、哈尔滨等地多个供水节点较为脆弱,黑龙江中部的供水节点需要加强保护。

关键词：水资源生态系统服务流产水量需水量东北地区

我国东北生态系统服务供需匹配关系——基于水-能源-粮食纽带视角

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生态学报 2024年第10期44卷 4170-4186页

作者：安志英孙才志郝帅辽宁师范大学地理科学学院大连116029 辽宁师范大学海洋可持续发展研究院大连116029

水、能源和粮食是人类生存发展的必要基础物资,其供给均主要源于生态系统。随着全球气候变化和人类社会经济快速发展,基础资源需求量激增,生态系统服务供需关系趋于紧张。厘清生态系统服务供需匹配关系、优化基础资源配置对生态系统可... 详细信息

水、能源和粮食是人类生存发展的必要基础物资,其供给均主要源于生态系统。随着全球气候变化和人类社会经济快速发展,基础资源需求量激增,生态系统服务供需关系趋于紧张。厘清生态系统服务供需匹配关系、优化基础资源配置对生态系统可持续、协调发展具有重要意义。当前生态系统供需关系研究已较为广泛,但基于水-能源-粮食纽带的生态系统服务研究还相对较为缺乏。因此,以东北地区为例,基于水-能源-粮食关系视角,首先,借助InVEST模型、供需指数(SDI)、Spearman相关性分析等方法分析了产水(WY)、固碳(CS)和粮食(FP)供需服务时空格局、相关性和空间匹配模式;其次,基于省级、市级、县级、流域、格网5种不同空间尺度,进一步探究了各服务的空间尺度效应,并确定资源管理的最优空间尺度;最后依据“分区控制-分类策略-分级治理”理念提出了一种水-能源-粮食集成管理方案和政策建议。研究结果表明:(1)2000—2020年,东北地区的供给服务中WY和FP为上升态势、CS为下降态势,就空间分布来看,WY和CS大致为“东高西低”,FP则是“西南、东北高,西北、东南低”;需求服务中WY、CS和FP均为上升态势,空间上大致呈“中间高四周低”分布。(2)WY和FP的SDI上升,CS则相反;不同尺度下的SDI具有空间异质性,县域尺度最为显著。(3)FP为主要功能分区,重点管控为主要分类,亟待全面提升生态系统服务供给能力。本研究对区域基础资源合理配置和可持续的生态系统管理具有重要科学参考价值和现实意义,同时对东北地区生态系统供需服务匹配以及水-能源-粮食纽带协同发展具有重要意义。

关键词：水-能源-粮食生态系统服务供需匹配集成管理

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基于SO(3)群几何精确Kirchhoff梁理论的细长梁动力学

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Acta Mechanica Sinica 2024年第4期40卷 212-225页

作者：安志朋王斌侯云森刘铖 MOE Key Laboratory of Dynamics and Control of Flight Vehicle School of Aerospace EngineeringBeijing Institute of TechnologyBeijing100081China CAEP Software Center for High Performance Numerical Simulation Beijing100088China Institute of Applied Physics and Computational Mathematics Beijing100088China

本研究旨在开发一种高效的细长梁单元,精确描述细长柔性结构的大变形和大旋转,在现有细长梁单元研究的基础上,提出一种基于SO(3)群活动标架的二阶几何精确Kirchhoff梁单元(GEKBF),用于细长梁的动力学研究.首先,在此标架中推导出运动学... 详细信息

本研究旨在开发一种高效的细长梁单元,精确描述细长柔性结构的大变形和大旋转,在现有细长梁单元研究的基础上,提出一种基于SO(3)群活动标架的二阶几何精确Kirchhoff梁单元(GEKBF),用于细长梁的动力学研究.首先,在此标架中推导出运动学描述和几何、本构和动态平衡方程及其线性化.然后,引入相对扭转角的二阶插值函数,以提高单元的收敛性,通过选择合适的标架来开发旋转矢量参数化.它可以显著减少由刚体旋转引起的几何非线性,并提高描述当前标架下单元旋转公式的计算效率.此外,考虑了参考标架的影响,并使用空间平行移动而非时间平行移动,简化了弹性力和雅可比矩阵的推导.使用李群广义α-方法求解李群上的半离散运动方程.最后,通过数值实例验证了GEKBF的准确性,包括静力学和动力学.

关键词：平行移动标架弹性力旋转矢量细长梁柔性结构半离散动态平衡

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肿瘤微环境可视化技术研究进展

生命科学 2023年第11期35卷 1442-1449页

作者：张娜生安志金海振郭莉莉孙攀张含杨晓华田聆上海交通大学医学院附属胸科医院·上海市胸科医院中心实验室上海200025

肿瘤的发生、发展与转移等生物学行为与肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)密切相关。TME中的非癌细胞(如成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞等)及细胞外基质等对肿瘤细胞的生物学行为有着极其重要的影响;TME中的生理参数(如细胞的组... 详细信息

肿瘤的发生、发展与转移等生物学行为与肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)密切相关。TME中的非癌细胞(如成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞等)及细胞外基质等对肿瘤细胞的生物学行为有着极其重要的影响;TME中的生理参数(如细胞的组成和丰度、关键基因的表达等)与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。免疫治疗是一种很有潜力的肿瘤治疗方法,然而,TME的异质性可能是导致免疫耐受的原因之一。对TME的可视化研究,可直观描绘TME中不同细胞类型的动态行为,在时间与空间维度揭示TME与肿瘤生长、侵袭的协同关系,发现更多潜在的免疫治疗靶点,提高免疫治疗的有效性。因此,TME研究模型与可视化技术对于TME的可视化研究至关重要。本文主要综述了3D培养系统、类器官与人源化PDX等TME可视化研究模型以及多重免疫组织化学、多重免疫荧光、成像型质谱流式和CRISPR/Cas9基因编辑等技术在TME可视化研究中的应用进展。

关键词：肿瘤微环境肿瘤可视化研究基因编辑技术多重免疫组织化学技术多重免疫荧光技术质谱流式技术

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产时发热的影响因素

中华围产医学杂志 2024年第5期27卷 402-405页

作者：安闻生蔺莉北京大学国际医院妇产科北京102206

目的分析产时发热的影响因素。方法回顾性研究2017年5月1日至2020年5月30日于北京大学国际医院产前检查并分娩、产时发热的357例(发热组)及未发热的454例(未发热组)产妇。收集产妇产前和产时临床资料,采用独立样本t检验、Mann-Whitney ... 详细信息

目的分析产时发热的影响因素。方法回顾性研究2017年5月1日至2020年5月30日于北京大学国际医院产前检查并分娩、产时发热的357例(发热组)及未发热的454例(未发热组)产妇。收集产妇产前和产时临床资料,采用独立样本t检验、Mann-Whitney U检验或χ^(2)检验进行组间比较,采用单因素和多因素logistic回归分析,筛选与产时发热相关的危险因素。结果(1)发热组年龄≥35岁和合并贫血的比例低于无发热组[10.9%(39/357)与17.0%(77/454),χ^(2)=5.94,P=0.015;7.3%(26/357)与20.3%(92/454),χ^(2)=27.09,P生产时发热的危险因素(P值均<0.05)。结论产时发热的影响因素包括胎膜早破、分娩镇痛、总产程、分娩时羊水胎粪污染、合并阴道炎、促宫颈成熟、胎膜破裂至胎儿娩出时间和合并贫血等。临床医师应加强产妇体温的监测和对产程的管理,关注产时发热的影响因素,尤其应加强对促宫颈成熟、分娩镇痛、胎膜破裂后的产程管理,减少产时发热,改善母婴结局。

关键词：分娩并发症发热镇痛,产科胎膜早破危险因素病例对照研究

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基于“供—流—需”的东北地区水安全格局

水资源保护 2024年

作者：孙才志安志英辽宁师范大学地理科学学院教育部人文社科重点研究基地辽宁师范大学海洋可持续发展研究院

明晰水资源流动下的安全格局对水资源可持续管理具有重要意义。首先，基于“供—流—需”构建水安全框架；其次，借助InVEST模型、生态供需比测度水资源盈余和赤字状态，并提取水生态“源”、“汇”区；最后，采用MCR模型识别“源—汇... 详细信息

明晰水资源流动下的安全格局对水资源可持续管理具有重要意义。首先，基于“供—流—需”构建水安全框架；其次，借助InVEST模型、生态供需比测度水资源盈余和赤字状态，并提取水生态“源”、“汇”区；最后，采用MCR模型识别“源—汇”廊道和脆弱节点，进而刻画东北地区水安全格局。结果表明：2000—2020年，东北地区产水量和需水量均呈增加态势，空间上产水量大致呈“东多西少”分布，需水量的空间分布与人口密度、社会经济发展程度高度一致；整体而言，水生态供需服务盈余>赤字，且盈余面积逐渐增加；水生态“源”区主要分布在东部及中部地区的耕地和林地，水生态“汇”区主要集中在西部地区的耕地、林地和未利用地；东北地区的水生态“源—汇”廊道主要为松花江、绥芬河、辽河、图们江、大凌河、太子河等及其支流；辽宁中部、长春、哈尔滨等地多个供水节点较为脆弱，黑龙江中部的供水节点需要加强保护。研究结果有助于水生态系统空间配置的优化，对不同尺度上的水安全保障和水资源可持续管理具有重要意义。

关键词：水资源生态系统服务流东北地区