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利用RAPD方法鉴定西瓜杂种纯度的研究

厦门大学学报（自然科学版） 2003年第1期42卷 112-116页

作者：王鸣刚谢放郭小玲厦门大学生命科学学院福建厦门361005 甘肃省园艺总站甘肃兰州730000 厦门大学海洋与环境科学学院福建厦门361005

以不同西瓜杂交种及亲本自交系为材料,研究利用RAPD技术鉴定西瓜杂种的纯度及种质.结果表明:在反应条件适合、引物选择正确的情况下,RAPD技术完全适合于西瓜杂交种纯度的早期鉴定及种质鉴定.同时发现,引物OPD16及OPA07适合种内鉴定,而引... 详细信息

以不同西瓜杂交种及亲本自交系为材料,研究利用RAPD技术鉴定西瓜杂种的纯度及种质.结果表明:在反应条件适合、引物选择正确的情况下,RAPD技术完全适合于西瓜杂交种纯度的早期鉴定及种质鉴定.同时发现,引物OPD16及OPA07适合种内鉴定,而引物OPA10、OPA13、OPH18可用于杂种纯度鉴定.同时,对利用同工酶技术和RAPD技术在进行西瓜杂交种鉴定过程中的优缺点进行了分析与讨论.

关键词： RAPD方法西瓜杂交种鉴定种质鉴定品种选育

一种基于Red的在大肠杆菌中修饰染色体和BAC的新型重组工程系统

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军事医学科学院院刊 2004年第5期28卷 476-479页

作者：陈伟周建光王鸣刚厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 军事医学科学院生物工程研究所北京100850

近 5年来兴起了一种新型的基于λ 噬菌体Red重组系统的重组工程技术 ,它将缺陷型λ 噬菌体整合入大肠杆菌染色体上 ,使 3种重组酶蛋白Exo、Beta和Gam的表达受到严格的调控。Red重组工程技术不受酶切位点的限制 ,只需用 35～ 5 0bp长的... 详细信息

近 5年来兴起了一种新型的基于λ 噬菌体Red重组系统的重组工程技术 ,它将缺陷型λ 噬菌体整合入大肠杆菌染色体上 ,使 3种重组酶蛋白Exo、Beta和Gam的表达受到严格的调控。Red重组工程技术不受酶切位点的限制 ,只需用 35～ 5 0bp长的同源臂就能得到很高的重组效率。运用这种技术能在大肠杆菌体内通过同源重组对大肠杆菌染色体、BAC质粒等复杂DNA片段上的基因进行突变、敲除、替换等修饰 ;此外可运用该技术中缺口修复的方法构建质粒。Red重组工程技术有远大的应用前景 ,将极大地推动功能基因组研究的进展。

关键词： red基因基因修饰遗传工程大肠杆菌

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AML1-ETO基因表达质粒的构建

厦门大学学报（自然科学版） 2003年第3期42卷 393-395页

作者：郭萌陈国强王鸣刚厦门大学生命科学学院福建厦门361005 中国科学院健康中心上海200031

t(8;21)染色体易位是导致急性髓系白血病的最常见的发病机制,AML1 ETO是t(8;21)易位所产生的融合基因.为了研究在细胞中能与AML1 ETO相互作用的蛋白质,利用PCR、酶切、连接、转化、提质粒等分子生物学技术.首先将该基因构建于质粒中,然... 详细信息

t(8;21)染色体易位是导致急性髓系白血病的最常见的发病机制,AML1 ETO是t(8;21)易位所产生的融合基因.为了研究在细胞中能与AML1 ETO相互作用的蛋白质,利用PCR、酶切、连接、转化、提质粒等分子生物学技术.首先将该基因构建于质粒中,然后转染大肠杆菌,并在大肠杆菌中得到扩增,为进一步深入研究打下基础.本次实验所构建的质粒经测序表明,AML1 ETO融合基因以正确的阅读框重组转染入载体,并在大肠杆菌中得到扩增.

关键词：急性髓系白血病发病机制 AMLl-ETO融合基因染色体易位基因表达载体质粒构建

耐盐突变体小麦后代耐盐稳定性分析研究(英文)

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武汉植物学研究 2004年第1期22卷 39-43页

作者：王鸣刚陈亮贾敬芬厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 西北大学生物技术研究室西安710069

以卫星搭载小麦种子为原始材料,利用其幼穗、幼胚诱导的愈伤组织进行耐盐突变体的筛选,对耐盐愈伤组织再生植株后代进行耐盐稳定性生理生化特性分析。结果表明:(1)耐盐系后代在土壤高盐浓度条件下,游离脯氨酸含量稳定增加,且高于对照系;... 详细信息

以卫星搭载小麦种子为原始材料,利用其幼穗、幼胚诱导的愈伤组织进行耐盐突变体的筛选,对耐盐愈伤组织再生植株后代进行耐盐稳定性生理生化特性分析。结果表明:(1)耐盐系后代在土壤高盐浓度条件下,游离脯氨酸含量稳定增加,且高于对照系;(2)耐盐系再生植株后代保持较高的K+/Na+比;(3)与对照相比,种子醇溶蛋白电泳带谱中的b2,b3,b5,b7带为耐盐系所特有,b8带消失;(4)耐盐系再生植株后代可溶蛋白电泳带为26条,而对照系为23条蛋白带。其中98kD、75kD、52kD、49kD和32kD为耐盐系的特有蛋白带。而38kD和35kD蛋白带为对照系所特有。

关键词：耐盐系小麦后代脯氨酸 K^+/Na^+比醇溶蛋白可溶蛋白

脉冲电磁场促进成骨细胞成熟分化依赖于初级纤毛-PI3K/AKT途径

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北京大学学报（医学版） 2019年第2期51卷 245-251页

作者：任茜周建王鸣刚陈克明兰州军区兰州总医院骨科研究所兰州730050 兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050

目的:研究脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields,PEMF)促进大鼠成骨细胞成熟分化是否与初级纤毛和PI3K/AKT途径相关,探讨PEMF促进骨形成的作用机制。方法:用酶解法获取新生SD大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB),50 Hz... 详细信息

目的:研究脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields,PEMF)促进大鼠成骨细胞成熟分化是否与初级纤毛和PI3K/AKT途径相关,探讨PEMF促进骨形成的作用机制。方法:用酶解法获取新生SD大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB),50 Hz、0.6 m T PEMF处理0、0.5、1、1.5和2 h后检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)蛋白表达量及初级纤毛长度和发生率的变化情况;用LY294002阻断PI3K/AKT信号途径,观察PEMF促进ROB成骨性分化是否受到影响;以RNAi法干扰IFT88的基因表达以抑制初级纤毛发生,观察PEMF激活的PI3K/AKT信号途径及ROB的成骨性分化是否受到影响。成骨性分化指标包括碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,real-time PCR法和Western blot法检测的成骨性相关基因BMP-2、COL-1和OSX的基因表达量,以及钙化结节数量等。结果:经PEMF处理0、0.5、1、1.5、2 h后,ROB的PI3K、AKT蛋白表达量升高(P<0.01),初级纤毛变长;其中PI3K在0.5 h时蛋白表达量达到最高,随着PEMF处理时间增加,蛋白表达量降低;AKT在0.5 h和1.5 h时蛋白表达量较高。用PI3K阻断剂LY294002阻断PI3K/AKT信号途径后,PEMF不再能提高成骨细胞中ALP活性和成骨性相关基因BMP-2、COL-1、OSX的基因表达量,但在阻断前PEMF能增加ROB中ALP活性和成骨性相关基因的表达;RNAi干扰初级纤毛发生后,PEMF不再能增加PI3K的蛋白表达量,说明初级纤毛干扰后,PEMF不能激活PI3K/AKT信号途径;其次,PEMF提高ALP活性的作用消失,也不能提高BMP-2、COL-1和OSX的基因表达量,其增加ROB钙化结节形成能力的作用也消失,说明初级纤毛干扰后,PEMF促进成骨细胞成熟矿化的能力消失。结论:PEMF通过成骨细胞表面的初级纤毛激活了PI3K/AKT信号途径,进而发挥了骨形成活性的促进作用。

关键词：脉冲电磁场成骨细胞 RNA干扰 PI3K

蛇床子素对体外培养破骨细胞骨吸收及细胞凋亡的影响

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药学学报 2012年第2期47卷 174-179页

作者：明磊国王鸣刚陈克明周建韩桂秋朱瑞清兰州理工大学生命科学与工程学院兰州军区总医院骨科研究所甘肃兰州730050

研究蛇床子素对破骨细胞骨吸收的影响及其分子机制。采用体外分离、培养兔破骨细胞,与盖玻片及骨磨片共同培养,使用1×10?5 mol.L?1蛇床子素刺激破骨细胞,观察活体细胞并依据HE、TRAP、骨陷窝甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞;进行骨吸收陷窝... 详细信息

研究蛇床子素对破骨细胞骨吸收的影响及其分子机制。采用体外分离、培养兔破骨细胞,与盖玻片及骨磨片共同培养,使用1×10?5 mol.L?1蛇床子素刺激破骨细胞,观察活体细胞并依据HE、TRAP、骨陷窝甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞;进行骨吸收陷窝和面积定量分析,吖啶橙染色统计凋亡细胞;real time PCR及Western blotting法检测相关基因和蛋白。与空白对照组比较,1×10?5 mol.L?1蛇床子素能够明显提高破骨细胞凋亡率并通过抑制RANKL和TRAP等相关基因及JNK1/2磷酸化水平抑制其骨吸收。结果提示,蛇床子素可以通过RANK+RANKL/TRAF6/Mkk/JNK途径刺激破骨细胞凋亡并抑制骨吸收。

关键词：蛇床子素破骨细胞细胞凋亡骨吸收 RANKL OPG TRAP

小麦耐盐变异体的筛选Ⅱ．小麦耐盐细胞系的筛选及生理生化特性的分析

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西北植物学报 1995年第5期15卷 15-20页

作者：王鸣刚牛登科高清祥王亚馥兰州大学生物系

将诱导出的胚性愈伤组织采用：①逐级提高盐浓度进行胁迫筛选；②直接转入高浓度胁迫筛选；③先用羟脯氨酸（Ｈｙｐ）筛选后再转入高浓度盐中进行胁迫筛选，结果表明三种筛选方法其效果为③＞②＞①，即先用Ｈｙｐ筛选再进一步盐胁迫筛... 详细信息

将诱导出的胚性愈伤组织采用：①逐级提高盐浓度进行胁迫筛选；②直接转入高浓度胁迫筛选；③先用羟脯氨酸（Ｈｙｐ）筛选后再转入高浓度盐中进行胁迫筛选，结果表明三种筛选方法其效果为③＞②＞①，即先用Ｈｙｐ筛选再进一步盐胁迫筛选效果最好。并对选出的耐盐细胞进行了生长量测定和生理生化特性的研究，表明耐盐细胞系脯氨酸含量不仅稳定，而且远高于对照，Ｋ￣＋／Ｎａ￣＋也大于对照，ＳＯＤ活性增加，小分子ＳＯＤ含量增加，本文并对有关问题进行了讨论。

关键词：小麦耐盐细胞系脯氨酸 K￣+/Na￣+ 过氧化物歧化酶

淫羊藿苷含药血清对体外培养骨髓间充质干细胞增殖及成骨性分化的影响

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中华中医药杂志 2012年第2期27卷 480-484页

作者：翟远坤王鸣刚李志忠张娜兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 兰州军区疾病预防控制中心实验室兰州730020

目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种... 详细信息

目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响。方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清。分别以2.5%,5%和10%3种血清浓度干预rBMSCs,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9d后的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳血清浓度。以最佳血清浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较SI组和对照组之间的钙盐沉积量、骨钙素分泌量;提取Total RNA,RT-PCR检测IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达情况。结果:所有浓度的含药血清均能抑制rBMSCs的增殖,但可提高ALP活性。5%的SI浓度为最佳干预浓度,该浓度的含药血清可显著促进骨钙素的分泌和钙盐沉积,提高ALP活性,增强IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达。结论:淫羊藿苷经口服后的代谢产物抑制rBMSCs增殖,但可促进成骨性分化,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分。

关键词：淫羊藿苷骨髓间充质干细胞血清增殖成骨性分化

无瓣海桑Sonnerati aapertala钙调蛋白基因的克隆及序列分析

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厦门大学学报（自然科学版） 2002年第6期41卷 796-799页

作者：陈亮杨大林熊玲媛邵寒娟林涛王鸣刚厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005

用高等植物钙调蛋白的保守序列设计两端引物 ,以红树植物海桑属无瓣海桑Sonneratiaapertala总DNA为模板 ,扩增出无瓣海桑钙调蛋白基因 ,并以之构建重组质粒pT ACaM .经测序分析比对 ,发现无瓣海桑钙调蛋白基因全长 1418bp ,其中第 1外显... 详细信息

用高等植物钙调蛋白的保守序列设计两端引物 ,以红树植物海桑属无瓣海桑Sonneratiaapertala总DNA为模板 ,扩增出无瓣海桑钙调蛋白基因 ,并以之构建重组质粒pT ACaM .经测序分析比对 ,发现无瓣海桑钙调蛋白基因全长 1418bp ,其中第 1外显子 76bp ,第 2外显子 371bp ,中间为一 946bp的内含子所隔开 .编码 148氨基酸的蛋白质 ,其编码区序列与已知的其他高等植物的钙调蛋白基因核苷酸序列同源性高达 85 %以上 .而蛋白质序列同源性达95

关键词： Sonneratia apertala 序列分析钙调蛋白基因无瓣海桑同源性基因克隆红树植物