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异泽兰黄素对脑出血小鼠的神经保护作用及氧化应激和神经元凋亡的影响

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中国中医药科技 2024年第2期31卷 226-230,268页

作者：申友奎王雁秋刘飞飞徐良杭州市中医院浙江杭州310007 浙江大学附属第二医院浙江杭州310009

目的:探究异泽兰黄素对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)小鼠的神经保护作用及其机制。方法:采用自体血注射法复制小鼠ICH模型,同时设立假手术组。分别给予ICH小鼠1、3、10 mg/kg异泽兰黄素灌胃给药3 d。Longa评分法评估小鼠神经... 详细信息

目的:探究异泽兰黄素对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)小鼠的神经保护作用及其机制。方法:采用自体血注射法复制小鼠ICH模型,同时设立假手术组。分别给予ICH小鼠1、3、10 mg/kg异泽兰黄素灌胃给药3 d。Longa评分法评估小鼠神经缺损情况。称重小鼠脑组织,测定含水量,免疫荧光染色观察脑组织神经元改变及应激诱导蛋白Sestrin2(Sestrin2)表达,ELISA测定脑组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,Western blot测定脑组织B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、AMP依赖性蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、肝醣合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白表达。结果:异泽兰黄素干预后,ICH小鼠第1天、第3天神经缺损症状减轻(P<0.05或P<0.01),具有时间-剂量效应;此外,ICH小鼠脑部水肿程度降低(P<0.05或P<0.01),脑组织神经元细胞凋亡减少、尼氏小体数量增加(P<0.05或P<0.01),Sestrin2荧光表达下降(P<0.01),MDA水平降低(P<0.01),SOD、CAT活性提高(P<0.01),Bax、caspase-3蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01),Bcl-2、p-AMPK/AMPK、p-GSK-3β/-GSK-3β表达升高(P<0.05或P<0.01),具有剂量效应。结论:异泽兰黄素对ICH小鼠具有神经保护作用,抑制氧化应激和细胞凋亡是其部分作用机制。

关键词：异泽兰黄素神经元脑出血氧化应激 Sestrin2 AMPK/GSK-3β 凋亡小鼠

主题式教学模式在初中英语课外阅读教学中的应用

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智力 2022年第12期 154-156页

作者：王雁秋江苏省扬州市广陵区李典学校

初中英语课外阅读是初中英语学习中十分重要的内容，其重点和难点主要是陌生词汇多、学生不熟悉阅读内容等方面。主题式教学模式应用于初中英语课外阅读教学中可以通过围绕主题为学生创设新颖、灵活、有挑战性的学习情境，学生在情境中... 详细信息

初中英语课外阅读是初中英语学习中十分重要的内容，其重点和难点主要是陌生词汇多、学生不熟悉阅读内容等方面。主题式教学模式应用于初中英语课外阅读教学中可以通过围绕主题为学生创设新颖、灵活、有挑战性的学习情境，学生在情境中分析主题、了解主题，通过一个主题所表达的主要内容进行各种同主题阅读的学习，不断总结经验，找出自身课外阅读瓶颈所在，以求取得更好的学习效果。

关键词：主题式初中英语课外阅读

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减肥,不要陷“轻断食”误区

中医健康养生 2023年第6期9卷 40-42页

作者：王雁秋杭州市中医院

小张用“轻断食”的方法减肥了2个月,虽然体重下降了,但是月经却停了,而且面色萎黄,总是怕冷。那么,该如何科学进行“轻断食”减肥法呢?小张提到的“轻断食”,实际上是一种“间歇性禁食”,即限制时间的进食。

关键词：面色萎黄减肥间歇性

加味四妙勇安汤治疗甲亢性心脏病气阴两虚兼痰瘀互结证临床研究

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新中医 2023年第1期55卷 48-52页

作者：陈思思王雁秋杭州市中医院内分泌科浙江杭州310012

目的:观察加味四妙勇安汤治疗甲亢性心脏病气阴两虚兼痰瘀互结证的临床疗效。方法:采用随机数字表法将60例甲亢性心脏病患者分为对照组及研究组各30例。对照组采用常规西医治疗,研究组在对照组基础上加用加味四妙勇安汤治疗。比较2组治... 详细信息

目的:观察加味四妙勇安汤治疗甲亢性心脏病气阴两虚兼痰瘀互结证的临床疗效。方法:采用随机数字表法将60例甲亢性心脏病患者分为对照组及研究组各30例。对照组采用常规西医治疗,研究组在对照组基础上加用加味四妙勇安汤治疗。比较2组治疗前后甲状腺功能、心功能、血脂指标及中医证候积分,并评估2组临床疗效及不良反应发生情况。结果:研究组治疗总有效率明显高于对照组(P0.05)。结论:加味四妙勇安汤治疗甲亢性心脏病疗效显著,能够有效改善患者甲状腺及心功能,降低血脂水平,安全性较高。

关键词：甲亢性心脏病气阴两虚兼痰瘀互结证四妙勇安汤甲状腺功能心功能血脂

绞股蓝总皂苷对DN大鼠肾脏nephrin、VEGF表达的影响

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绞股蓝总皂苷对DN大鼠肾脏nephrin、VEGF表达的影响

作者：王雁秋浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的观察糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏nephrin、VEGF的表达,研究绞股蓝总皂苷对DN大鼠肾脏nephrin、VEGF表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷降低尿蛋白、保护肾脏的机理。方法60只清洁级雄性SD大鼠随机选取50只,采用单侧肾切除加STZ注射法改良复... 详细信息

目的观察糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏nephrin、VEGF的表达,研究绞股蓝总皂苷对DN大鼠肾脏nephrin、VEGF表达的影响,探讨绞股蓝总皂苷降低尿蛋白、保护肾脏的机理。方法60只清洁级雄性SD大鼠随机选取50只,采用单侧肾切除加STZ注射法改良复制DN模型。按血糖随机分为5组,每组10只：即绞股蓝总皂苷高剂量组（A组：1g/kg）、绞股蓝总皂苷中剂量组（B组：0.5g/kg）、绞股蓝总皂苷低剂量组（C组：0.25g/kg）、缬沙坦对照组（D组：8mg/kg）、模型对照组（E组：予等体积0.9%生理盐水灌胃）。其余10只作为正常对照组（F组：予等体积0.9%生理盐水灌胃）。药物干预4周后检测肾功能、24小时尿量、24h尿蛋白、肾脏肥大指数,电镜观察肾小球超微结构改变,RT-PCR和免疫组化分别检测nephrin、VEGF mRNA基因和蛋白的表达。结果1.与F组比较：各组大鼠足细胞足突融合甚至缺失,基底膜明显增厚;nephrinmRNA和蛋白表达水平明显减少（p＜0.01）,VEGF表达明显增加,颜色加深且数量增多（p＜0.01）;24h尿量、尿蛋白、血肌酐、尿素氮、肾脏肥大指数均明显升高,差异具有显著性（P＜0.05）;2.与E组比较,（1）各治疗组均有不同程度的改善,足突增宽或部分融合,基底膜增厚情况减轻;nephrin mRNA和蛋白表达水平明显上调（P＜0.01）, VEGF表达明显抑制（P＜0.05）,且A、D组效果明显优于C组（P＜0.01）,A、D组之间无差异（P＞0.05）。（2）A、D组能显著减少DN大鼠24h尿量、尿蛋白（P＜0.01）,降低血肌酐、尿素氮（P＜0.05）,减轻肾脏肥大情况（P＜0.05）,A、D组之间无差异（P＞0.05）。C组在上述指标上与E组无差异（P＞0.05）。3.24h尿蛋白与nephrin mRNA和蛋白的表达存在负相关（r=-0.685,P＜0.01;r’=-0.667,P’＜0.01）;24h尿蛋白与VEGF mRNA和蛋白的表达存在正相关（r=0.684, P＜0.01;r’=-0.621, P’＜0.01）;nephrin和VEGF mRNA和蛋白表达存在负相关（r=-0.852,P＜0.01;r’=-0.872,P’＜0.01）。结论***大鼠存在足细胞结构和功能的损伤,且足细胞损伤在尿蛋白发生发展中起重要作用;2.绞股蓝总皂苷可能通过上调足细胞相关分子nephrin（?）勺表达,抑制足细胞分泌的VEGF的过表达,减轻足细胞超微结构的改变,从而保护肾脏,降低尿蛋白;3.不同剂量的绞股蓝总皂苷存在差异,高剂量组作用明显优于低剂量组,且效果与缬沙坦类似。

关键词：糖尿病肾病足细胞绞股蓝总皂苷 nephrin VEGF

Nrf2抑制氧化应激所致髓核细胞凋亡和衰老的实验研究

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Nrf2抑制氧化应激所致髓核细胞凋亡和衰老的实验研究

作者：王雁秋中国人民解放军陆军军医大学

学位级别：硕士

目的:腰痛是一种年龄相关的退行性疾病,也是最常见的骨骼肌肉系统障碍。它常常导致劳动力的丧失,降低生活质量,带来巨大的社会和经济负担。目前认为椎间盘退变是腰痛的关键病因,其主要病理改变包括髓核细胞的过度凋亡和衰老、氧化应激... 详细信息

目的:腰痛是一种年龄相关的退行性疾病,也是最常见的骨骼肌肉系统障碍。它常常导致劳动力的丧失,降低生活质量,带来巨大的社会和经济负担。目前认为椎间盘退变是腰痛的关键病因,其主要病理改变包括髓核细胞的过度凋亡和衰老、氧化应激、基质降解等。但其中具体的病理机制尚未完全阐明,行之有效的治疗药物也很有限。Nrf2是细胞维持内环境稳定的关键转录因子,通过调节靶基因的表达使细胞可以针对应激刺激作出多方面的反应。近年来,由于Nrf2在氧化应激、炎症反应、细胞代谢等方面具有重要的调控功能,越来越多的研究关注它在疾病发生发展中的作用,包括肿瘤、慢性疾病等,并把Nrf2作为这些疾病预防和治疗的潜在靶点。然而,关于Nrf2与椎间盘退变的关系及其在髓核细胞凋亡和衰老中的作用却鲜有报道。之前的研究表明,金线莲苷具有明显的抗炎、抗凋亡的作用,但对Nrf2的调节以及氧化应激下髓核细胞凋亡、衰老的影响却不清楚。因此,本研究拟探讨Nrf2在人不同退变程度的椎间盘髓核组织中的表达变化及其意义,以及在氧化应激所致髓核细胞损伤中的作用,分析金线莲苷对Nrf2信号通路的影响,并进行相应的体外实验,最终为椎间盘退变的机制提供新的见解,也为疾病的预防和治疗提供新的靶点。方法:1.根据患者术前MRI和Pfirrmann分级标准,收集不同退变程度的髓核组织标本。使用免疫组织化学染色和Western blot检测髓核组织中Nrf2、C-caspase3和p16的表达水平,对所得数据进行统计学分析。2.以大鼠髓核细胞为研究对象,使用叔丁基过氧化氢(TBHP)处理髓核细胞,在体外构建氧化应激下凋亡和衰老的细胞模型。通过慢病毒转染,在髓核细胞内分别过表达或敲低Nrf2的表达水平,利用活性氧检测、流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和Western blot分析Nrf2在氧化应激所致髓核细胞凋亡和衰老中的作用。3.使用金线莲苷对髓核细胞进行预处理,通过CCK-8、流式细胞术、EdU染色、MitoSOX染色和Western blot评价氧化应激下金线莲苷对髓核细胞凋亡、衰老和线粒体稳态的影响。通过Western blot检测金线莲苷处理后的髓核细胞内Nrf2及其下游抗氧化蛋白的表达水平,同时检测上游AKT和MAPK信号通路的变化。此外,利用JC-1染色、TUNEL试验、β-半乳糖苷酶染色和Western blot在Nrf2敲低的髓核细胞内验证Nrf2与金线莲苷介导的细胞保护作用的关系。结果:1.随着椎间盘退变程度的加重,Nrf2的蛋白水平在人体髓核组织中逐渐降低,Nrf2免疫阳性的细胞也逐渐减少。相关性分析提示人髓核组织中Nrf2的表达水平与椎间盘退变程度呈负相关。并且,在退变的髓核组织中C-caspase3和p16的表达升高。2.在TBHP诱导的氧化应激下,髓核细胞内C-caspase3和p16蛋白水平的升高呈浓度依赖性和时间依赖性。而在氧化应激下,慢病毒介导的Nrf2缺失使髓核细胞内活性氧含量相比对照组细胞明显升高,同时凋亡细胞和β-半乳糖苷酶染色阳性细胞的数目明显增多,相应地C-caspase3和p16的蛋白水平也升高。相反,当过表达髓核细胞内的Nrf2时,上述改变则受到明显抑制。3.在髓核细胞接受金线莲苷预处理后,氧化应激诱导的细胞凋亡和衰老受到抑制,同时线粒体稳态也得到更好的维持。此外,金线莲苷可以激活Nrf2上游的AKT和ERK1/2通路,促进髓核细胞内Nrf2及其下游抗氧化蛋白SOD2和NQO1的表达。而金线莲苷对Nrf2信号的激活作用可以分别被AKT和ERK1/2通路的抑制剂所阻断。并且,敲低髓核细胞内Nrf2的表达可以抵消金线莲苷在氧化应激下的细胞保护作用。结论:本研究证明了在人椎间盘髓核组织中,Nrf2的表达水平随着退变程度的加重而降低,且两者之间存在负相关关系,提示Nrf2可能在椎间盘退变的发生发展中起着重要作用。作为细胞内关键的抗氧化转录因子,Nrf2可以降低细胞内的氧化应激水平,抑制氧化应激下髓核细胞的凋亡和衰老。值得注意的是,金线莲苷可以通过AKT、ERK1/2通路激活Nrf2,促进髓核细胞内抗氧化蛋白SOD2和NQO1的表达,在氧化应激下抑制髓核细胞凋亡和衰老。并且这种细胞保护作用与髓核细胞内Nrf2的激活密切相关。综上所述,本研究认为Nrf2可能参与了椎间盘退变,为椎间盘退变的发病机制提供了新的见解,也为未来以Nrf2为靶点的治疗策略提供了理论依据。

关键词： Nrf2 氧化应激椎间盘退变髓核细胞凋亡衰老金线莲苷

香茅醇假单胞菌SJTE-3碲抗性蛋白TerA影响细胞分裂的机制研究

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香茅醇假单胞菌SJTE-3碲抗性蛋白TerA影响细胞分裂的机制研究

作者：王雁秋上海交通大学

学位级别：硕士

亚碲酸盐是一类低浓度即可有效抑制微生物生长的化合物,碲抗性操纵子在多种高致病性病原微生物中均有分布。这些亚碲酸盐抗性基因不仅涉及亚碲酸盐抗性,还可能涉及细胞对多种环境刺激的响应过程。但是,目前对有关碲抗性基因可能影响的... 详细信息

亚碲酸盐是一类低浓度即可有效抑制微生物生长的化合物,碲抗性操纵子在多种高致病性病原微生物中均有分布。这些亚碲酸盐抗性基因不仅涉及亚碲酸盐抗性,还可能涉及细胞对多种环境刺激的响应过程。但是,目前对有关碲抗性基因可能影响的代谢途径与其作用机理仍知之甚少。本工作以香茅醇假单胞菌SJTE-3的碲抗性操纵子为研究对象,研究其对细菌的细胞分裂过程的影响与作用机制。我们发现过表达香茅醇假单胞菌SJTE-3的碲抗性操纵子,会导致香茅醇假单胞菌SJTE-3与大肠杆菌MG1655的细胞分裂异常,细胞伸长成丝线状。进一步,利用大肠杆菌MG1655为研究菌株,我们确定了该碲抗性操纵子中影响细胞分裂的关键基因为terA基因,明确了当terA基因的拷贝数或表达量达到一定量级时,才能引起可观察的细胞分裂异常。不同来源的terA基因具有类似的影响细胞分裂的作用。生物信息学分析显示,TerA蛋白作为TerD蛋白的同源物,可能与该碲抗性操纵子中的其它TerD同源物一起形成多亚基复合物,履行特定功能;但TerA蛋白仍具有自身特有的功能特性,如TerA蛋白对细胞分裂的影响。不同物种间的TerA蛋白的序列保守性很高;其中,结构域TerAD2证实为TerA蛋白影响细胞分裂的关键功能结构域,保守性极高。结构域TerAD2中存在高度保守的Ca结合位点,可能与TerA蛋白的功能密切相关。随后,对TerA蛋白影响细胞分裂的靶标基因的研究显示,包括slmA基因和sulA基因在内的七个细胞分裂相关基因的转录水平均会在terA基因过表达时显著上调;其中,slmA基因和sulA基因的过表达也会使细胞呈现类似的伸长与丝线状形态,且SlmA蛋白的胞内定位与TerA蛋白相似。TerA蛋白可通过影响SlmA蛋白,进而作用于细胞分裂蛋白FtsZ和与Z环定位相关的Min系统,引起Z环的异常定位或异常收缩,最终导致细胞的异常分裂。此外,terA基因的过表达可提升菌株对氧化胁迫的耐受性、有效降低细菌胞内的ROS水平、缓解关键碲抗性蛋白TerCD的细胞毒性,提高细胞在氧化胁迫环境下的存活率,并进一步提升菌株的亚碲酸盐抗性。由于TerA对细胞分裂的影响并不会导致细菌的死亡,只是使细胞分裂过程发生了暂时停滞;细胞分裂周期暂时停滞作为细菌的生存策略之一,往往发生在细胞对外界环境的应激状态下,是一种应对胁迫环境的适应性变化。因此,TerA对细胞分裂的影响是细菌应对外界环境刺激的一种适应性策略,这可能是亚碲酸盐抗性基因在病原菌中广泛存在并高度保守的原因之一。本工作有助于碲抗性操纵子的功能挖掘与机制解析,可为探究其在病原菌等微生物中的作用机理与生理意义奠定基础,也可为其合理利用提供思路。

关键词：碲抗性操纵子碲抗性蛋白TerA 细胞分裂 SlmA FtsZ

新阶段的新问题——关于当前畜牧产业发展的几点思考

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中国动物检疫 2007年第5期24卷 20-21页

作者：王雁秋山东省德州市畜牧局 253015

当前畜牧业发展已经进人一个新阶段。规模化、集约化比重增加，畜产品数量与质量并重，畜牧业与整个社会和谐发展，成为这一阶段畜牧业的主要特征。同时，应当看到．新阶段的畜牧业也面临着一些亟须注意并解决的新问题。

关键词：畜牧业发展产业发展产品数量和谐发展规模化集约化社会

绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的影响及机制

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中华中医药杂志 2012年第3期27卷 723-726页

作者：黄平王雁秋浙江省中医院杭州310006 杭州市红十字会医院杭州310003

目的:研究绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏足细胞相关分子(nephrin)、血管通透因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制。方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素(STZ)注射法改良复制DN模型,实验分为正常组、模型组... 详细信息

目的:研究绞股蓝总皂苷对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏足细胞相关分子(nephrin)、血管通透因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其降低尿蛋白、保护肾脏的机制。方法:采用单侧肾切除加链脲佐菌素(STZ)注射法改良复制DN模型,实验分为正常组、模型组、治疗组(绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组)和缬沙坦组。干预4周后电镜观察肾小球超微结构改变,RT-PCR检测nephrin、VEGF mRNA表达。结果:各治疗组病理变化较模型组均有不同程度改善:足突增宽或部分融合,基底膜增厚减轻,同时nephrin mRNA表达水平较模型组明显上调(P<0.01),VEGF表达明显抑制(P<0.01),其中高剂量组和缬沙坦组效果类似,明显优于低剂量组(P<0.01)。结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调足细胞相关分子nephrin表达,抑制分泌VEGF过表达,减轻足细胞超微结构改变,从而保护足细胞,降低尿蛋白,延缓肾小球硬化。

关键词：糖尿病肾病足细胞绞股蓝总皂苷肾脏足细胞相关分子分泌血管通透因子