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猪德尔塔冠状病毒S基因序列分析与全长cDNA克隆的构建

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猪德尔塔冠状病毒S基因序列分析与全长cDNA克隆的构建

作者：王连顺中国农业科学院

学位级别：硕士

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来出现的一种猪的新型肠道冠状病毒。2012年首次于中国香港被报道,2014年美国俄亥俄州暴发了PDCoV疫情,随后该病在中国、加拿大、日本、韩国、泰国、墨西哥等多个国家和地区相... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来出现的一种猪的新型肠道冠状病毒。2012年首次于中国香港被报道,2014年美国俄亥俄州暴发了PDCoV疫情,随后该病在中国、加拿大、日本、韩国、泰国、墨西哥等多个国家和地区相继被报道。PDCoV可感染不同日龄的猪,新生仔猪更为易感,其临床症状主要表现为腹泻、呕吐和脱水,严重时出现死亡,对于新生仔猪可造成30%-40%的致死率。但目前对于PDCoV的致病机制尚不十分清楚,并且缺乏有效的疫苗进行防控,给养猪业带来了巨大的经济损失。因此,尽快建立PDCoV反向遗传操作平台,对于后续深入研究病毒基因组的结构与功能、致病机制以及新型疫苗的研发等都十分必要。本研究中以实验室前期分离、保存的PDCoV流行毒株CH/XJYN/2016为亲本毒株,对不同代次的细胞毒S基因序列进行了测序及分析,明确了不同代次细胞毒S基因突变位点,为后续利用反向遗传技术研究PDCoV胰酶依赖性以及致病性减弱的分子机制提供了具体操作位点。进一步地,通过体外连接的构建策略,将全长基因组划分为5个片段,并将得到的5个目的片段通过T4连接酶进行体外连接,成功得到基因组全长cDNA克隆以及全长体外转录本。综上所述,本研究中成功获得了PDCoV CH/XJYN/2016毒株P10代细胞毒全长基因组序列以及不同代次细胞毒S基因序列信息,且进一步通过体外连接技术获得了PDCoV基因组全长cDNA克隆及体外转录本,为后续反向遗传学操作平台的建立及PDCoV致病机制的研究奠定了重要基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒 S基因分析 cDNA克隆

大泷六线鱼繁殖内分泌生理功能及GH基因部分序列的克隆

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大泷六线鱼繁殖内分泌生理功能及GH基因部分序列的克隆

作者：王连顺中国海洋大学

学位级别：硕士

大泷六线鱼属于鲉形目鱼类,在我国主要产自黄海和渤海沿岸。本论文以青岛近海水域性成熟的野生大泷六线鱼(Hexagrammos otakii Jordan and Starks )为研究对象,运用组织学、免疫组织化学和性激素放射免疫测定方法,对大泷六线鱼的性腺和... 详细信息

大泷六线鱼属于鲉形目鱼类,在我国主要产自黄海和渤海沿岸。本论文以青岛近海水域性成熟的野生大泷六线鱼(Hexagrammos otakii Jordan and Starks )为研究对象,运用组织学、免疫组织化学和性激素放射免疫测定方法,对大泷六线鱼的性腺和血浆性类固醇激素进行了深入的研究和分析,并采用分子生物学的方法对大泷六线鱼生长激素(GH)的部分序列进行了克隆研究。所得结果与结论如下: 1大泷六线鱼性腺发育的组织学观察大泷六线鱼精巢一对,非繁殖期的精巢为线条状或扁带形,淡黄色,繁殖期精巢则肥大呈睾丸状,白色至乳白色。组织学观察大泷六线鱼精巢为典型的小叶型结构,精小叶间有间质细胞(Leydigs cell),小叶内有支持细胞(Sertolis cell)及精小囊结构,其精巢的周年发育历程可分为:重复发育Ⅲ期,精子形成Ⅳ期,精子成熟Ⅴ期和退化吸收Ⅵ期。8月下旬生精活动启动,生殖季节为11月至翌年1月份,2～4月份为退化吸收期,5～7月份为重复发育Ⅲ期。大泷六线鱼卵巢和精巢一样,成对,非繁殖期的卵巢淡黄色或淡红色,繁殖期卵巢则饱满呈长囊状,青灰色。组织学观察,卵巢的周年发育分为5个时期:重复发育Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期和退化吸收Ⅵ期。卵细胞发育分为5个时相,Ⅱ时相卵母细胞胞质被苏木精染成深蓝色,Ⅲ时相卵母细胞卵黄开始积累;Ⅳ时相卵母细胞放射膜明显;Ⅳ时相后期核开始偏位,胚基出现;Ⅴ时相成熟卵细胞胞核消失,呈游离状态;Ⅵ期卵巢内卵黄颗粒融合成块状,并开始退化吸收。各个时期的卵细胞核仁数量,胞膜厚度及细胞体积变化很大。 2大泷六线鱼血浆性激素T和E2的季节变化研究按季节分四次采集野生大泷六线鱼血液,采用I标记的放射免疫测定方法检测雄鱼和雌鱼的睾酮(T)和雌二醇(E2)的水平。研究发现大泷六线鱼血浆性激素在年周期中的变化规律为:在繁殖期,即从11月份到来年的1月份,大泷六线鱼体内的雌二醇及睾酮含量增长迅速,呈显著性变化(P<0.05):雄鱼血浆睾酮含量均值为21.2625ng/dl,血浆雌二醇E含量均值为16.5908pg/ml;雌鱼血浆雌二醇E含量均值为13.36083pg/ml,血浆睾酮含量均值为39.381 ng/dl,均达到最高峰值。在非繁殖期即2～8月份血浆性激素水平下降迅速,呈显著性变化(P<0.05),其中雌性大泷六线鱼血浆中T含量在5～7月份已经检测不到。在繁殖前期即8～10月份性激素含量均开始缓慢增高。 3大泷六线鱼性腺免疫组织化学观察在卵巢发育的早期卵母细胞的胞质对雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)抗体显示强的免疫阳性反应,在III时相卵母细胞胞质对ER、AR抗体的免疫阳性明显减弱,在IV时相卵母细胞中胞质对ER、AR抗体呈现免疫阴性反应,核质对ER抗体呈现弱的免疫阳性反应、滤泡细胞对ER、AR抗体均呈现弱的阳性反应。在早期卵母细胞胞质、核质、核仁对芳香化酶抗体均成强阳性反应,进入大生长期免疫阳性明显减弱,在IV时相卵母细胞中,仅核质和滤泡膜呈弱的免疫阳性反应。在雄性,在精巢发育的各个时期,ER抗体主要定位在精巢的间质细胞和精小囊壁,呈强的免疫阳性反应。AR抗体仅定位在精巢的间质细胞处,但免疫阳性反应比ER抗体要弱。芳香化酶抗体在重复发育III期中呈强的免疫阳性反应,尤其是精原细胞、初级精母细胞的细胞核。随着精巢的发育,免疫阳性反应逐渐减弱,次级精母细胞仅胞核呈弱的阳性反应,其余精子细胞、精子均成阴性反应。这些研究结果为证明性类固醇激素和芳香化酶参与调节性腺发育成熟和生殖内分泌调控轴的功能提供了新的形态学依据。 4大泷六线鱼生长激素(GH)基因部分序列的克隆根据比较基因组学的原理,运用Oligo 6.0软件设计一对引物,在基因组DNA上成功克隆了长915bp的内含子片段。

关键词：大泷六线鱼性腺性类固醇激素周年变化

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催化反应气提工艺及设备

化工学报 1995年第1期46卷 43-49页

作者：袁继堂王连顺殷金柱金仕夷谈遒天津大学石油化工技术开发中心天津300072

采用将反应和分离结合为一体的反应气提上艺,开发了适于液固作均相反应的多段悬浮床反应气提塔,简述了塔的主要参数的计算方法,将该工艺和设备应用于苯酚丙酮制取双酚A的缩介反应。实验表明丙酮的转化率和双酚A选择性均达到95％以上,生... 详细信息

采用将反应和分离结合为一体的反应气提上艺,开发了适于液固作均相反应的多段悬浮床反应气提塔,简述了塔的主要参数的计算方法,将该工艺和设备应用于苯酚丙酮制取双酚A的缩介反应。实验表明丙酮的转化率和双酚A选择性均达到95％以上,生产双酚A的能力以每克催化剂计为0.767g/h。

关键词：悬浮床双酚A 汽提塔塔器催化反应汽提

济宁市县级公共卫生资源配置现状与检验能力评价研究

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济宁市县级公共卫生资源配置现状与检验能力评价研究

作者：王连顺山东大学

学位级别：硕士

为了解济宁市县级疾病预防控制机构卫生资源配置现状、设备装备水平以及检验能力,我们于2004年9月-12月对济宁市12个县级疾病预防控制机构进行了调研。资料来源:2003年《济宁市统计年鉴》、2003年《卫生防疫机构统计年鉴》、2003年《卫... 详细信息

为了解济宁市县级疾病预防控制机构卫生资源配置现状、设备装备水平以及检验能力,我们于2004年9月-12月对济宁市12个县级疾病预防控制机构进行了调研。资料来源:2003年《济宁市统计年鉴》、2003年《卫生防疫机构统计年鉴》、2003年《卫生监督统计报表》、2003年《济宁市疫情分析》、2003年《计划免疫统计报表》以及《现场调查问卷》。调查方法:采用问卷调查方法,对济宁市所辖12个县级市疾病预防控制机构进行一次全面调查,主要数据以03年底为准。济宁市县级市疾病预防控制机构现状采用描述性研究方法,对照山东省卫生厅《县级疾病控制机构工作考核标准（2003试行）》进行描述;检验能力评价分析是根据《疾病预防控制机构建设指导意见》中提出的专业设备装备标准和检验能力要求,制定调查问卷,由各单位有关人员对专业设备装备情况及目前使用情况和检验项目进行填写。分析指标:主要有构成比、设备实际拥有率（等于实际拥有设备种类数与应有设备种类数之比）和检验项目实际开展率（等于实际开展检验项目数与应开展检验项目数之比）。质量控制:根据卫生部制订的县级疾病预防控制机构设备装备标准和应具备的检验能力要求制订调查问卷,并讨论修改;对调查员进行培训,统一调查口径,统一填表方法;在资料收集过程中,由济宁市卫生防疫站派专人负责现场指导,本课题负责人员负责审查调查表,对有疑问的数据进行核实,对调查表进行统一整理,由专门人员录入,用Excel建立数据库,并进行逻辑校对和数据分析。研究结果:1)人员整体素质不高。本次调查结果显示,济宁市县级疾病预防控制机构公共卫生人力整体素质不高,问题主要是人员结构不合理,人员学历层次偏低,素质偏低,主要以中专和大专学历为主;一线专业技术人员相对不足,尤其检验人员不足,相对行政后勤人员过多,严重制约着公共卫生事业的发展。2)机构财

关键词：公共卫生资源配置设备装备检验能力

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夏甸镇农业可持续发展评价及对策研究

夏甸镇农业可持续发展评价及对策研究

作者：王连顺中国海洋大学

学位级别：硕士

全球环境的急剧恶化与人口的迅速膨胀,对全球资源造成严重威胁。实施可持续发展战略是实现可持续发展的必然选择。农业作为国民经济的基础产业,实施农业的可持续发展,对改善人民的基本生活、农民的经济收入、以及整个生态环境都有极大... 详细信息

全球环境的急剧恶化与人口的迅速膨胀,对全球资源造成严重威胁。实施可持续发展战略是实现可持续发展的必然选择。农业作为国民经济的基础产业,实施农业的可持续发展,对改善人民的基本生活、农民的经济收入、以及整个生态环境都有极大的促进作用。夏甸镇是招远市南部重镇,有丰富的矿’产资源,也是重要的食品和粮食加工生产基地,全镇的主要经济来源以果蔬加工、粮食生产为主,以矿产资源的二次开发与加工为辅。因此,实施农业的可持续发展,对于改善整个夏甸镇的农业生态环境,提高民众的经济收入与生存环境有重要意义。本文立足夏甸镇的实际状况,主要从五个方面对夏甸镇的农业可持续发展进行了论述。第一章闸述了农业可持续发展的意义,以及目前农业可特续发展的国内外研究动态,并介绍了本文的研究内容和研究方法：第二章对可持续发展理论概念作了相关介绍,可持续发展的目标是什么,需要坚持的基本原则：对所涉及的相关理论做了简单介绍,包括人口承载能力理论、生态经济学理论、农业人地系统理论、农业控制理论等;并对实施农业可持续发展的必要性作了论述;第三章利用数学模型对夏甸镇整体的农业生产发展状况进行了评价。以夏甸镇近十年的数据作为主要数据源,对夏甸镇的农业发展状况作出了分析,得出各个子系统内部存在的优势与不足;第四章主要是进一步对夏甸镇存在的问题做出深入分析,包括基础设施建设、劳动力的发展水平、农产品的生产加工流程等做出详细分析;第五章针对在农业可持续发展过程中存在的问题,提出了相关的措施建议。实现农业的可持续发展,带来的是经济、社会、环境的协调和高效发展。农业走可持续发展之路,不仅是夏甸镇发展的需要,也是整个国家农业发展的必然选择。

关键词：可持续评价夏甸镇生态农业

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氮杂冠醚与碱金属离子配位反应的研究

物理化学学报 1994年第6期10卷 560-564页

作者：马玉新卢祥生王连顺陈荣悌南开大学化学系天津300071 徐州师范学院化学系

The reactions between sodium iodide, potassium iodide and a series of N-(parasubstituted phenyl) nitrogen-hetero-15-crown-5 were studied by titration calorimetry at 25 ℃ in ethanol. It was found that the aza-crown ethers and the alkali metal ions form 1:1complexes. The electron-donating substituent on the phenyl ring may enhance the ligation ability of the macrocyclic ligand. It was found that linear thermodynamic function relationships exist in the systems studied.

关键词：氮杂冠醚碱金属离子配位反应

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硒和硒蛋白在海参养殖中的应用研究进展

动物营养学报 2024年第10期36卷 6181-6190页

作者：邱惠龙靳晓敏黄家强王连顺大连海洋大学水产与生命学院大连116023 河北科技师范学院海洋资源与环境学院秦皇岛066600 中国农业大学营养与健康系北京100083

海参是我国北方沿海地区最主要的水产养殖品种之一,因其含有多种独特的天然活性物质,具有一定的保健作用,深受消费者喜爱。随着海参养殖规模的不断扩大,相继出现了种质退化、氧化应激和生长性能不稳定等问题。为了解决这些问题,研究人... 详细信息

海参是我国北方沿海地区最主要的水产养殖品种之一,因其含有多种独特的天然活性物质,具有一定的保健作用,深受消费者喜爱。随着海参养殖规模的不断扩大,相继出现了种质退化、氧化应激和生长性能不稳定等问题。为了解决这些问题,研究人员一直致力于探寻一种绿色、健康和高效的饲料添加剂以促进海参的繁殖,提高免疫和生长性能。硒(Se)是生物体健康必不可少的微量元素,在机体以硒蛋白的形式通过酶促作用实现抗氧化和代谢调节等生理功能。本文综述了硒和硒蛋白的种类以及硒对海参的生理作用机制,介绍了不同硒源在改善海参生长性能、提高抗氧化能力和体壁营养方面的研究进展,提出了当前富硒海参养殖面临的挑战以及未来的研究重点,旨在为硒在海参养殖中的应用提供科学依据。

关键词：硒硒蛋白海参养殖作用机制

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超营养硒在现代农业提质增效中的研究进展

中国科学:生命科学 2024年

作者：刘传铭张国伟王连顺黄家强中国农业大学营养与健康系北京食品营养与人类健康高精尖创新中心和布克赛尔蒙古自治县宏达盐业有限责任公司大连海洋大学水产与生命学院

硒是生物体内一种重要的微量元素,具有抗氧化、免疫调节、拮抗重金属等多种作用.缺硒或硒过量都会抑制动植物的生长繁殖,导致严重的动植物疾病,造成农业经济的巨大损失.此外,硒从缺乏到中毒的剂量范围较窄,不合理的用硒很容易导致动植... 详细信息

硒是生物体内一种重要的微量元素,具有抗氧化、免疫调节、拮抗重金属等多种作用.缺硒或硒过量都会抑制动植物的生长繁殖,导致严重的动植物疾病,造成农业经济的巨大损失.此外,硒从缺乏到中毒的剂量范围较窄,不合理的用硒很容易导致动植物出现硒缺乏或硒中毒.基于此,对动植物进行超营养补硒有利于防止缺硒和硒过量问题的出现,同时在推动现代农业提质增效中展现出很大的应用潜力.本文主要综述超营养硒在畜禽养殖、水产养殖和作物种植中的研究报道,讨论超营养硒在实际应用中的关键控制点与潜在风险,为超营养硒在今后更广泛的应用提供思路和依据.

关键词：硒超营养畜禽养殖水产养殖作物种植

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液相甲醇氧化羰基法合成碳酸二甲酯

化工进展 1995年第3期14卷 32-36页

作者：袁继堂王连顺殷金柱谈道天津大学石化技术开发中心天津300072

液相甲醇氧化羰基法是近年开发和工业化的合成DMC新工艺，文中通过对该工艺所用催化剂的进展、基础气液平衡数据和工艺流程的考察，展现了其取代传统光气法合成DMC的前景,可参考该法在“九五”期间建立我国DMC产品的工业生产。

关键词：碳酸二甲酯甲醇氧化羰基法