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中华消化杂志 2002年第4期22卷 203-205页

作者：白杨张亚历王继德施里张兆山周殿元第一军医大学南方医院全军消化病研究所广州510515 北京军事医学科学院生物工程研究所

目的　构建高效表达幽门螺杆菌 (Hp)过氧化氢酶重组蛋白的候选菌株并测定其活性。方法　用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增过氧化氢酶基因 ,将其定向插入表达载体 pET 2 2b(+)中 ,并在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ,进一步利用贝尔斯西策尔... 详细信息

目的　构建高效表达幽门螺杆菌 (Hp)过氧化氢酶重组蛋白的候选菌株并测定其活性。方法　用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增过氧化氢酶基因 ,将其定向插入表达载体 pET 2 2b(+)中 ,并在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ,进一步利用贝尔斯西策尔斯法测定其活性。结果　DNA序列分析表明 ,所克隆的过氧化氢酶基因序列与基因库公布的一致。在 37°C诱导表达 3h后 ,过氧化氢酶重组蛋白表达量占菌体总蛋白的 2 4 .4 % ,并显示了良好的活性。结论　本研究获得了表达高活性Hp过氧化氢酶的克隆 ,为深入研究其相关功能奠定了良好基础。

关键词：幽门螺杆菌过氧化氢酶基因克隆活性评价高效表达幽门螺杆菌感染

在Crohn病组织检出副结核分枝杆菌DNA

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国际消化病杂志 1993年第1期 52-53页

作者：王继德

长期以来人们一直怀疑副结核分枝杆菌是人类Crohn病的病原菌,但由于该菌在体外培养生长缓慢,用常规方法又难以和鸟分枝杆菌相鉴别,故难以确定它在Crohn病发生中的确切作用。本文应用PCR技术在Crohn病组织中检测副结核分枝杆菌DNA。材料... 详细信息

长期以来人们一直怀疑副结核分枝杆菌是人类Crohn病的病原菌,但由于该菌在体外培养生长缓慢,用常规方法又难以和鸟分枝杆菌相鉴别,故难以确定它在Crohn病发生中的确切作用。本文应用PCR技术在Crohn病组织中检测副结核分枝杆菌DNA。材料和方法:Crohn病患者40例,溃疡性结肠炎23例,无炎症性肠病者40例作为对照。自手术切除标本取约2cm;全层肠组织,在-20℃环境中保存备用。苯酚氯仿混合提取法抽提组织DNA,作PCR扩增。两个引物扩增片段位于副结核杆菌特异DNA插入片段IS900的5′区域（第22～421nt）,长400bp。模板DNA（1％）用量5μl（相当于0.03 g原始组织,检测灵敏度相当于300个细菌/克组织）,用其他分枝杆菌、肠道菌及链霉菌属菌株检测PCR特异性。待测标本同时作PCR阴性对照（只含缓冲液）及阳性对照（模板用10fg副结核杆菌DNA）。结果:IS 900 PCR技术可扩增5fg副结核杆菌DNA,相当于1个靶细菌。各组病人阳性率如下:Crohn病组65％（26/40）,其中19例来自小肠,7例来

关键词：副结核杆菌副结核分枝杆菌分枝杆菌属 Crohn DNA

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葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎小鼠模型的建立

第一军医大学学报 2002年第7期22卷 608-610页

作者：王群英陈村龙王继德赖卓胜张亚历刘荣第一军医大学南方医院全军消化内科研究所广东广州510515 珠江医院麻醉科广东广州510282

目的　建立小鼠溃疡性结肠炎模型。方法　给小鼠自由饮用5％葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液7d后,改为蒸馏水自由饮用10d,如此进行4个循环,每天观察症状。在第1个循环和第4个循环后剖杀小鼠,取出整段结肠行实体显微镜观察及切片组织学研究。结... 详细信息

目的　建立小鼠溃疡性结肠炎模型。方法　给小鼠自由饮用5％葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液7d后,改为蒸馏水自由饮用10d,如此进行4个循环,每天观察症状。在第1个循环和第4个循环后剖杀小鼠,取出整段结肠行实体显微镜观察及切片组织学研究。结果　所观察的症状、实体显微镜像、组织学病理改变均与人类溃疡性结肠炎类似。结论　此模型制作方法简便,重复性良好,可应用于多种实验研究。

关键词：动物模型溃疡性结肠炎葡聚糖硫酸钠小鼠

内镜下记忆合金支架置入术治疗食管狭窄85例

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人民军医 2003年第4期46卷 213-214页

作者：黄文王继德第一军医大学南方医院

食管因各种疾患引起的良、恶性狭窄可严重影响进食.为改善病人的生活质量、延长生存期,1997年1月～2000年6月我们采用内镜下置入镍钛记忆合金网状食管支架治疗良、恶性食管狭窄85例,取得了良好疗效.

关键词：内镜记忆合金支架置入术治疗食管狭窄疗效

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内镜下微波治疗上消化道出血66例

人民军医 2003年第6期46卷 335-336页

作者：黄文王继德第一军医大学南方医院

上消化道出血是临床常见急症之一,常危及病人的生命.1999年7月～2000年12月,我们采用内镜下微波治疗上消化道出血66例,效果满意.

关键词：内镜微波治疗上消化道出血疗效并发症胃镜检查

幽门螺杆菌黏附素基因babA_2的克隆、序列测定及其生物信息学分析

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世界华人消化杂志 2003年第10期11卷 1470-1474页

作者：白杨黄文王继德张兆山周殿元张亚历中国人民解放军第一军医大学南方医院全军消化病研究所广东省广州市510515 军事医学科学院生物工程研究所北京市100071

目的:获取幽门螺杆菌黏附素基因babA_2,并将他克隆到质粒pET-22b(+)中进行核苷酸序列分析,并对其进行生物信息学分析,为研究Hp黏附素的分子机制和免疫原性提供基础方法:利用PCR技术扩增babA_2,并将其定向插入pET-22b(+)载体,通过DNA序... 详细信息

目的:获取幽门螺杆菌黏附素基因babA_2,并将他克隆到质粒pET-22b(+)中进行核苷酸序列分析,并对其进行生物信息学分析,为研究Hp黏附素的分子机制和免疫原性提供基础方法:利用PCR技术扩增babA_2,并将其定向插入pET-22b(+)载体,通过DNA序列分析仪进行核苷酸分析,生物信息学软件对其进行生物学特性分析。结果:DNA序列分析表明,所克隆的babA_2基因序列与GenBank公布的一致。ANTHEPROT V4.3c软件预测其蛋白质分子量约为78KD,并显示出了良好的抗原性和疏水性。结论:本研究获得了序列正确的babA_2基因,生物信息学分析表明其具有优良的免疫原性,为其重组表达及其相关研究奠定了良好的基础。

关键词：幽门螺杆菌黏附素 babA2基因基因克隆基因序列生物信息学分子机制 PCR技术

表达幽门螺杆菌粘附素BabA重组蛋白菌株的构建及其粘附活性评价

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第一军医大学学报 2003年第4期23卷 293-295,309页

作者：白杨唱韶红王继德陈烨张兆山张亚历第一军医大学南方医院全军消化病研究所广东广州510515 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)粘附素BabA重组蛋白的候选菌株并测定其粘附活性。方法用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增粘附素babA2基因,将其定向插入表达载体pET-22b(+)中,并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达,利用光镜计数法测定其粘附活性。结果DN... 详细信息

目的构建表达幽门螺杆菌(Hp)粘附素BabA重组蛋白的候选菌株并测定其粘附活性。方法用PCR方法从Hp染色体DNA上扩增粘附素babA2基因,将其定向插入表达载体pET-22b(+)中,并在BL21(DE3)大肠杆菌中表达,利用光镜计数法测定其粘附活性。结果DNA序列分析表明,所克隆的粘附素babA2基因序列与GeneBank公布的一致。在37 ℃诱导表达3 h后,粘附素BabA重组蛋白表达量占菌体总蛋白的34.8%,体外实验证实BabA参与了粘附过程。结论本研究获得了表达有生物活性的Hp粘附素BabA的克隆,为深入研究其相关功能奠定了良好基础。

关键词：幽门螺杆菌粘附素 BabA 聚合酶链反应基因克隆

幽门螺杆菌基因重组尿素酶亚单位免疫预防作用的实验研究

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中华医学杂志 2000年第11期80卷 811-815页

作者：施理王继德陈烨张振书张亚历张万岱周殿元第一军医大学南方医院全军消化病研究所广州510515

目的　评价幽门螺杆菌 (Hp)基因重组尿素酶A、B亚单位 (rUreA、rUreB)的免疫预防作用。方法　将BALB/C小鼠分为如下 7组 :阴性对照组 (10只 )、霍乱毒素B亚单位 (CTB)对照组 (10只 )、rUreA对照组 (10只 )、rUreB对照组 (10只 )、rUreA ... 详细信息

目的　评价幽门螺杆菌 (Hp)基因重组尿素酶A、B亚单位 (rUreA、rUreB)的免疫预防作用。方法　将BALB/C小鼠分为如下 7组 :阴性对照组 (10只 )、霍乱毒素B亚单位 (CTB)对照组 (10只 )、rUreA对照组 (10只 )、rUreB对照组 (10只 )、rUreA +CTB实验组 (30只 )、rUreB +CTB实验组 (30只 )、Hp超声粉碎物 +CTB实验组 (30只 ) ,胃内分别接种如下物质 :15 0ml磷酸盐缓冲液、5 μgCTB、5 0μgrUreA、5 0 μgrUreB、5 0 μgrUreA +CTB、5 μgrUreB +CTB、40 0 μgHp超声粉碎物 + 5 μgCTB ;2周后胃内接种Hp(10 7～ 10 8CPU/次 ) ;4周、8周、12周后处死小鼠 ,用胃组织切片Giemsa染色、显微镜下检查Hp的方法评价免疫预防作用 ;另外 ,rUreA +CTB毒副作用组 (10只 )、rUreB +CTB毒副作用组 (10只 )小鼠 ,只接种rUreA +CTB或rUreB +CTB ,而不感染Hp ,12周后处死 ,用胃组织切片HE染色、显微镜下观察炎症细胞浸润的方法评价毒副作用。结果　给小鼠胃内单独接种CTB或rUreA或rUreB ,可使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少。CTB能增强rUreA、rUreB免疫保护作用。接种rUreA +CTB较接种rUreB +CTB或Hp超声粉碎物 +CTB ,免疫保护作用产生的较晚。接种rUreA +CTB或rUreB +CTB或Hp超声粉碎物

关键词：幽门螺杆菌基因重组尿素酶亚单位免疫预防