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乙型肝炎病毒拉米夫定耐药毒株的全基因质粒构建及其在HepG2细胞中复制与表达

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南方医科大学学报 2007年第7期27卷 991-993页

作者：孙剑王程温淑娟王战会侯金林南方医科大学南方医院感染内科广东广州510515 南方医科大学南方医院检验科广东广州510515

目的探讨拉米夫定耐药变异对病毒复制及抗原表达的影响。方法通过定向点突变方法,成功的在模板质粒P3.8II基础上构建成功3种P基因变异株质粒,并转染HepG2细胞,与HBV野毒株相比,分析变异毒株复制表达活性的差别。结果经DNA测序证实,成功... 详细信息

目的探讨拉米夫定耐药变异对病毒复制及抗原表达的影响。方法通过定向点突变方法,成功的在模板质粒P3.8II基础上构建成功3种P基因变异株质粒,并转染HepG2细胞,与HBV野毒株相比,分析变异毒株复制表达活性的差别。结果经DNA测序证实,成功构建了rtG172E、rtG174C、rtG172E/rtG174C等3种变异株质粒,转染细胞系后发现上清均表达有HBsAg和HBeAg,证明转染质粒在细胞内成功表达并分泌HBsAg和HBeAg。通过检测细胞内复制产生的子代HBVDNA发现,rtG172E、rtG174C、rtG172E/rtG174C等3种变异株的复制活性均有明显减弱。结论新发现的3种P基因变异株会影响HBV复制活性,对药物敏感性的影响需进一步研究。

关键词：拉米夫定耐药质粒转染

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光学蛋白质芯片

自然杂志 2001年第5期23卷 286-289页

作者：靳刚王战会中国科学院力学研究所

本文介绍一种新型光学蛋白质芯片技术 .它通过表面格式化、表面改性和配基固定形成多元生物活性感应表面 ;借助蛋白质的特异结合性和高分辨率的生物光学显微成像技术达到识别和检测蛋白质的目的 .它是一种非标记的多元蛋白质定量分析方法 .

关键词：椭偏光学成像技术光学蛋白质芯片生物芯片技术定量分析生物活性探针生物分子芯片蛋白质检测

基因变异研究技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用

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解放军医学杂志 1996年第4期21卷 309-313页

作者：候金林王战会杨洁第一军医大学南方医院

基因变异研究技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用５１０５１５第一军医大学南方医院候金林，王战会，杨洁关键词基因，病毒；乙型肝炎；肝炎病毒中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异是当前国内外临床和流行病... 详细信息

基因变异研究技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用５１０５１５第一军医大学南方医院候金林，王战会，杨洁关键词基因，病毒；乙型肝炎；肝炎病毒中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异是当前国内外临床和流行病学工作者广泛关注的问题，与之有关的...

关键词：乙型肝炎病毒基因变异乙型肝炎

乙型肝炎病毒表面抗原突变体稳定表达细胞系的建立和抗原性鉴定

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中华实验和临床病毒学杂志 2004年第1期18卷 47-50页

作者：王战会齐义鹏林裕龙骆抗先侯金林武汉大学生命科学学院同和南方医院感染内科

目的　探讨乙型肝炎 (乙肝 )病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阴性HBV感染的分子机制。方法　在对 4 6例HBsAg阴性但血清HBVDNA阳性感染者的S基因序列进行分析的基础上 ,构建了 6株新的HBsAg变异株 (4株联合点突变株 ,2株插入变异株 )的EBO p... 详细信息

目的　探讨乙型肝炎 (乙肝 )病毒 (HBV)表面抗原 (HBsAg)阴性HBV感染的分子机制。方法　在对 4 6例HBsAg阴性但血清HBVDNA阳性感染者的S基因序列进行分析的基础上 ,构建了 6株新的HBsAg变异株 (4株联合点突变株 ,2株插入变异株 )的EBO plpp真核表达载体 ,并转染了COS7细胞 ,建立了这 6株HBsAg变异株的稳定表达细胞系。分别用酶联免疫法 (ELISA)和放射免疫法(RIA)对细胞表达的HBsAg抗原性进行检测。结果　除 1例插入变异株可检测到较弱的阳性外 ,其余5株均检测不到HBsAg的存在。结论　新发现的HBsAg联合点突变和氨基酸插入变异 ,均对HBsAg的抗原性有负面的影响 ,是造成HBsAg阴性HBV感染的直接原因。

关键词：乙型肝炎病毒表面抗原基因突变细胞系抗原性鉴定分子机制

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

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第一军医大学学报 2004年第8期24卷 925-927页

作者：姜耀东郑少斌王战会第一军医大学南方医院泌尿外科广东广州510515 第一军医大学南方医院感染内科实验室广东广州510515

目的评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR... 详细信息

目的评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。

关键词：聚合酶链反应肾细胞癌基因表达 MN/CAⅨ基因

利用自组装单分子层(SAM)研究细胞和表面的相互作用

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生物医学工程学杂志 2001年第2期18卷 276-279页

作者：应佩青王战会靳刚陶祖莱中国科学院力学研究所北京100080

研究细胞和表面相互作用具有重要意义 ,利用长链的烷硫醇在金表面或烷基硅烷在羟基化表面形成的自组装单分子层及其微格式化的表面允许以分子水平研究并控制细胞和表面的相互作用。

关键词：细胞-表面相互作用自组装单分子层表面微制作 SAM

三种乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法及其应用

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中华实验和临床病毒学杂志 2003年第1期17卷 18-20页

作者：孙剑侯金林肖蕾王战会章廉骆抗先第一军医大学南方医院感染内科广州510515 黑龙江省人民医院

目的　建立三种乙型肝炎 (乙肝 )病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法 ,了解这三种耐药突变在拉米夫定治疗患者中的发生情况。方法　设计 3对HBVP基因引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增 ,应用NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶... 详细信息

目的　建立三种乙型肝炎 (乙肝 )病毒拉米夫定耐药突变的酶切分析方法 ,了解这三种耐药突变在拉米夫定治疗患者中的发生情况。方法　设计 3对HBVP基因引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增 ,应用NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切 ,酶切产物用电泳加以分析。应用此方法检测 70例拉米夫定治疗的慢性乙肝患者中 3种拉米夫定耐药突变的发生情况。结果　NdeⅠ和NlaⅢ两种限制性内切酶对PCR产物进行酶切可有效区分HBV野株和YMDD(酪氨酸蛋氨酸天冬氨酸天冬氨酸 )变异株 ,并确定是YI(异亮氨酸 )DD或YV(缬氨酸 )DD变异。用NlaⅢ内切酶对PCR扩增产物酶切可有效区分HBV野株和L5 2 6M(第 5 2 6位氨基酸由亮氨酸变为蛋氨酸 )变异株。利用此方法发现 11例患者在服用拉米夫定过程中出现耐药突变 ,其中YIDD变异 6例 ,YVDD变异 5例 ,后者有 1例伴有L5 2 6M点突变。结论　本方法只需应用常规PCR和酶切技术 ,既可有效筛检出YMDD变异株标本 ,还可以确定属于YIDD还是YVDD变异 ,或是否伴有L5 2 6M点突变等 ,均可作为临床监测拉米夫定耐药性的参考。

关键词：乙型肝炎病毒拉米夫定微生物敏感性试验

应用椭偏光学显微成像对IL-6与其受体的相互应用的初步观察

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生物工程学报 2002年第1期18卷 99-101页

作者：王战会靳刚中国科学院力学研究所北京100080

Imaging Ellipsometry is one of recently developed optical surface-sensitive methods for the investigation of various aspects of biomolecules adsorption on solid surfaces and biomolecules interactions. It has advantages of high sensitivity to layer-thickness, big area of view, high sampling speed, and high lateral resolution. Compared with other solid phase methods such as enzyme linked immunosorbent assay, immunofluorescence and radioimmunoassay, imaging ellipsometry has the advantage of not involving any labelling of reactants and it is a relatively inexpensive method and easy to handle. In this report, the mono-layers of IL-6 and IL-6 receptor were visualized as well as their interaction.

关键词：椭偏光学显微成像 IL-6 受体相互作用

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

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第一军医大学学报 2004年第1期24卷 99-101页

作者：姜耀东郑少斌王战会第一军医大学南方医院泌尿外科广东广州510515 第一军医大学南方医院感染内科实验室广东广州510515

目的评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾... 详细信息

目的评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。

关键词： RT-PCR法检测肾癌 MN/CAⅨ 基因表达聚合酶链反应碳酸酐酶Ⅸ