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基于一体化系统的呼吸道合胞病毒分型即时检验检测技术的建立及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第8期44卷 660-664页

作者：邓斐朱立国许可祁贤余慧燕王慎骄鲍倡俊江苏省疾病预防控制中心急性传染病防制所南京210009

目的研发一款一体化呼吸道合胞病毒(RSV)分型即时检验(point-of-care testing,POCT)检测试剂并评估其性能。方法以RSV A和B亚型及ON1和BA9基因型的基因组保守序列设计特异性的引物和探针,优化PCR反应体系和条件,整合试剂玻璃化技术和多... 详细信息

目的研发一款一体化呼吸道合胞病毒(RSV)分型即时检验(point-of-care testing,POCT)检测试剂并评估其性能。方法以RSV A和B亚型及ON1和BA9基因型的基因组保守序列设计特异性的引物和探针,优化PCR反应体系和条件,整合试剂玻璃化技术和多重检测平台,开发RSV分型POCT检测试剂,并对该产品的敏感度、特异度、重复性和临床性能进行评估。结果一体化RSV分型POCT检测试剂敏感度可达500拷贝/ml,特异度好,与临床上表现相似的病原体无交叉反应,试剂批间和批内重复性Ct值的变异系数均<5%,具有较好的重复性,检测试剂应用于53例临床样本测试,检测结果与对比试剂具有较高的一致性和符合率,阳性符合率高达98.11%。结论本研究开发的一体化RSV分型POCT检测试剂集成了"核酸提取-纯化-检测",实现了"样本进,结果出",操作简单,检测结果准确、可靠、稳定,可用于RSV A和B亚型的分型即时检验,为RSV的防控和诊疗提供助力。

关键词：呼吸道合胞病毒分型 POCT检测试剂一体化

2022-2023年江苏省H3N2流感病毒分子特征及耐药性分析

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中国人兽共患病学报 2024年第9期40卷 848-854页

作者：邓斐王慎骄余慧燕祁贤朱立国戴启刚江苏省疾病预防控制中心

目的根据2022-2023年江苏省监测年度流感病毒实验室检测结果，对H3N2流感病毒的基因特征和耐药性进行深度分析，评估疫苗和药物的有效性。方法对全省流感网络实验室分离的29株H3N2分离株进行全基因组扩增与测序，构建HA和NA基因进化... 详细信息

目的根据2022-2023年江苏省监测年度流感病毒实验室检测结果，对H3N2流感病毒的基因特征和耐药性进行深度分析，评估疫苗和药物的有效性。方法对全省流感网络实验室分离的29株H3N2分离株进行全基因组扩增与测序，构建HA和NA基因进化树。分析抗原表位、糖基化位点以及耐药位点的突变特性，并采用荧光发光法对流感病毒神经氨酸酶进行检测。结果江苏省29株H3N2分离株的同源性较高，与国内参考株和2021-2022年度疫苗株位于同一进化分支，与国外参考株和2022-2023年度疫苗株则处于不同进化分支。与2021-2022年度疫苗株A/Cambodia/e0826360/2020相比，江苏省2022-2023年度分离的H3N2流感病毒HA蛋白发生了4个氨基酸位点的替换，NA蛋白发生了2个氨基酸位点的替换，糖基化位点、受体结合位点以及氨基酸残基保守区域未发生改变。IC50结果表明，29株H3N2分离株对奥司他韦和扎那米韦两种抗病毒药物均未产生耐药。结论江苏省2022-2023年监测年度的流感病毒主要为甲型H3N2流感病毒。通过对流感病毒的HA和NA基因变异位点以及耐药性监测，及时了解病毒基因的变异情况，为选择有效的疫苗株提供科学依据，从而有助于预防和控制流感病毒的暴发和流行。

关键词： H3N2流感病毒疫苗药物基因特征进化分析

华东地区首例人感染2.3.4.4b分支H5N1禽流感病毒毒株分子特征分析

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江苏预防医学 2024年第4期35卷 408-411页

作者：邓斐祁贤余慧燕王慎骄许可黄昊頔鲍倡俊江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009

目的分析华东地区首例感染人的2.***.4.4b H5N1禽流感病毒分子进化基因特性。方法通过实时RT-PCR、病毒培养和序列分析,对患者痰标本和支气管肺泡灌洗液进行病毒培养和鉴定。利用Mega 6.1等软件构建系统发育树以探索病毒的进化和起源。结... 详细信息

目的分析华东地区首例感染人的2.***.4.4b H5N1禽流感病毒分子进化基因特性。方法通过实时RT-PCR、病毒培养和序列分析,对患者痰标本和支气管肺泡灌洗液进行病毒培养和鉴定。利用Mega 6.1等软件构建系统发育树以探索病毒的进化和起源。结果从1例患严重呼吸道症状患者的支气管肺泡灌洗液标本中分离到1株甲型流感病毒,属于甲型H5N1禽流感2.***.4.4b分支。对该毒株进行了全基因组测序分析,8个基因组片段与2021年以来在欧亚大陆特别是中国南方流行的H5N1分离株具有极高的核苷酸序列相似性(99.1%~99.7%)。该病毒HA蛋白的226~228位氨基酸未发生突变,保留了禽类受体α2-3半乳糖苷唾液酸(SAα2-3Gal)结合特性,为高致病性禽流感H5N1病毒;其NA和M2蛋白中未发现与抗病毒药物(包括奥司他韦、扎那米韦和金刚烷)耐药性相关的突变;JS210的PB2蛋白的E627K和D701N位点以及NS1蛋白的D92E位点均未发生突变,表明该毒株对人体的适应力有限。结论分支2.***.4.4b H5N1禽流感病毒可以溢出族群感染人类并引起严重的疾病,应持续加强对禽流感病毒的监测。

关键词：禽流感病毒 H5N1亚型 2.3.4.4b分支人感染禽流感

新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS免疫印迹试验条带与CD~+_4T淋巴细胞检测结果分析

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江苏卫生保健 2024年第4期26卷 329-330,333页

作者：关晓霞赵洁赛力克·努尔江王菊萍王世云李永俊阿力亚·阿西木江艾尔法尼·阿不力克木娜依拉·艾合买提玛吾兰·阿不都哈帕尔金鹏王慎骄胡海洋伊犁哈萨克自治州疾病预防控制中心新疆伊宁835000 江苏省疾病预防控制中心

目的分析新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS免疫印迹试验(WB)条带与CD~+_4T淋巴细胞计数(CD4细胞数)的关系,了解不同疾病进程的WB条带特征。方法收集新疆伊犁州2018—2022年767例新确证的HIV/AIDS基本信息、WB条带情况和确证阳性3个月内首次CD... 详细信息

目的分析新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS免疫印迹试验(WB)条带与CD~+_4T淋巴细胞计数(CD4细胞数)的关系,了解不同疾病进程的WB条带特征。方法收集新疆伊犁州2018—2022年767例新确证的HIV/AIDS基本信息、WB条带情况和确证阳性3个月内首次CD4细胞数检测结果,并根据CD4细胞数将病例分为<200、200~499、≥500个/μL 3个组,分析组间条带差异。结果 767例新诊断HIV/AIDS的WB条带中,gp160、gp120、gp41检出率分别为100%、99.48%、86.96%;p66、p51、p31检出率分别为98.83%、97.52%、92.70%;p24和p17检出率分别为99.61%和91.13%,p55和p39检出率分别为4.56%和6.39%;p24和p17条带在CD4细胞数<200个/μL组的检出率低于200~499个/μL组和≥500个/μL组(P﹤0.05);8条带型最多,占72.36%,随着CD4细胞数的上升,7条及以下带型占比呈下降趋势(χ~2_(趋势)=4.28,P=0.04),也表示随着CD4细胞数的下降,条带数量减少。结论人体感染HIV后,随着疾病进展,WB条带会出现一定程序的缺失。综合分析WB条带特征和CD4细胞水平,可准确评估患者疾病进程。

关键词： HIV/AIDS 免疫印迹试验 CD_4+T淋巴细胞 WB条带

2018-2022年新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS晚发现情况及影响因素分析

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现代医学 2024年第7期52卷 1003-1008页

作者：王菊萍胡海洋李永俊金鹏阿力亚·阿西木江艾尔法尼·阿不力克木娜依拉·艾合买提玛吾兰·阿不都哈帕尔关晓霞赵洁赛力克·努尔江王慎骄伊犁哈萨克自治州疾病预防控制中心性病与艾滋病防制科新疆伊宁835000 江苏省疾病预防控制中心性病与艾滋病防制所江苏南京210000 江苏省疾病预防控制中心急性传染病防制所江苏南京210000

目的:分析新疆伊犁州新诊断人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS)晚发现情况及其可能的影响因素。方法:国家艾滋病综合防治信息系统下载2018—2022年伊犁州新诊断HIV/AIDS个案信息,晚发现定义为CD4细胞数<350个·μL^(-1)... 详细信息

目的:分析新疆伊犁州新诊断人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者/艾滋病患者(HIV/AIDS)晚发现情况及其可能的影响因素。方法:国家艾滋病综合防治信息系统下载2018—2022年伊犁州新诊断HIV/AIDS个案信息,晚发现定义为CD4细胞数<350个·μL^(-1)或者有至少1种AIDS指征性疾病。多因素Logistic回归模型分析晚发现的影响因素。结果:1567例HIV/AIDS纳入研究,727例被判定为晚发现,总的晚发现率为46.4%(95%CI 43.9%~48.9%),2018—2022年晚发现率无显著的上升及下降趋势(P=0.483)。相比于15~24岁年龄组、职业为农民及牧民、检测发现途径为全民体检的HIV/AIDS,40岁及以上年龄组(OR=2.333),职业为家政、家务及待业(OR=1.361),检测发现途径为医院就诊(OR=1.386)的HIV/AIDS更可能发生晚发现(P<0.05)。结论:2018—2022年新疆伊犁州新诊断HIV/AIDS HIV晚发现比例相对稳定;年龄较大、无业、通过医院就诊发现与HIV晚发现有关;应实施有针对性的措施,以减少HIV晚发现。

关键词：人类免疫缺陷病毒艾滋病晚发现影响因素

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1株H5N6亚型禽流感病毒分子特征分析

中华实验和临床病毒学杂志 2016年第4期30卷 361-364页

作者：余慧燕邓斐王慎骄霍翔戴启刚祁贤江苏省疾病预防控制中心急性传染病防治所南京210009

目的对从某活禽市场环境中分离出的1株H5N6亚型禽流感病毒（A/environment/Zhenjiang/C13/2013,en/c13）进行全基因组序列测定,以揭示其基因起源和分子遗传特征.方法采用二代测序技术对该分离株进行全基因组测序,MEGA6.0软件进行序列... 详细信息

目的对从某活禽市场环境中分离出的1株H5N6亚型禽流感病毒（A/environment/Zhenjiang/C13/2013,en/c13）进行全基因组序列测定,以揭示其基因起源和分子遗传特征.方法采用二代测序技术对该分离株进行全基因组测序,MEGA6.0软件进行序列比对和构建系统发生树.结果分离株NA基因与近年来中国禽类中流行的H6N6亚型禽流感的NA基因处于同一进化分支,其他7个基因（PB2、PB1、PA、HA、NP、M和NS）都与近年来东亚地区流行的H5N1亚型禽流感的相应基因处于同一进化分支,分离株en/c13的HA蛋白裂解位点为PLREKRRKR ↓ GLF,是高致病性禽流感病毒的典型分子特征序列.HA蛋白上关键受体结合位点226和228位（按照H3亚型的HA蛋白序列排序）氨基酸分别是Gln和Gly,是典型的禽流感病毒受体结合特征.结论奉研究从环境中分离到一株新的基因重配禽流感病毒,其中NA基因来源于H6N6禽流感病毒,而其他7个基因则来源于H5N1禽流感病毒.结果提示我国禽流感病毒基因重配频繁,进化活跃,需要加强对禽流感病毒的持续监测.

关键词：禽流感病毒 H5N6亚型基因重配

1968-2014年中国甲型H3N2流感病毒PB1基因进化分析

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微生物学通报 2016年第3期43卷 593-600页

作者：郭艳颜文娟邓斐余慧燕王慎骄汤奋扬祁贤卫平民东南大学公共卫生学院江苏南京210009 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009

【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968-2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012-2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB... 详细信息

【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968-2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012-2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB1-F2基因进行分子进化分析。【结果】1968-2014年中国H3N2流感毒株PB1核苷酸和氨基酸相似性分别为90.91%-100%和96.91%-100%。系统进化树分析,1968-2014年共173株H3N2流感病毒总体上分为4个分支,2002-2014年分离毒株位于第IV分支上,1968-1994年分离毒株位于第II和III分支;猪源H3N2亚型分布于第I、II、IV分支上;分子特征显示PB1氨基酸52、113、179、216、576、586、619、621、709位在2002年以后发生适应性改变,替换了原来的氨基酸;PB1-F2基因编码截断型蛋白长度有52、34、25、24、11 aa(猪源),PB1-F2蛋白毒力关键位点上未出现高致病性特征突变。【结论】自1968年起H3N2亚型PB1基因变异逐步趋于稳定,且PB1-F2截断型毒株正逐渐成为一类新的进化特征,但PB1基因与其他亚型之间发生重配以及关键毒力位点的变异仍应是监测的重点。

关键词： H3N2流感病 PB1基因 PB1-F2蛋白进化分析

浊点萃取-高效液相色谱法同时测定水中多种二苯醚类除草剂残留

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四川大学学报（医学版） 2010年第1期41卷 148-152页

作者：何成艳黎源倩王慎骄欧阳华学郑波四川大学华西公共卫生学院卫生检验学教研室成都610041

目的建立同时测定水中多种二苯醚类除草剂残留的浊点萃取-高效液相色谱分析方法。方法水样中8种二苯醚类除草剂(苯达松、氟磺胺草醚、三氟羧草醚、苯草醚、甲羧除草醚、乙羧氟草醚、除草醚、乙氧氟草醚)的残留经Triton X-114萃取,采用... 详细信息

目的建立同时测定水中多种二苯醚类除草剂残留的浊点萃取-高效液相色谱分析方法。方法水样中8种二苯醚类除草剂(苯达松、氟磺胺草醚、三氟羧草醚、苯草醚、甲羧除草醚、乙羧氟草醚、除草醚、乙氧氟草醚)的残留经Triton X-114萃取,采用高效液相色谱法,用C18色谱柱分离,以甲醇-三乙胺-盐酸溶液作流动相,梯度洗脱,在波长为300 nm处测定。采用Triton X-114进行浊点萃取,分别优化了影响萃取效率的表面活性剂浓度、水样pH值、盐浓度、平衡温度及时间等条件,并对待测物检测波长、流动相梯度洗脱、流动相pH值、流速和柱温等色谱条件进行了优化。结果在优化的条件下,待测除草剂的质量浓度在0.05～2.00 mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991～0.9998),水样的平均加标回收率,除苯达松较低以外,均在80.1%～100.9%之间,相对标准偏差(RSD)为2.70%～6.40%;对于50.0 mL水样,本方法的检出限为0.10～0.50μg/L。结论本法简便、快速、准确、灵敏度高,能满足环境水样中多种二苯醚类除草剂残留分析要求。

关键词：浊点萃取高效液相色谱法二苯醚类除草剂农药残留分析水样

2016～2017年江苏省人感染H7N9禽流感病毒HA和NA基因分子进化分析

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病毒学报 2017年第5期33卷 685-690页

作者：余慧燕许可邓斐王慎骄霍翔黄昊頔祁贤江苏省疾病预防控制中心急性传染病防治所南京210009

本研究对2016~2017年江苏省23株人感染H7N9禽流感病毒的HA基因和NA基因分子进化特征进行分析,为更好的预防和治疗人感染H7N9禽流感病例提供科学依据。通过RT-PCR方法扩增23株病毒的HA和NA基因,采用Sanger测序法进行测序,序列分析采用Meg... 详细信息

本研究对2016~2017年江苏省23株人感染H7N9禽流感病毒的HA基因和NA基因分子进化特征进行分析,为更好的预防和治疗人感染H7N9禽流感病例提供科学依据。通过RT-PCR方法扩增23株病毒的HA和NA基因,采用Sanger测序法进行测序,序列分析采用Mega6.0等软件。结果显示:23株H7N9病毒的HA和NA基因与WHO最新推荐的候选疫苗株A/Hunan/2650/2016同源性较高(HA基因核苷酸与推导氨基酸序列同源性分别为99.1%~99.4%,99.5%~100%;NA基因核苷酸与推导氨基酸序列同源性分别为97.7%~98.0%,98.2%~98.5%)。23株病毒HA蛋白裂解位点序列均为PEIPKGR/GL,未出现多个碱性氨基酸,属于低致病性禽流感病毒分子特征。HA蛋白受体结合位点出现了G186V、Q226L、A134V氨基酸位点的变化,保留双受体结合特性。其中一株病毒A/Suzhou/88/2016的NA蛋白发生H276Y变异,表明对神经氨酸酶抑制剂产生抗性。2016~2017年江苏省禽流感H7N9病毒株HA基因和NA基因处于不断的点突变当中,提示我们需要加强对江苏省H7N9禽流感病毒进行持续的病原学监测。

关键词： H7N9禽流感病毒 RT-PCR HA基因 NA基因序列分析