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定坤丹通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织Smad 2治疗多囊卵巢综合征模型大鼠的机制研究

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中国实用妇科与产科杂志 2024年第8期40卷 849-854页

作者：陈兰杨波罗立波颜晓静王地均蔡佳丽尹春燕常州市中医医院江苏常州213003 广誉远中药股份有限公司山西太原030000

目的通过观察定坤丹对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠卵巢组织形态学、血清性激素水平、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad 2、Smad 3和microRNA-30d-5p表达的影响,进而探讨其通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织中Smad2治疗PCOS模型大鼠的作用机制。方法应用高、中、低剂量定坤丹[4.5、2.25、1.125 g/(kg·d)]干预脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)诱导的PCOS大鼠模型,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)染色、免疫组化、实时聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot等方法检测各组大鼠卵巢组织形态学、血清性激素水平、microRNA-30d-5p的表达及TGF-β1、Smad 2、Smad 3 m RNA及蛋白的表达。结果与模型大鼠组相比较,定坤丹高、中、低剂量组卵巢分布有各级卵泡,可见较多黄体;雌二醇(estradiol,E_(2))、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及睾酮(testosterone,T)均下降,卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)则升高,且差异均具有统计学意义;microRNA-30d-5p的表达升高,且差异均具有统计学意义;TGF-β1、Smad 2及Smad 3的mRNA及蛋白表达均下降,且差异均具有统计学意义。结论DHEA诱导的PCOS大鼠模型是研究PCOS排卵障碍较为理想的动物模型。定坤丹对PCOS大鼠有一定治疗作用,其机制可能是通过microRNA-30d-5p靶向调控卵巢组织中Smad 2的表达水平来实现。

关键词：多囊卵巢综合征定坤丹转化生长因子β1 Smad 2 Smad 3 microRNA-30d-5p

基于网络药理学及实验验证探讨枳实栀子豉汤抗抑郁症的作用机制

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中国医药导报 2024年第21期21卷 18-26页

作者：赵权张卫东张晶蒋婷颜晓静王地均周政华丰南京中医药大学附属常州市中医医院药学部江苏常州213003 南京中医药大学常州附属医院孟河医学研究所江苏常州213003

目的通过网络药理学预测枳实栀子豉汤抗抑郁的作用靶点及信号通路,并进行实验验证。方法采用中药系统网络药理学数据库与分析平台筛选枳实栀子豉汤的活性成分并预测其作用靶点,通过OMIM、GeneCards检索抑郁症的潜在疾病靶点,选取成分与... 详细信息

目的通过网络药理学预测枳实栀子豉汤抗抑郁的作用靶点及信号通路,并进行实验验证。方法采用中药系统网络药理学数据库与分析平台筛选枳实栀子豉汤的活性成分并预测其作用靶点,通过OMIM、GeneCards检索抑郁症的潜在疾病靶点,选取成分与疾病的交集靶点作为蛋白靶点库,采用STRING获取交集靶点蛋白相互作用的网络,通过Cytoscape软件对数据进行可视化分析,构建活性成分-预测靶点-信号通路网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用分析枳实栀子豉汤的关键靶点并进行动物实验。同时,采用DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,综合评价枳实栀子豉汤抗抑郁的作用机制。30只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常组6只,造模组24只。除正常组外,实验大鼠均接受慢性温和不可预知应激造模,确认造模成功后,将造模组按随机数字表法分为四组,高剂量组(13.32 g/kg枳实栀子豉汤)、中剂量组(6.66 g/kg枳实栀子豉汤)、低剂量组(3.33 g/kg枳实栀子豉汤)、模型组,每组6只,对其进行动物行为学和蛋白质印迹法实验。结果筛选出38个枳实栀子豉汤的有效活性成分,预测出枳实栀子豉汤治疗抑郁症的潜在靶点52个,关键靶点筛选出ERK、CREB、BDNF作为验证通路。GO和KEGG分析结果显示,枳实栀子豉汤治疗抑郁症涉及FoxO信号通路、MAPK信号通路、催乳素信号通路、雌激素信号通路、ErbB信号通路、GnRH信号通路、鞘脂信号通路等多个信号通路。实验动物行为学实验结果显示,与正常组比较,模型组糖水偏好率下降,游泳不动时间上升,旷场实验的水平得分和垂直得分均降低(P<0.01)。与模型组比较,低、中剂量组糖水偏好率上升(P<0.05);与模型组比较,中、高剂量组游泳不动时间减少(P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量组垂直得分升高(P<0.05);与模型组比较,低、中剂量组水平得分升高(P<0.01)。蛋白免疫印迹法结果显示,与正常组比较,模型组大鼠海马p-ERK1/2、p-CREB和BDNF蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,低、中、高剂量组p-CREB蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,低、中剂量组BDNF蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论枳实栀子豉汤可以改善大鼠抑郁行为,具有治疗抑郁症的作用。其发挥抗抑郁作用的机制与ERK、CREB、BDNF有关。

关键词：枳实栀子豉汤抑郁症网络药理学作用机制

G蛋白偶联受体MrgprD研究进展及对中医药研究的启示

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南京中医药大学学报 2020年第3期36卷 419-423页

作者：王地均金香唐宗湘王长明南京中医药大学医学院·整合医学院江苏南京210023

中医药在止痒、镇痛方面具有副作用小、疗效明确的优势,但是其作用的分子生物学机制并不清楚。MrgprD(Mas-related gene D)是G蛋白偶联受体Mrg(Mas-related genes)家族的一个成员,特异表达于外周初级感觉神经元上。综述了MrgprD近20年... 详细信息

中医药在止痒、镇痛方面具有副作用小、疗效明确的优势,但是其作用的分子生物学机制并不清楚。MrgprD(Mas-related gene D)是G蛋白偶联受体Mrg(Mas-related genes)家族的一个成员,特异表达于外周初级感觉神经元上。综述了MrgprD近20年的研究现状,为认识MrgprD的新功能并为相关疾病治疗提供参考。鉴于MrgprD在痛觉和痒觉产生中的作用,可能成为中医药镇痛、止痒的作用靶点,为中医药的研究提供思考。

关键词： MrgprD DRG 痛觉痒觉神经病理性疼痛中医药

三痹汤水提液通过抑制TRPV1通道缓解神经病理性疼痛机制研究

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时珍国医国药 2022年第8期33卷 1856-1859页

作者：王楠王地均阮永兰钱宇章孟琢房晓阳席志鹏谢林南京中医药大学附属中西医结合医院江苏南京210000 常州市中医医院江苏常州213000

目的探讨三痹汤水提液缓解慢性神经病理性疼痛的机制。方法将30只小鼠随机分为5组,每组6只,分别为对照组、造模组、低三痹汤组、高三痹汤组及加巴喷丁组。对照组不造模,其余组进行CCI模型的制造,术后第一天开始灌胃,低剂量组及高剂量组... 详细信息

目的探讨三痹汤水提液缓解慢性神经病理性疼痛的机制。方法将30只小鼠随机分为5组,每组6只,分别为对照组、造模组、低三痹汤组、高三痹汤组及加巴喷丁组。对照组不造模,其余组进行CCI模型的制造,术后第一天开始灌胃,低剂量组及高剂量组给予不同剂量的三痹汤水提液,模型组给予正常蒸馏水,加巴喷丁组给予加巴喷丁水溶解剂。术后第1、3、5、7、9、11、13天分别于灌药后2h行小鼠造模侧机械缩足阈值(MWT)及热辐射潜伏期(TWL)测量。小鼠行为学最终完成后断头处死,取造模侧L4-L6 DRG(背根神经节),通过Q-PCR、Western blot、Ca^(2+)成像技术检测组织及细胞中TRPV1的表达及活性。结果动物行为学实验表明三痹汤水提液可明显降低CCI模型小鼠对机械痛及热敏痛的刺激反应。Q-PCR及Western blot表明三痹汤可降低CCI模型鼠DRG中TRPV1 mRNA及蛋白的表达。Ca^(2+)成像技术结果表明三痹汤可对CCI小鼠DRG神经元TRPV1活性产生影响。结论三痹汤可通过抑制TRPV1的表达及活性来缓解神经病理性疼痛。

关键词：三痹汤神经病理性疼痛机制研究 TRPV1

羌活水提液通过TRPV1调节神经病理性疼痛镇痛机制研究

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南京中医药大学学报 2021年第4期37卷 508-513页

作者：王地均阮永兰金香吉海旺唐宗湘王长明南京中医药大学医学院·整合医学院江苏南京210023

目的探索羌活水提液(Water extract of notopterygium incisum,WN)对神经病理性疼痛的作用及分子生物学机制。方法疼痛行为实验检测WN灌胃对急性疼痛模型小鼠和慢性缩窄性损伤(Chronic constriction injury,CCI)引起的神经病理性疼痛模... 详细信息

目的探索羌活水提液(Water extract of notopterygium incisum,WN)对神经病理性疼痛的作用及分子生物学机制。方法疼痛行为实验检测WN灌胃对急性疼痛模型小鼠和慢性缩窄性损伤(Chronic constriction injury,CCI)引起的神经病理性疼痛模型小鼠热痛觉过敏和机械痛觉过敏的影响。免疫组织化学、qPCR法检测WN灌胃对小鼠DRG神经元TRPV1表达的影响。钙成像法检测WN灌胃后CCI模型小鼠DRG神经元对TRPV1激动剂辣椒素钙内流的影响。结果WN灌胃后,可显著减轻急性疼痛模型小鼠和CCI模型小鼠的热痛觉过敏和机械痛觉过敏(P均受到显著抑制(P<0.05),DRG神经元对TRPV1激动剂辣椒素的反应显著减弱(P<0.001)。结论WN可能通过调节TRPV1来减轻CCI引起的疼痛,为中药镇痛的分子生物学机制提供新的思路和基础。

关键词：羌活神经病理性疼痛 DRG TRPV1

孟河医派特色炮制辅料猪心血和猪血的蛋白质组学分析及其对丹参抗小胶质细胞炎症损伤的影响

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中国实验方剂学杂志 2023年第18期29卷 137-145页

作者：刘楠廉源沛尹春燕蔡佳丽王地均朱力刘产明黄玮颜晓静南京中医药大学附属常州市中医医院、常州市孟河医派人用经验研究与转化重点实验室江苏常州213003

目的:采用蛋白质组学考察猪心血(PCB)和猪血(PB)的蛋白差异,并比较二者对丹参(DS)抗小胶质细胞炎症损伤的影响。方法:采用纳升液相色谱-四极杆轨道阱质谱法(nLC-MS/MS)联合生物信息学比较PCB和PB模拟胃肠道消化的蛋白质组学差异,应用蛋... 详细信息

目的:采用蛋白质组学考察猪心血(PCB)和猪血(PB)的蛋白差异,并比较二者对丹参(DS)抗小胶质细胞炎症损伤的影响。方法:采用纳升液相色谱-四极杆轨道阱质谱法(nLC-MS/MS)联合生物信息学比较PCB和PB模拟胃肠道消化的蛋白质组学差异,应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)验证二者部分共有蛋白和差异蛋白含量;应用皮质酮(CORT)联合脂多糖(LPS)构建BV2神经炎症模型,考察PCB和PB对DS抗炎症细胞中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。结果:蛋白质组学结果显示,PCB和PB中共有蛋白69种、差异蛋白68种,其中共有蛋白中包括具有脑靶向作用的转铁蛋白(Tf),二者差异蛋白分别为41、27种。Western blot验证结果显示,二者共有Tf含量差异无统计学意义,差异蛋白肌酸激酶M及心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量差异则具有统计学意义(P均能明显抑制BV2炎症细胞的TNF-α和IL-6水平(P均能明显抑制BV2炎症细胞TNF-α和IL-6水平(P均能促进DS抑制神经炎症作用,且PCB促进DS抑制作用更显著,这可能是由于二者存在参与能量代谢相关差异蛋白所致,可为揭示PCB-DS及PB-DS的炮制科学内涵奠定基础。

关键词：孟河医派特色炮制辅料猪心血猪血液质联用技术蛋白质组学 BV2细胞

阿仑膦酸修饰的水凝胶负载柚皮素骨靶向系统构建及其增强成骨分化作用

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中国骨质疏松杂志 2023年第4期29卷 531-537页

作者：解强常俊杰高俊王地均蔡佳丽颜晓静戴文昊刘亦冰张曦泰州市中医院江苏泰州225399 南京中医药大学江苏南京210046 常州市中医医院江苏常州213003 张曦省名中医工作室江苏常州213003

目的中药黄酮类单体存在水溶性较差、生物利用度低等特点,低效率全身给药的方式限制其在治疗骨疾患的应用,本研究旨在改善黄酮类单体治疗骨质疏松局限现状。方法本研究制备了阿仑膦酸修饰的水凝胶负载中药骨碎补活性黄酮单体柚皮素的凝... 详细信息

目的中药黄酮类单体存在水溶性较差、生物利用度低等特点,低效率全身给药的方式限制其在治疗骨疾患的应用,本研究旨在改善黄酮类单体治疗骨质疏松局限现状。方法本研究制备了阿仑膦酸修饰的水凝胶负载中药骨碎补活性黄酮单体柚皮素的凝胶载药系统,通过活体荧光技术验证其骨靶向性能,并进一步采用PCR、WB等技术探究了该凝胶载药系统的促进成骨分化效用。结果制备的凝胶载药系统促进成骨且稳定性好,释药部位集中于大鼠骨组织,干预成骨细胞MC3T3-E1细胞后,其成骨因子及相关蛋白表达明显增强。结论阿仑膦酸修饰的水凝负载柚皮素可实现骨靶向大鼠骨组织,且能有效促进成骨分化,从而可潜在实现治疗骨质疏松。

关键词：骨质疏松柚皮素凝胶载药系统骨靶向成骨分化

儿童青少年24h活动行为的演化路径与热点解析

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中国儿童保健杂志 2024年

作者：赵晗华王地高莹浙江大学教育学院体育学系

目的探索国际儿童青少年24h活动行为的前沿热点和发展趋势,为促进儿童青少年健康发展提供依据。方法以Web of ScienceTM核心合集数据库为数据源,检索2002年1月2022年12月儿童青少年24h活动行为相关文献,通过CiteSpace软件对纳入1 616... 详细信息

目的探索国际儿童青少年24h活动行为的前沿热点和发展趋势,为促进儿童青少年健康发展提供依据。方法以Web of ScienceTM核心合集数据库为数据源,检索2002年1月2022年12月儿童青少年24h活动行为相关文献,通过CiteSpace软件对纳入1 616篇文献进行关键词共线分析、关键词聚类分析、关键词突现分析。结果国际儿童青少年24h活动的演化路径可以划分为“变革期”“形成期”“发展期”3个阶段,对应“不同行为对健康的影响”、“24h活动行为流行病学调查”“24h活动行为指南发布”3个阶段特征。前沿热点聚焦于24h活动行为与肥胖、24h活动行为与建成环境、24h活动行为的测量。结论对比国际经验,国内相关研究起步较晚,存在流行病学证据支撑不足、客观测量工具标准尚未统一、身体活动指南证据缺乏等局限性问题。建议后续研究重视大样本流行病学调查和测量工具标准化,并完善身体活动指南,以促进儿童青少年健康发展。

关键词： 24h活动行为儿童青少年前沿热点演化路径

CCM模式下单相Boost APFC效率优化设计

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电力系统及其自动化学报 2024年

作者：徐恒山王地康张旭军马丽三峡大学电气与新能源学院国网甘肃省电力公司电力科学研究院国网天津市电力公司东丽供电公司

针对单相Boost有源功率因数校正（APFC）变换器难以在低成本下优化效率的问题，提出一种基于拉格朗日乘数法的单相Boost APFC效率优化设计方法。首先，根据连续导通模式（CCM）下Boost APFC的工作原理，提出一种用于精确计算单相Boost A... 详细信息

针对单相Boost有源功率因数校正（APFC）变换器难以在低成本下优化效率的问题，提出一种基于拉格朗日乘数法的单相Boost APFC效率优化设计方法。首先，根据连续导通模式（CCM）下Boost APFC的工作原理，提出一种用于精确计算单相Boost APFC在CCM模式下各元件电流的解析法以评估理论与仿真误差；然后，推导出单相Boost APFC效率和无源元件总体积的解析表达式；最后，考虑最大磁通密度、电流纹波率约束，采用拉格朗日乘数法求解单相Boost APFC最优效率和功率密度所需的开关频率和升压电感值。实验证明，满载下样机峰值效率可达96.81%且设计误差小于0.1%，所提方法可有效提高单相Boost APFC效率。

关键词：有源功率因数校正单相升压变换器解析法