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河南省牛呼吸疾病综合征主要病原流行情况分析

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中国奶牛 2023年第7期 57-60页

作者：薛永康闫磊刘晓曼王向佩孙贝贝张震河南省奶牛生产性能测定中心郑州450002 河南省奶牛生产性能测定有限公司郑州450002 河南省种业发展中心郑州450002

为调查河南省牛呼吸疾病综合征病原的流行情况,明确牛呼吸疾病综合征病因、丰富河南省牛呼吸疾病综合征病原流行资料,在河南省内采样并使用荧光定量PCR法对患病牛只鼻拭子样品进行检测。结果表明河南省牛呼吸疾病综合征病原检出率依次... 详细信息

为调查河南省牛呼吸疾病综合征病原的流行情况,明确牛呼吸疾病综合征病因、丰富河南省牛呼吸疾病综合征病原流行资料,在河南省内采样并使用荧光定量PCR法对患病牛只鼻拭子样品进行检测。结果表明河南省牛呼吸疾病综合征病原检出率依次是多杀性巴氏杆菌(47.39%)、牛支原体(32.09%)、溶血性曼氏杆菌(23.88%)、牛冠状病毒(16.79%)、牛副流感病毒3型(13.43%)、牛呼吸道合胞体病毒(10.45%)、牛病毒性腹泻病毒(7.46%)。同时河南省内多为混合感染,且病原流行情况有地区差异。

关键词：牛呼吸疾病综合征多杀性巴氏杆菌牛支原体溶血曼氏杆菌

急性死亡奶牛血液中松鼠葡萄球菌的分离与鉴定

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黑龙江畜牧兽医 2023年第24期 74-78,84,150页

作者：李焦魏周峰闫磊薛永康王向佩赵玉玺刘晓曼孙贝贝张震闫跃飞新乡市畜牧技术推广站河南新乡453004 河南省种业发展中心郑州450046 河南省奶牛生产性能测定中心郑州450046 华中农业大学动物医学院武汉430070

为查找引起河南省某奶牛场产后奶牛急性死亡的病原(前期检测牛流行热病毒、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒核酸均为阴性,肠道内容物中的梭菌、肺脏中的巴氏杆菌核酸为阴性),试验采集猝死奶牛的脾脏、肝脏等组织及血液样本进行... 详细信息

为查找引起河南省某奶牛场产后奶牛急性死亡的病原(前期检测牛流行热病毒、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒核酸均为阴性,肠道内容物中的梭菌、肺脏中的巴氏杆菌核酸为阴性),试验采集猝死奶牛的脾脏、肝脏等组织及血液样本进行细菌的分离培养、革兰氏染色和镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的PCR扩增与测序、药物敏感试验和致病性试验。结果表明:从奶牛血液样本中分离到1株细菌,该菌株革兰氏染色镜检呈蓝紫色并排列成葡萄状,且与葡萄球菌的生化特性相符,其16S rRNA基因序列与GenBank数据库中的松鼠葡萄球菌高度同源,相似性在99.7%以上,证实分离菌株为松鼠葡萄球菌,命名为HNSX-B1;HNSX-B1株对头孢类药物(头孢唑林、头孢拉定和头孢曲松)、喹诺酮类药物(诺氟沙星、环丙沙星和氧氟沙星)、四环素类药物(四环素、多西环素和米诺环素)和庆大霉素、红霉素、哌拉西林、苯唑西林敏感,对氨苄西林、头孢他啶和氨基糖苷类药物(卡那霉素、克林霉素)中度敏感,对青霉素和复方新诺明耐药;小鼠在感染HNSX-B1株(1×109cfu/mL,200μL)36 h后全部死亡。说明试验成功分离到1株对小鼠具有明显致病性的松鼠葡萄球菌,该菌可能是引起该奶牛场产后奶牛急性死亡的病原。

关键词：松鼠葡萄球菌急性死亡分离鉴定致病性

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小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析

中国兽医科学 2014年第1期44卷 7-13页

作者：曹薇周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果... 详细信息

根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果显示，共获得了11条小附红细胞体mpgl基因序列，序列长度均为1011bp。同源性分析显示，所获得的1l条小附红细胞体mpgl基因序列之间的相似性为96．8％～99．9％，预测氨基酸序列的相似性在97．9％～100％之间；与GenBank中公布的猪附红细胞体msgl基因核苷酸序列相似性在96．6％～98．2％之间，氨基酸序列的相似性为98．2％～99．1％。系统进化分析表明，msgl基因与mpgl基因共同构成每个聚簇。

关键词：小附红细胞体 mpg1基因克隆序列分析

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家禽滑液囊支原体病防控的关键点

中国禽业导刊 2017年第5期34卷 63-64页

作者：徐京生王向佩申超河南祺祥生物科技有限公司

种鸡、商品蛋鸡、白羽商品肉鸡、肉杂鸡发病率逐年增加，一方面是我国疫苗供应不够及时，另一方面是除种鸡场外的养殖场不够重视本病的免疫预防，尤其是能够引起家禽运动障碍的疾病多见于以下两类：一是病毒性致病因子，主要是呼肠孤病... 详细信息

种鸡、商品蛋鸡、白羽商品肉鸡、肉杂鸡发病率逐年增加，一方面是我国疫苗供应不够及时，另一方面是除种鸡场外的养殖场不够重视本病的免疫预防，尤其是能够引起家禽运动障碍的疾病多见于以下两类：一是病毒性致病因子，主要是呼肠孤病毒（REOV）、脑脊髓炎病毒（AEV）、马立克氏病病毒（MDV）。

关键词：滑液囊支原体病家禽马立克氏病病毒防控脑脊髓炎病毒呼肠孤病毒商品蛋鸡商品肉鸡

微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达

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中国兽医科学 2014年第5期44卷 485-491页

作者：杨晓娇周鹏米荣升黄燕石凯王晓娟王向佩刘宇轩雷晓思陈兆国中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241 四川农业大学动物医学院四川雅安625014 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的... 详细信息

为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。

关键词：微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒

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猪附红细胞体MSG1基因的克隆及序列分析

动物医学进展 2013年第7期34卷 44-48页

作者：曹薇周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

为研究猪附红细胞体MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经发表的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1),设计引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体... 详细信息

为研究猪附红细胞体MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经发表的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1),设计引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果共获得了82条猪附红细胞体MSG1基因序列,序列长度为1 011bp,共编码336个氨基酸。同源性分析显示与GenBank中已经发表的猪附红细胞体MSG1基因核苷酸序列相似性为96.5%～98.3%,氨基酸的相似性为97.9%～99.1%。MSG1基因核苷酸序列的系统进化分析表明,上海地区猪附红细胞体分离株与GenBank登录的德国54/96分离株序列的亲缘关系较远。

关键词：猪附红细胞体 MSG1基因克隆序列分析

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猪附红细胞体a1基因的克隆及序列分析

中国兽医科学 2014年第6期44卷 593-598页

作者：王向佩周鹏沈莉萍曹薇米荣升黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1... 详细信息

为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1基因部分序列的PCR扩增、克隆、序列测定及生物信息学分析。结果显示,共获得了41条猪附红细胞体a1基因片段序列,序列长度均为1 657bp;同源性分析显示,它们与GenBank中登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列的相似性在97.7%~99.9%之间,氨基酸序列的相似性在99.1%~99.8%之间。系统进化分析表明,多数上海市猪附红细胞体分离株的a1基因与GenBank中登录的德国54/96分离株a1基因序列在同一个聚簇上。

关键词：猪附红细胞体 a1基因克隆序列分析

微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

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中国动物传染病学报 2012年第6期20卷 56-62页

作者：黄燕米荣升周鹏曹薇杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心上海200241

为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,... 详细信息

为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。

关键词：微小隐孢子虫 P23基因巴斯德毕赤酵母真核表达

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兽医实验室在动物疫病防控中的作用

湖北畜牧兽医 2021年第4期42卷 38-39页

作者：皇超英薛永康杨德新王向佩任小丽陈美凯张震河南省奶牛生产性能测定中心郑州450003 河南省奶牛生产性能测定有限公司郑州450003 河南农业大学郑州450046 河南省种牛遗传性能测定中心郑州450046

随着畜牧业的发展,兽医实验室在动物疫病防控中担负起越来越重要的角色。为了推动基层兽医实验室、第三方兽医实验室发展,梳理了兽医实验室在动物疫病防控过程中的作用及面临的问题,提出了国内基层兽医实验室能力提升建议,旨在为兽医实... 详细信息

随着畜牧业的发展,兽医实验室在动物疫病防控中担负起越来越重要的角色。为了推动基层兽医实验室、第三方兽医实验室发展,梳理了兽医实验室在动物疫病防控过程中的作用及面临的问题,提出了国内基层兽医实验室能力提升建议,旨在为兽医实验室建设提供参考。

关键词：兽医实验室疫病诊断疫病防控能力建设