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鸭肝癌组织中的鸭乙肝病毒和病毒DNA

中华肿瘤杂志 1991年第4期13卷 249-252,T001页

作者：杨广笑王全颖 130021，长春白求恩医科大学肝病研究所 30021，长春白求恩医科大学肝病研究所

用分子杂交方法检测了34只中国启东县鸭肝癌标本中鸭乙肝病毒 DNA。34份标本中,18份血清和27份癌灶和/或癌旁组织 DHBV DNA 阳性。用维多利亚兰核固红染色检测组织切片中的 DH-BV 表面抗原,23例鸭肝细胞癌中11例癌灶和15例癌旁组织中有... 详细信息

用分子杂交方法检测了34只中国启东县鸭肝癌标本中鸭乙肝病毒 DNA。34份标本中,18份血清和27份癌灶和/或癌旁组织 DHBV DNA 阳性。用维多利亚兰核固红染色检测组织切片中的 DH-BV 表面抗原,23例鸭肝细胞癌中11例癌灶和15例癌旁组织中有着染细胞。8例胆管细胞癌中也有3例的癌旁组织有着染细胞,但它们的癌灶组织是阴性的。3例混合型鸭肝癌的所有癌旁和2例癌灶维多利亚兰染色阳性。维多利亚兰核固红染色可以清晰地显示石蜡包埋的组织切片中 DHBV 表面抗原。这些结果提示鸭肝细胞癌同 DHBV 感染密切相关。

关键词：肝肿瘤乙肝病毒脱氧核糖核酸鸭

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学习策略支持下的网络教学系统设计与实现

学习策略支持下的网络教学系统设计与实现

作者：王全颖天津大学

学位级别：硕士

伴随着计算机和通讯技术的飞速发展,网络技术很快进入了一个崭新的时代。网络教育就是利用先进的计算机技术、网络技术,改革传统的教学模式,让科学的教育理念和先进的教学手段走进学校、课堂,是教育发展的必然选择。学习策略在学习中占... 详细信息

伴随着计算机和通讯技术的飞速发展,网络技术很快进入了一个崭新的时代。网络教育就是利用先进的计算机技术、网络技术,改革传统的教学模式,让科学的教育理念和先进的教学手段走进学校、课堂,是教育发展的必然选择。学习策略在学习中占有重要的地位和作用,可有效地改进学生的学习,提高学习的质量,同时促进教师的教学。教师通过掌握学生的学习规律,利用学习策略教学,可减少教学和训练时间,达到减轻学生学习负担的目的。本论文对《学习策略支持下的网络教学系统设计与实现》进行了论述。该系统借助于计算机技术、网络技术,为教师提供了设计各种具体策略的功能;对学生在学习过程中策略的使用情况进行跟踪,并进行分析。教师可查看学生策略的使用情况,以此为依据调整教学内容及策略内容,并可进行学习策略的研究,提高教学效果;学生可查看自己的策略使用情况,从而改变自己的学习方法,提高学习效率。整个系统采用的是目前应用比较广泛的B/S(浏览器/服务器)模式,教师、学生在任何一台同服务器连接的计算机上均可登录,以不同的身份进入系统进行教学、学习。将学习策略应用于网络教学中,学生在教师设计的策略指导下进行学习,使学生在学习过程中领悟到如何运用策略、使用策略比不使用策略更有效,以激发学生自觉使用策略的积极性。该系统具有较强的实用价值,在国内尚属领先。目前该系统已进行了小范围的试运行。本文就该系统的理论基础、系统设计、系统实现技术、学习策略设计及实现、系统运行情况予以描述,同时,对该系统的继续开发前景做了展望。

关键词：学习策略网络教学策略应用

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人神经生长因子重组腺伴随病毒载体的构建

西安交通大学学报（医学版） 2004年第3期25卷 226-228页

作者：马巍刘淼杨广笑王全颖西安交通大学第一医院骨科陕西西安710061 西安华广生物工程有限公司陕西西安710061

目的　为了研究人神经生长因子 (hNGF)基因导入急性脊髓损伤 (SCI)模型的治疗作用 ,构建并产生重组腺伴随病毒 (AAV)载体。方法　将hNGF外源性核酸片段插入AAV shuffer质粒 pSSHG Neo的KpnⅠ BamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒 pFG1... 详细信息

目的　为了研究人神经生长因子 (hNGF)基因导入急性脊髓损伤 (SCI)模型的治疗作用 ,构建并产生重组腺伴随病毒 (AAV)载体。方法　将hNGF外源性核酸片段插入AAV shuffer质粒 pSSHG Neo的KpnⅠ BamHⅠ位点构建AAV。用腺病毒辅助质粒 pFG14 0代替野生型腺病毒 ,包装质粒 pAAV/Ad及已构建的pSSHG Neo三质粒磷酸钙共沉淀法在肾胚胎 2 93细胞系中同源重组包装rAAV。使用地高辛标记的斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果　成功构建了重组病毒质粒pSSHG/hNGF ,经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分 ,梯度稀释测得滴度为 1.4 6× 10 12 PFU·mL-1。结论　成功地制备了人神经生长因子重组腺伴随病毒 (rAAV/hNGF)载体 ,为SCI基因治疗实验奠定了基础。

关键词： hNGF基因重组腺伴随病毒(rAAV) 基因转移

鸭肝癌组织中整合形式的鸭乙型肝炎病毒DNA

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中华消化杂志 1990年第4期10卷 224-227页

作者：杨广笑王全颖白求恩医科大学肝病研究所北京市肝炎研究所青海医学院附属医院

用斑点杂交法检查34只启东鸭肝癌的血清、癌灶和癌旁中的鸭乙型肝炎病毒DNA（DHBV·DNA），其中18份血清、22只癌灶及26只癌旁组织DHBV·DNA阳性。22只病毒DNA阳性的癌灶组织的Southern blot分析发现，13只为整合形式，另9只为整合兼游... 详细信息

用斑点杂交法检查34只启东鸭肝癌的血清、癌灶和癌旁中的鸭乙型肝炎病毒DNA（DHBV·DNA），其中18份血清、22只癌灶及26只癌旁组织DHBV·DNA阳性。22只病毒DNA阳性的癌灶组织的Southern blot分析发现，13只为整合形式，另9只为整合兼游离形式的DHBV·DNA。14只癌旁同时做Southern blot分析，5只为整合、4只为游离和4只为整合兼游离形式的病毒DNA，另一只DHBV·DNA阴性。比较每份标本的癌灶和癌旁的杂交图谱发现，11份是不同的，另3份是相同的。维多利亚蓝染色证实，34份肝癌标本中13只癌灶和21只癌旁组织中有DHBV抗原。这些结果表明鸭肝癌同DHBV密切相关，病毒DNA整合在癌细胞的基因中，具有转化宿主细胞作用。

关键词：鸭乙肝病毒病毒DNA整合肝癌

甲型肝炎病毒5'非翻译区对重组痘苗病毒表达甲肝抗原的影响

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病毒学报 1996年第1期12卷 79-82页

作者：王晓洁王全颖伊瑶郭可謇中国预防医学科学院病毒学研究所

甲型肝炎病毒５＇非翻译区对重组痘苗病毒表达甲肝抗原的影响王晓洁，王全颖，伊瑶，郭可謇（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词：甲肝５＇非翻译区，甲肝重组痘苗病毒，甲肝抗原表达甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）属... 详细信息

甲型肝炎病毒５＇非翻译区对重组痘苗病毒表达甲肝抗原的影响王晓洁，王全颖，伊瑶，郭可謇（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词：甲肝５＇非翻译区，甲肝重组痘苗病毒，甲肝抗原表达甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）属小核糖核酸病毒科（Ｐｉｃｏｍａｖｉ...

关键词：甲型肝炎病毒 5'非翻译区重组痘苗病毒抗原

丙型肝炎病毒NS3-NS4基因的表达及鉴定

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西安交通大学学报（医学版） 2004年第5期25卷 430-432,442页

作者：寇小格李荣袁育康杨广笑王全颖新乡医学院第一附属医院肿瘤科河南新乡453100 西安交通大学免疫学教研室陕西西安710061 西安华广生物工程有限公司陕西西安710025

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法　应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进... 详细信息

目的　构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS3 NS4全长基因重组质粒并诱导表达 ,鉴定NS3 NS4蛋白的抗原性。方法　应用PCR技术从pUC19/HCV中扩增目的基因 ,构建重组表达质粒 ,进行原核表达 ,用SDS PAGE、ELISA技术对表达产物的抗原性进行鉴定。结果　成功构建、表达了重组质粒pBV2 2 0 /NS3 NS4 ,用 5 0份质控标准血清对表达蛋白质进行抗原性检测 ,与第二代诊断试剂相比 ,总符合率为 96 %。结论　全长NS3 NS4蛋白是一个优势免疫原性区 ,应该是HCVEIA诊断试剂的有效成分。

关键词： HCV NS3-NS4全长基因重组质粒表达抗原性

hTrx基因重组逆转录病毒载体的构建及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第3期19卷 295-297页

作者：李敏杰刘勇赵建军王全颖杨广笑西安交通大学神经科学中心陕西西安710061 西安华广生物有限公司陕西西安710061

目的 :构建携带人Trx(硫氧还蛋白 )基因的逆转录病毒载体。方法 :用DNA重组技术 ,将人Trx基因定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN ,用限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行酶切鉴定。以磷酸钙转染法 ,将重组的逆转录病毒载体转染入包装细胞系PA3... 详细信息

目的 :构建携带人Trx(硫氧还蛋白 )基因的逆转录病毒载体。方法 :用DNA重组技术 ,将人Trx基因定向克隆入逆转录病毒载体pLXSN ,用限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行酶切鉴定。以磷酸钙转染法 ,将重组的逆转录病毒载体转染入包装细胞系PA317,并用G4 18筛选的方法测定转染细胞上清中病毒的滴度。结果 :构建了重组逆转录病毒载体 ,经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切 ,电泳出现两个条带 ,分别为 0 .3kb和 5 .9kb。转染细胞上清中病毒滴度为 5 .5× 10 9cfu/L。提示构建携带人Trx基因的逆转录载体成功。结论 :携带人Trx基因的逆转录病毒载体成功构建为Trx基因的治疗。

关键词：人硫氧还蛋白逆转录病毒载体基因重组

重组质粒pYTA/Aβ-HBcAg的构建及其在大肠杆菌中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 671-674页

作者：冯改丰胡海涛董炜疆王全颖杨广笑西安交通大学医学院人体解剖学教研室陕西西安710061 西安华广生物工程公司陕西西安710025

目的 :研究 β 淀粉样肽 (Aβ)与HBcAg的融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,并检测表达的融合蛋白Aβ HBcAg的免疫原性。方法 :从重组质粒 7Z/Aβ HBcAg中 ,切下含Aβ HBcAg的基因片段 ,将其融合于质粒pYTA1的lac启动子之后 ,构建重组表达质... 详细信息

目的 :研究 β 淀粉样肽 (Aβ)与HBcAg的融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,并检测表达的融合蛋白Aβ HBcAg的免疫原性。方法 :从重组质粒 7Z/Aβ HBcAg中 ,切下含Aβ HBcAg的基因片段 ,将其融合于质粒pYTA1的lac启动子之后 ,构建重组表达质粒pYTA/Aβ HBcAg。以此重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在IPTG诱导下表达。超声破碎表达的细菌 ,通过SDS PAGE及考马斯亮蓝染色 ,检测融合蛋白Aβ HBcAg的表达。采用ELISA法检测融合蛋白的反应原性。融合蛋白经饱和硫酸铵盐析法分离和纯化后免疫BALB/c小鼠 ,用ELISA法检测血清中抗 Aβ抗体的滴度。结果 :融合蛋白以可溶性形式存在于细菌裂解液的上清中 ,其表达量为菌体总蛋白量的 7%。表达的融合蛋白既有Aβ的反应原性 ,又有与HBcAg的反应原性。经 3次免疫后 ,BALB/c小鼠血清中抗 Aβ抗体的滴度最高可达为 1∶16 0 0 0。结论 :融合基因Aβ HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达。表达产物为可溶性蛋白 ,存在于细菌裂解液的上清中 ,具有较强的免疫原性。

关键词：阿尔茨海默病 β-淀粉样肽 HBcAg 免疫原性疫苗

DUCK HEPATITIS B VIRUS INFECTION AND DUCK HEPATOCELLULAR CARCINOMA

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中华医学杂志(英文版) 1992年第3期105卷 217-226页

作者：杨广笑王全颖金友南迟宝荣李家敏叶维法 130021 Changchun Research Center of Hepatology Bethune University of Medical Sciences 30021 Changchun Research Center of Hepatology Bethune University of Medical Sciences

To study the relationship between duck hepatitisB virus(DHBV)infection and duck hepatocellularcarcinoma(DHCC),histological examination andDHBV DNA hybridization were performed in 875ducks from three flocks in Qidong ***,34 suffered from hepatoma,including 23hepatocellular carcinoma,8 cholangiocarcinoma and *** the 34 duckswith hepatoma 27 were positive for DHBV DNA in theliver and/or *** DNA was demonstratedin neoplastic nodules of 22 *** blot analy-sis showed that 13 cases were of the integrated patternof DHBV DNA in neoplastic *** paratumortissues of 14 ducks with massive tumor were analysedat the same *** cases showed integrated pattern,4 cases free pattern and the other 4 cases both integra-tion and free pattern of DHBV *** pattern of DHBV DNA in tumor nodulewas different from that in paratumor regions in 11cases and identical in 3 *** antigen was posi-tive in 13 tumor nodules and 21 paratumor tissues inthe 34 ducks with hepatic tumor by both victoria blueand orcein stain *** liver diseases werefound in 30 out of the 34 ducks with hepatoma,in-cluding 12 cirrhosis and 18 chronic active *** blot analysis of 122 DHBV DNA positiveQidong ducks without hepatoma,only free pattern ofDHBV was seen,while 44 control ducks fromChangchun were negative for DHBV *** tumor nor liver diseases were seen in the con-trol *** results suggest that hepatocellularcarcinoma in ducks is similar to that in human *** have a high frequency of viral DNA integratedinto the host genome and a liver disease background.

关键词： VIRAL-DNA SEQUENCES LIVER SERUM