检索结果-南通市图书馆

白色瘤胃球菌双功能糖苷水解酶IDSGH5-23的表达与性质分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报(农业与生命科学版) 2024年

作者：韩俊彦丁钰杰尉俏女徐晓锋章成昌张骥王佳堃尹尚军徐洁皓王谦杭州云心生物科技有限公司浙江万里学院生物与环境学院浙江大学动物科学学院奶业科学研究所

葡聚糖酶和木聚糖酶等糖苷水解酶是能水解、消减饲料中非淀粉多糖类抗营养因子酶制剂的重要组分。本研究基于前期构建的湖羊瘤胃微生物宏转录组文库信息，从瘤胃微生物c DNA中克隆了一种葡聚糖酶/木聚糖酶双功能酶基因IDSGH5-23，在大... 详细信息

葡聚糖酶和木聚糖酶等糖苷水解酶是能水解、消减饲料中非淀粉多糖类抗营养因子酶制剂的重要组分。本研究基于前期构建的湖羊瘤胃微生物宏转录组文库信息，从瘤胃微生物c DNA中克隆了一种葡聚糖酶/木聚糖酶双功能酶基因IDSGH5-23，在大肠埃希菌中进行异源表达，并研究了重组蛋白IDSGH5-23的催化性质。结果发现：IDSGH5-23蛋白的理论分子量和等电点分别为45.8 kDa和4.44，与来自白色瘤胃球菌（Ruminococcus albus）的GH5蛋白（WP＿013499238）氨基酸序列相似性达99.51%。在本试验条件下，IDSGH5-23的最适反应温度和pH分别为30℃和6.0，在pH 4.0～8.0范围内较为稳定；IDSGH5-23能高效催化大麦β-葡聚糖、地衣多糖、魔芋胶和榉木木聚糖，其中，水解地衣多糖主要生成纤维三糖，水解大麦β-葡聚糖生成聚合度大于3的纤维寡糖，水解榉木木聚糖生成木三糖至木六糖。综上所述，本研究获取了一个来自瘤胃微生物的葡聚糖酶/木聚糖酶双功能酶IDSGH5-23，为研发饲用酶制剂和制备低聚寡糖奠定了基础。

关键词：瘤胃微生物葡聚糖酶木聚糖酶催化性质底物水解

湖羊瘤胃微生物来源的低温葡聚糖酶的表达与功能表征

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

浙江大学学报(农业与生命科学版) 2024年

作者：丁钰杰徐晓锋韩俊彦周叶波麻子莹沈桢祎钱国英王佳堃徐洁皓王谦浙江大学动物科学学院奶业科学研究所浙江万里学院生物与环境学院

葡聚糖酶作为添加剂在饲料、食品、纺织工业中具有重要的应用价值。本研究从湖羊瘤胃微生物c DNA中扩增IDSGH5-50基因，通过大肠埃希菌进行异源表达，研究重组蛋白的酶学性质和水解产物。结果表明：IDSGH5-50编码690个氨基酸，蛋白质分... 详细信息

葡聚糖酶作为添加剂在饲料、食品、纺织工业中具有重要的应用价值。本研究从湖羊瘤胃微生物c DNA中扩增IDSGH5-50基因，通过大肠埃希菌进行异源表达，研究重组蛋白的酶学性质和水解产物。结果表明：IDSGH5-50编码690个氨基酸，蛋白质分子量为75.78 kDa，等电点为4.79；重组蛋白r IDSGH5-50的最适反应条件为温度30℃、pH 6.0，在4～20℃保持较高活性（>70%)，在pH 5.0～7.0范围内稳定性较高。底物谱分析显示，rIDSGH5-50能催化大麦β-葡聚糖、苔藓地衣多糖、罗望子木葡聚糖和魔芋胶，比活力分别为（10.42±0.16）、（7.12±0.08）、（7.03±0.38）、（5.94±0.65） U/mg。薄层色谱分析显示，在rIDSGH5-50催化下，大麦葡聚糖主要降解成纤维四糖、五糖，地衣多糖主要降解成纤维三糖、五糖，魔芋胶主要降解成纤维五糖，木葡聚糖主要降解成聚合度>5的寡糖。本研究报道了一种来自瘤胃球菌属的低温β-1,4-内切葡聚糖酶IDSGH5-50(EC 3.***.1.4)，为饲料、食品酶制剂开发奠定了基础。

关键词：湖羊瘤胃葡聚糖酶低温冷适应底物水解

湖羊瘤胃微生物GH9家族葡聚糖酶基因IDSGLUC9-25的表达与功能表征

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2024年第3期64卷 755-766页

作者：徐晓锋韩俊彦丁钰杰廖静高德英张骥王佳堃尹尚军王谦徐洁皓浙江万里学院生物与环境学院浙江宁波315100 浙江大学动物科学学院奶业科学研究所浙江杭州310058 杭州云心质力生物科技有限公司浙江杭州310018

【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行... 详细信息

【目的】葡聚糖酶是饲用添加剂的重要成分,本研究旨在从湖羊消化道微生物中挖掘性质优良的GH9家族葡聚糖酶基因,用于研发新型饲用酶制剂。【方法】从湖羊瘤胃微生物cDNA中扩增IDSGLUC9-25基因,在大肠杆菌中进行异源表达,对重组蛋白进行诱导表达和纯化,研究重组蛋白的酶学性质和底物水解模式。【结果】IDSGLUC9-25基因编码527个氨基酸,包含一个CelD_N结构和一个GH9家族催化结构域;重组蛋白rIDSGLUC9-25分子量约为62.7 kDa,最适反应温度和pH分别为40℃和6.0,在30–50℃下活性较高,在pH 4.0–8.0范围内能够保持较高的稳定性,经pH4.0–8.0缓冲液处理1h后残余活性均大于90%;底物谱分析表明,rIDSGLUC9-25能催化大麦β-葡聚糖、苔藓地衣多糖、魔芋胶和木葡聚糖,比活性分别为(443.55±24.48)、(65.56±5.98)、(122.37±2.85)和(159.16±7.73)U/mg;利用薄层色谱法(thinlayer chromatography,TLC)和高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析水解产物发现,rIDSGLUC9-25降解大麦葡聚糖主要生成纤维三糖(占总还原糖64.19%±1.19%)和纤维四糖(占总还原糖26.24%±0.12%),催化地衣多糖主要生成纤维三糖(占总还原糖78.46%±0.89%)。【结论】本研究报道了一种来自密螺旋体属细菌的内切β-1,4-葡聚糖酶IDSGLUC9-25(EC3.***.1.4),能高效催化多糖底物生成纤维三糖和纤维四糖,为研发饲用酶制剂和制备低聚寡糖建立基础。

关键词：湖羊消化道微生物葡聚糖酶 IDSGLUC9-25 纤维寡糖

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

调控Hippo通路的因子及其研究方法

动物营养学报 2022年第7期34卷 4200-4212页

作者：覃怡琅王佳堃杨斌浙江大学奶业科学研究所杭州310013 浙江科技学院生物与化学工程学院杭州310023

Hippo通路是由核心激酶、效应因子、辅助因子和转录因子共同组成的激酶级联反应链,调控细胞的生长、代谢和信号转导等重要过程。跨膜蛋白、机械信号、G蛋白偶联受体、营养素等均能调控Hippo通路。通过条件性小鼠敲除模型和使用靶向性化... 详细信息

Hippo通路是由核心激酶、效应因子、辅助因子和转录因子共同组成的激酶级联反应链,调控细胞的生长、代谢和信号转导等重要过程。跨膜蛋白、机械信号、G蛋白偶联受体、营养素等均能调控Hippo通路。通过条件性小鼠敲除模型和使用靶向性化学制剂,研究人员发现姜黄素、叶酸、白藜芦醇等通过Hippo通路发挥调控细胞发育的作用,即Hippo信号通路在营养素调控动物生长方面扮演重要角色。为此本文对Hippo通路的组成、作用模式、调控因子和目前的研究方法进行综述,以期为Hippo通路在畜牧生产上的研究提供支持。

关键词： Hippo通路作用模式调控因子小鼠模型化学制剂

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物消化道微生物培养组学研究进展

中国畜牧杂志 2022年第5期58卷 39-45页

作者：米兰王佳堃浙江大学奶业科学研究所浙江杭州310058

自然环境中绝大部分微生物仍“尚未被培养”,这极大限制了人们对微生物功能的研究,以及微生物资源的开发和利用。培养组学基于微生物基因组信息获得目标微生物的最佳生存环境,利用膜扩散型培养技术、微流控型培养技术和细胞分选培养技... 详细信息

自然环境中绝大部分微生物仍“尚未被培养”,这极大限制了人们对微生物功能的研究,以及微生物资源的开发和利用。培养组学基于微生物基因组信息获得目标微生物的最佳生存环境,利用膜扩散型培养技术、微流控型培养技术和细胞分选培养技术等从自然环境中分离、培养“尚未被培养”的微生物,并通过高通量组学技术加以鉴定。已成功应用于小鼠、白蚁、鸡、猪和牛消化道微生物的培养,极大地丰富了动物消化道微生物资源库,为深入探究微生物间及其与宿主间的互作关系提供了保障。本文综述了影响微生物培养的因素、培养组学的分选和鉴定技术、培养组学在动物消化道微生物研究中的应用情况,探讨了培养组学的发展前景和面临的挑战。

关键词：动物消化道高通量测序培养组学微生物未培养

钙信号转导调控动物胃肠道细胞增殖和功能的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧杂志 2023年第11期59卷 1-8页

作者：郭津晶黄开朗王佳堃浙江大学奶业科学研究所浙江杭州310058

胃肠道是动物营养吸收代谢的主要场所,调控胃肠道发育具有重要的生产意义和经济价值。钙离子是细胞内重要的第二信使,通过钙信号参与调控机体几乎所有生命活动,小到细胞收缩、胞吐,大到基因和蛋白表达、细胞增殖和凋亡以及组织、器官的... 详细信息

胃肠道是动物营养吸收代谢的主要场所,调控胃肠道发育具有重要的生产意义和经济价值。钙离子是细胞内重要的第二信使,通过钙信号参与调控机体几乎所有生命活动,小到细胞收缩、胞吐,大到基因和蛋白表达、细胞增殖和凋亡以及组织、器官的发育。大量研究表明,调节钙信号可以预防和治疗心肺血管疾病,但是否可以通过调控钙信号促进胃肠道细胞增殖和功能完善的研究甚少。为此,本文在综述细胞钙内流和钙库释放的稳衡机制的基础上,分析了钙信号调节胃肠道细胞增殖和功能完善的可能途径,以期为通过营养途径调节钙信号促进动物胃肠道发育提供理论依据和路径。

关键词：钙信号胃肠道发育功能

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

宏基因组分箱技术在反刍动物研究中的应用

中国畜牧杂志 2023年第9期59卷 82-87页

作者：陈天镕王志立王佳堃浙江大学奶业科学研究所浙江杭州310058

消化道微生物在宿主营养与免疫方面发挥重要作用。随着测序技术的进步,微生物研究越来越依赖高通量测序结果的解读。然而受测序读长的限制,将较短的DNA片段(Read)组装(Assemble)成较长的叠连群(Contig)或序列骨架(Scaffold)已成为解读... 详细信息

消化道微生物在宿主营养与免疫方面发挥重要作用。随着测序技术的进步,微生物研究越来越依赖高通量测序结果的解读。然而受测序读长的限制,将较短的DNA片段(Read)组装(Assemble)成较长的叠连群(Contig)或序列骨架(Scaffold)已成为解读宏基因组数据的必经操作。但每条contig承载的信息量仍然太少,不足以支撑微生物功能的深入研究。分箱(Binning)技术能从混合样本中区分出来自同一微生物的序列,获得较完整的微生物基因组,被越来越多地应用于微生物研究中。反刍动物依赖瘤胃微生物消化分解饲粮供能,且瘤胃微生物的组成更为复杂多样,因此,本文综述了分箱技术的优势与功能及其在反刍动物研究中的应用,为进一步应用分箱技术研究反刍动物消化道微生物提供参考依据。

关键词：分箱宏基因组反刍动物微生物

湖羊瘤胃微生物葡聚糖酶基因IDSGluc5-31的克隆、表达与性质研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧杂志 2022年第9期58卷 220-227页

作者：李锘高德英曹佳雯孙小宝何波王佳堃王谦浙江大学动物科学学院奶业科学研究所浙江杭州310058 浙江万里学院生物与环境学院浙江宁波315100 上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室上海200240

β-葡聚糖酶是一类催化β-葡聚糖降解成为纤维寡糖的糖苷水解酶,其作为饲用酶制剂在畜牧生产中具有重要应用价值。本研究旨在从前期采用宏转录学技术获取的碳水化合物活性酶序列中挖掘新型葡聚糖酶基因。从瘤胃微生物cDNA中扩增获得新... 详细信息

β-葡聚糖酶是一类催化β-葡聚糖降解成为纤维寡糖的糖苷水解酶,其作为饲用酶制剂在畜牧生产中具有重要应用价值。本研究旨在从前期采用宏转录学技术获取的碳水化合物活性酶序列中挖掘新型葡聚糖酶基因。从瘤胃微生物cDNA中扩增获得新型葡聚糖酶基因IDSGluc5-31,并构建相应的大肠杆菌工程菌。重组工程菌BL21/pET28a/IDSGluc5-31经1 mmol/L IPTG,16℃诱导表达16 h后,收集菌体、破碎后进行亲和层析,纯化的IDSGLUC5-31用于酶学性质分析。结果表明:IDSGLUC5-31的理论分子量和等电点分别为46.6 ku和4.89,呈现GH5家族典型的(β/α)_(8)桶状催化结构域。重组IDSGLUC5-31的最适反应温度和pH分别为40℃和6.0,在40℃以下或pH 5.0~7.0较为稳定,对0.1~10 mmol/L Na^(+)、0.1~1 mmol/L Ca^(2+)或Mg^(2+)表现较强耐受能力。IDSGLUC5-31能高效催化大麦葡聚糖和苔藓地衣多糖,Vmax分别为508.7、240.1μmol/(min·mg)。处理20 h后,大麦葡聚糖和苔藓地衣多糖的水解产物均为纤维三糖(产量为0.94、0.87 mg/mL)和纤维四糖(产量为0.56、0.23 mg/mL),提示IDSGLUC5-31是一种内切β-葡聚糖酶。综上,本研究获取并表征了一种来自瘤胃未培养微生物的葡聚糖酶IDSGLUC5-31,为研发新型饲用酶制剂和功能性寡糖提供参考。

关键词：瘤胃微生物葡聚糖酶异源表达酶学性质底物水解

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

瘤胃微生物多糖利用位点研究进展

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2020年第3期46卷 263-270页

作者：高歌王佳堃浙江大学动物科学学院奶业科学研究所杭州310058

多糖利用位点(polysaccharide utilization loci,PULs)是一组编排特定多糖降解的基因簇,编码细胞表面多糖结合蛋白、外膜转运蛋白、碳水化合物活性酶和转录因子。通过多糖利用位点,拟杆菌可更好地协同多个蛋白的合作,实现对植物多糖识... 详细信息

多糖利用位点(polysaccharide utilization loci,PULs)是一组编排特定多糖降解的基因簇,编码细胞表面多糖结合蛋白、外膜转运蛋白、碳水化合物活性酶和转录因子。通过多糖利用位点,拟杆菌可更好地协同多个蛋白的合作,实现对植物多糖识别、捕获和降解的一体化,具备高效利用多糖的能力。拟杆菌在瘤胃微生物中占比丰富,揭示瘤胃拟杆菌通过多糖利用位点降解纤维类物质的作用机制是改善瘤胃功能、挖掘高效酶的基础。本文主要对多糖利用位点的作用模式、调控机制及瘤胃微生物多糖利用位点的研究进展进行了综述,旨在为加强多糖利用位点的研究,并将其应用于微生物调控和生物能源开发提供理论依据。

关键词：瘤胃微生物拟杆菌多糖多糖利用位点