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SiRNA沉默XIAP基因对骨肉瘤MG-63细胞生物学特性的影响

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SiRNA沉默XIAP基因对骨肉瘤MG-63细胞生物学特性的影响

作者：王井伟河北医科大学

学位级别：硕士

目的:骨肉瘤是一种临床常见的好发于青少年的成骨性恶性肿瘤,它恶性程度高,预后比较差。随着化学疗法、手术技术、骨重建等方法的进展,5年总生存率明显提高。阿霉素(adriamycin,ADM)、顺铂(diamminedichloroplantinum,DDP)是抗骨肉瘤的... 详细信息

目的:骨肉瘤是一种临床常见的好发于青少年的成骨性恶性肿瘤,它恶性程度高,预后比较差。随着化学疗法、手术技术、骨重建等方法的进展,5年总生存率明显提高。阿霉素(adriamycin,ADM)、顺铂(diamminedichloroplantinum,DDP)是抗骨肉瘤的最有效药物,但肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是影响化疗疗效的主要原因。许多化疗药物通过诱导凋亡抗肿瘤生长。XIAP是凋亡调节因子家族中对凋亡调节作用最强的分子之一,同时是唯一的caspases抑制剂。研究显示它在多种恶性肿瘤中上调表达,并与肿瘤化疗耐药及预后差紧密相关。RNAi是近年来发展起来的新技术,si RNA已经成为继反义核酸、核酶之后基因治疗的又一新武器。为此,我们合成特异性干扰XIAP基因的si RNA,并在脂质体介导下转染骨肉瘤MG-63细胞,观察其对骨肉瘤细胞生长抑制以及细胞侵袭性的影响,以及对骨肉瘤MG-63细胞ADM药物敏感性及耐药性的影响,从而为新的骨肉瘤的治疗方法提供实验依据。方法:1根据XIAP基因已知序列化学合成1条含21-23个碱基的si RNA(XIAP-si RNA)及阴性对照(si RNA-neg);用化学合成的XIAP-si RNA转染骨肉瘤MG-63细胞,通过RT-PCR方法和流式细胞术检测转染前后MG-63细胞XIAP-m RNA和蛋白水平的表达情况,进一步观察转染前后骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制的改变,流式细胞术和MTT法进一步检测转染前后MG-63细胞的凋亡及ADM对转染前后骨肉瘤MG-63细胞的半数抑制浓度(IC50),观察化学合成的特异性XIAP-si RNA对骨肉瘤细胞增殖抑制的影响以及对骨肉瘤MG-63细胞ADM药物敏感性的影响。2统计学方法采用SPSS 13.0进行分析处理,采用t检验和单因素方差分析,如多组间两两比较采用q检验,以P<0.05认为差异有统计学意义。1 XIAP-si RNA对骨肉瘤MG-63细胞增殖有抑制作用,使细胞周期阻滞发生在细胞周期的G0/1期,并能诱导凋亡。2 XIAP-si RNA降低了XIAP m RNA和蛋白的表达水平。3 XIAP-si RNA联合ADM作用的细胞抑制率达(63.1±2.1)%,流式细胞仪分析显示XIAP-si RNA组细胞的凋亡率明显高于转染非特异性si RNA组、空载组及未转染组。结论:1特异性的化学合成XIAP-si RNA能够下调骨肉瘤MG-63细胞XIAP基因和蛋白表达,阻滞细胞周期于G0/1期和诱导凋亡。2特异性的化学合成XIAP-si RNA能增强骨肉瘤MG-63细胞对ADM的敏感性。RNAi技术有望成为肿瘤基因靶向治疗的一种新的途径。结果:

关键词：骨肉瘤 MG-63细胞 XIAP-siRNA 细胞周期凋亡阿霉素

THE EFFECT OF RNAI-MEDIATED GENE SILENCING ON HER-2/NEU GENE EXPRESSION IN LUNG ADENOCARCINOMA CELLS

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Chinese Journal of Cancer Research 2005年第2期17卷 84-89页

作者：任淑华王井伟曲平刘义张伟张林 Department of Thoracic Surgery The First Affiliated Hospital China Medical University Shenyang 110001 Tang Shan Worker Hospital Tangshan 063000 Tumor Marker Research Center Cancer Hospital & Cancer Institute Chinese Academy of Medical Sciences Beijing 100021

Objective: Her-2/neu protein overexpression has been demonstrated in Non-small cell lung cancer, especially in lung adenocarcinoma. Its overexpression often indicates a poor prognosis. Therapeutic agents against her-2/neu have been intensively sought over the past decades. The objective of this paper is to investigate the effect of chemically synthesized siRNA targeting her-2/neu on her-2/neu dysregulated human lung adenocarcinoma cells. Methods: Calu-3 cells were transfected with siRNAs formulated LipofectAMINE 2000. The her-2/neu mRNA and protein levels were detected by RT-PCR and flow cytometry (FCM). The biological morphology and growth inhibition of calu-3 cells were observed with light microscopy and MTT assay, respectively. The cell cycle and apoptosis rate were analyzed by FCM. Results: siRNA targeting Her-2/neu down-regulated the transcription of her-2/neu oncogene and protein level. Slowed cell proliferation and cell cycle arrest at G0/1 stage could be also observed, accompanied with enhanced cell apoptosis. Conclusion: Specific siRNA targeting her-2/neu can effectively inhibit her-2/neu expression in her-2/neu overexpressing calu-3 cell lines. siRNA-mediated gene silencing may be a useful therapeutic strategy for cancer.

关键词： RNAi her-2/neu Lung adenocarcinoma cells siRNA

局部应用氨甲环酸联合肾上腺素对减少全髋关节置换术失血量的影响

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实用医学杂志 2017年第2期33卷 279-281页

作者：王井伟任淑华河北医科大学附属唐山工人医院骨外二科 063000 河北医科大学附属唐山工人医院胸外科 063000

目的:探讨局部应用氨甲环酸(TXA)联合肾上腺素在减少全髋关节置换术(THA)后失血量的有效性和安全性。方法:将90例准备行THA的患者随机分为2组:TXA联合肾上腺素组(联合组,n=45)以及对照组(TXA组,n=45)。联合组向关节腔内注射TXA和肾上腺... 详细信息

目的:探讨局部应用氨甲环酸(TXA)联合肾上腺素在减少全髋关节置换术(THA)后失血量的有效性和安全性。方法:将90例准备行THA的患者随机分为2组:TXA联合肾上腺素组(联合组,n=45)以及对照组(TXA组,n=45)。联合组向关节腔内注射TXA和肾上腺素,TXA组向关节腔内注射TXA。比较两组患者术中失血量、术后引流量、总失血量、隐性失血量、血红蛋白(Hb)下降值以及红细胞比容(Hct)下降值,同时比较分析两组患者输血率以及并发症的发生率。结果:TXA联合肾上腺素可以明显减少THA患者术后引流量、总失血量以及隐形失血量、输血率、Hb下降值以及Hct下降值,差异均有统计学意义(P0.05)。两组患者术后并发症的发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TXA联合肾上腺素对减少单侧THA术后出血的疗效明确且不会增加患者术后并发症的发生。

关键词：肾上腺素氨甲环酸全髋关节置换术失血量

Her-2/neu小分子干扰RNA对肺腺癌细胞周期和凋亡机制的影响

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中华医学杂志 2005年第22期85卷 1530-1534页

作者：任淑华王井伟张林中国医科大学第一附属医院胸外科沈阳110001 唐山工人医院骨外科

目的研究人类表皮生长因子受体2(Her2/neu)小分子干扰RNA(siRNA)对Her2/neu过表达的肺腺癌细胞的细胞周期和凋亡机制的影响。方法用化学合成的靶向Her2/neusiRNA转染肺腺癌calu3细胞,转染前后通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定细胞中He... 详细信息

目的研究人类表皮生长因子受体2(Her2/neu)小分子干扰RNA(siRNA)对Her2/neu过表达的肺腺癌细胞的细胞周期和凋亡机制的影响。方法用化学合成的靶向Her2/neusiRNA转染肺腺癌calu3细胞,转染前后通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定细胞中Her2/neu、细胞周期蛋白(Cyclin)D1mRNA水平;流式细胞术检测Her2/neu蛋白水平和细胞周期的变化;AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测肺癌细胞的凋亡情况;荧光分光光度法测定Caspase3活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果Her2/neusiRNA能在mRNA和蛋白水平下调肺癌细胞株calu3中Her2/neu基因的表达。calu3细胞转染Her2/neusiRNA48h后处于G0/G1期的细胞增多,同时S期的细胞比例减少,与未转染对照组、空载体组和非特异性siRNA组比较差异有统计学意义(F=6.1,P<0.01)。转染Her2/neusiRNA后CyclinD1mRNA水平下降,同时培养上清液中的VEGF含量为176pg/ml±6pg/ml(F=24.7,P<0.01),Caspase3活性为135%±4%(F=8.9,P<0.01),细胞凋亡率为25.1%±1.2%(F=10.3,P<0.01)。结论化学合成的靶向Her2/neusiRNA能够下调Her2/neu基因表达,继而降低CyclinD1和VEGF水平,激活Caspase3途径,从而阻滞细胞周期于G0/G1期和诱导凋亡。

关键词：凋亡机制逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 小分子癌细胞周期酶联免疫吸附试验(ELISA) Caspase-3活性血管内皮生长因子(VEGF) Her-2/neu基因干扰人类表皮生长因子受体 calu-3 mRNA水平流式细胞术检测 Annexin 异硫氢酸荧光素

EXPERIMENTAL RESEARCH OF EFFECTIVENESS OF siRNA-Her-2/neu ON DRUG SENSITIVITY OF Her-2/neu-OVER-EXPRESSING LUNG ADENOCARCINOMA CELL LINE

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Chinese Journal of Cancer Research 2006年第3期18卷 173-176页

作者：任淑华王井伟曲平刘义张伟张林 Department of Thoracic Surgery The First Affiliated Hospital China Medical University Shenyang 110001 Tangshan Worker Hospital Tangshan 063000 Tumor Marker Research Center Cancer Hospital & Cancer Institute Chinese Academy of Medical Sciences Beijing 100021

Objective： Her-2/neu protein overexpression has been demonstrated in lung adenocarcinoma. Its overexpression often indicates a poor prognosis and resistance to chemotherapeutic agents. The objectives of this paper is to explore the effectiveness of double-stranded short inhibitory RNAs （siRNA） targeting Her-2/neu oncogene on the drug sensitivity of Her-2/neu-overexpressing lung adenocarcinoma cells. Methods： Lung adenocarcinoma cell line calu-3 was transfected with siRNAs formulated LipofectAMINE 2000, and Her-2/neu protein and P-gp were determined by flow cytometry （FCM）. The chemosensitivity of transfected cells to cisplatin （CDDP） was measured by MTT. Cell apoptosis detection kit （Annexin V method） was used to examine the drug induced apoptosis rate. Results： siRNA targeting Her-2/neu greatly reduced the cell surface expression of Her-2/neu protein and had no effect on P-gp. Consequently the inhibitory rate of CDDP in combination with siRNA targeting Her-2/neu was （67.1±2.3）%, while the inhibitory rates were （48.1±3.5）%, （46.3±5.9）% and （50.2±2.9）% in untreated control, empty vector and unrelated siRNA groups, respectively. The FCM results showed that the apoptosis rate of cells treated with CDDP combined with siRNAs-Her-2/neu was elevated when compared with unrelated siRNA group and empty vector group. Conclusion： Sequence specific siRNA targeting Her-2/neu was capable of enhancing the chemosensitivity of calu-3 cell to cisplatin.

关键词： Her-2/neu siRNA Lung adenocarcinoma cells Cisplatin

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汽车前轴断裂失效分析

热加工工艺 2010年第14期39卷 185-187页

作者：赵佳奇王井伟东风汽车有限公司商用车技术中心湖北武汉430056 太原理工大学材料科学与工程学院山西太原030024

对汽车前轴的断口形貌、化学成分、硬度及金相组织进行了测试分析。结果表明,前轴锻造成型后的热处理工艺不当,产生了网状及针状的铁素体组织并且晶粒粗大,降低了零件的冲击韧度和塑性,导致该部位的抗疲劳强度降低,从而造成汽车前轴发... 详细信息

对汽车前轴的断口形貌、化学成分、硬度及金相组织进行了测试分析。结果表明,前轴锻造成型后的热处理工艺不当,产生了网状及针状的铁素体组织并且晶粒粗大,降低了零件的冲击韧度和塑性,导致该部位的抗疲劳强度降低,从而造成汽车前轴发生疲劳断裂。

关键词：前轴失效分析疲劳断裂

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血流动力学不稳定骨盆骨折的治疗原则

第三军医大学学报 2009年第7期31卷 647-648页

作者：任明光王井伟禇建国王守山唐山市工人医院骨二科唐山063000

骨盆骨折是一种严重创伤,易合并大出血导致患者低血压、休克甚至死亡.血流动力学不稳定是指通过血流动力学监测观察到血液在循环系统中运动的作用力、流量和容积的不稳定状态,是休克的一种表现.

关键词：不稳定骨盆骨折复苏创伤控制内固定

逆行交锁髓内钉与微创内固定钢板修复股骨远端骨折的生物力学性能比较

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中国组织工程研究 2016年第44期20卷 6577-6582页

作者：张慧东王井伟白净唐山市工人医院骨二科河北省唐山市063000

背景:目前股骨远端骨折多采用微创内固定系统(LISS)钢板或逆行交锁髓内钉内固定治疗,但两种方法的选择尚有争议,且对其生物力学性能研究尚少。目的:比较逆行交锁髓内钉与LISS钢板置入内固定修复股骨远端骨折的生物力学稳定性。方法:取1... 详细信息

背景:目前股骨远端骨折多采用微创内固定系统(LISS)钢板或逆行交锁髓内钉内固定治疗,但两种方法的选择尚有争议,且对其生物力学性能研究尚少。目的:比较逆行交锁髓内钉与LISS钢板置入内固定修复股骨远端骨折的生物力学稳定性。方法:取12根尸体股骨标本,均为男性,X射线摄片排除损伤、骨密度异常及骨病标本。随机分成2组,制成相同标准AO分型A3型髁上骨折模型,分别用LISS钢板和逆行交锁髓内钉内固定。观察股骨标本承受轴向压缩时的抗压刚度和载荷100,300,500 N下的位移值,以及标本承受弯曲载荷时的抗弯强度。结果与结论:(1)在抵抗轴向变形能力(抗压刚度)方面,LISS钢板大于逆行交锁髓内钉(P0.05);(2)在100,300,500 N轴向压缩载荷作用下,LISS钢板组的位移均小于逆行交锁髓内钉组(P<0.05);(3)生物力学测试结果显示,内固定物置入修复股骨远端骨折时,逆行交锁髓内钉的刚度较低。LISS钢板既具有一定的变形性,使应力能够通过骨传导,又具有较强的刚度,且内固定牢固,可为骨折愈合提供优良的生物学环境,是修复股骨远端骨折的可靠选择。

关键词：股骨骨折内固定器生物力学组织工程骨科植入物骨植入物股骨远端骨折逆行交锁髓内钉 LISS钢板内固定

EFFECT OF SURVIVIN-siRNA-MEDIATED GENE SILENCING ON SURVIVIN EXPRESSION IN OSTEOSARCOMA CELL LINE MG-63

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Chinese Journal of Cancer Research 2006年第4期18卷 286-289页

作者：王井伟曹磊王宇付军田海梅刘义张伟 Department of Orthopaedic Surgery Tangshan Worker Hospital Hebei Medical University Department of Tumor Surgery the First Affiliated Hospital China Medical University Department of Thoracic Surgery Liaoning Electric Center Hospital Tumor Marker Research Center Cancer Hospital & Cancer Institute Chinese Academy of Medical Sciences

Objective： To study the inhibition of expression of Survivin gene by synthesized short Survivin-siRNA in osteosarcoma cell line MG-63. Methods： Chemically synthesized short Surviving-siRNA was transfected into osteosarcoma cell line MG-63. The Survivin mRNA and protein level were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction （RT-PCR） and flow cytometry （FCM）. The biological morphology and growth inhibition of MG-63 were observed with light microscopy and MTT assay, respectively. Results： Short siRNA targeting Survivin down-regulated the transcription and the protein level of Survivin oncogene. The proliferation of osteosarcoma cell line MG-63 was inhibited after transfection. Conclusion： Chemically synthesized short Survivin-siRNA can effectively inhibit Survivin expression and cell proliferation inosteosarcoma cell line MG-63 Survivin-siRNA mediated Survivin gene silencing may be a useful therapeutic strategy for osteosarcoma.

关键词： Survivin oncogene siRNA RNAi Osteosarcoma